免疫组织化学检测子宫颈癌盆腔淋巴结隐匿转移的探讨
免疫组织化学检测子宫颈癌盆腔淋巴结隐匿转移的探讨
应晔 高永良 倪型灏 孙文勇 张谷
关键词；盆腔淋巴结转移；宫颈癌；免疫组织化学 盆腔淋巴结转移是影响宫颈癌预后的重要因素。常规病理检查有一部分阳性淋巴结未能被检出，称之为隐匿转移。单克隆抗细胞角蛋白[cytokeratin (AE1/AE3),CK]、抗上皮膜抗原(EMA)能检测乳腺癌患者腋淋巴结的隐匿微小转移癌[1]。宫颈癌属上皮来源，CK检测对宫颈癌淋巴结转移的价值如何，文献报道极少。本研究探讨CK、EMA单克隆抗体对检测宫颈癌盆腔淋巴结隐匿转移的价值。
一、资料与方法
1. 研究对象： 选自1990年～1992年我院行根治性子宫切除加盆腔淋巴结清扫术的临床Ⅰb期及Ⅱa期宫颈癌患者33例。平均年龄53岁(31～70岁)。5年内死亡者15例，其中淋巴结阳性7例，阴性8例；存活5年以上者18例，其中淋巴结阳性3例，阴性15例。鳞癌28例，腺癌5例；病理分化程度：高分化2例，中分化24例，低分化 7例。
, http://www.100md.com
2. 方法： 所有病理切片均重新复核。对盆腔淋巴结行5 μm的连续切片，在同一切片上除苏木精和伊红(HE)染色外，应用免疫组织化学(免疫组化)EnVision法[2]对33例患者的503个淋巴结分别行CK(1∶50)及EMA(1∶50)抗体免疫组化检测。第一抗体和EnVision System复合物由美国DAKO公司提供。判断标准:肿瘤细胞浆内或细胞膜上见棕黄色颗粒者为阳性显色瘤细胞，根据阳性显色瘤细胞数量的多少分为，阴性: 瘤细胞无阳性显色；阳性：1%～50%瘤细胞呈阳性显色；强阳性：≥50%的瘤细胞呈阳性显色。
3.统计方法：两个样本率的比较采用U检验。
二、结果
33例患者中，10例常规HE染色检查呈阳性的43个盆腔转移淋巴结中，CK及EMA染色均呈阳性；HE染色检查阴性的460个无转移淋巴结中，有3个淋巴结CK及EMA同时呈阳性(隐匿转移)，占0.7% (3/460)。3个有隐匿转移的淋巴结分别属于3例患者，其中1例存在其他淋巴结HE染色检查阳性者，2例为HE染色阴性，即CK、EMA检出2例隐匿转移患者。3例淋巴结有隐匿转移者中，1例CK及EMA均呈强阳性，2例CK呈强阳性，而EMA呈阳性。CK及EMA抗原的阳性表达率为36.4%(12/33例)；隐匿转移的阳性表达率为8.7%(2/23例)。3例淋巴结有隐匿转移者中，2例为中分化鳞癌，1例为低分化鳞癌；隐匿转移癌组织2例位于淋巴结边缘窦，1例在淋巴结副髓质区，为微小癌灶或单个癌细胞。5例腺癌中，均未发现隐匿转移。33例患者均随访5年以上，盆腔淋巴结阳性者(包括隐匿转移2例)5年生存率为25%(3/12例)，隐匿转移患者2例，5年内均死于盆腔复发；盆腔淋巴结阴性者5年生存率为57%(12/21例)，两者比较，差异无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
三、讨论
1.检测宫颈癌盆腔淋巴结有无转移的重要性： 宫颈癌盆腔淋巴结有、无转移患者的5年生存率分别为45%和90%[3]。Yeh等[4]报道，临床Ⅰb和Ⅱa期宫颈癌中，无淋巴结转移者5年生存率为81%，有转移者为53%，单个淋巴结转移较多个转移者生存时间长。对淋巴结有转移的患者术后辅助放射治疗可减少盆腔复发，提高治愈率，因而成为常规治疗。但盆腔淋巴结无转移者仍有一定的复发率，探讨其与预后有关的因素，将有助于识别淋巴结阴性却具有复发、转移可能的高危患者。对高危者，术后辅助放射治疗将进一步提高生存率，而对低危者则可避免不必要的过分治疗及可能带来的毒副反应。因此，检测宫颈癌盆腔淋巴结有无转移至关重要。
2.检测CK及EMA对宫颈癌盆腔淋巴结隐匿转移的价值： 目前，宫颈癌盆腔淋巴结转移的诊断主要根据HE染色后组织切片的病理形态特点(即癌细胞的异型性)进行判断，有一定局限性和主观性，尤其当细胞异型性不明显或癌灶较小时，极难识别，常造成误诊或漏诊[5]。近年来，采用免疫组化检测肿瘤根治手术后标本的淋巴结，使用高度特异性和高效价的抗体检测相应抗原，使癌细胞染成特殊颜色而明显区别于背景淋巴结，提高了显微镜检查对癌细胞的识别力，甚至可以识别单个癌细胞，故能提高隐匿转移的检出率。曾有对比研究发现，HE染色仅可检出≥50个细胞的微小转移癌灶，而CK抗体则敏感性更高[6]。另有报道，HE染色发现的转移淋巴结，通过CK抗体均可检出，而多数单个癌细胞或非常小的癌灶的转移，HE染色却无法检出，常需通过CK抗体方能检出[7]。本研究也说明，CK及EMA抗体检测适用于HE染色不易鉴别或难以发现的淋巴结隐匿转移。
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3.隐匿转移与宫颈癌预后的关系：本研究中，宫颈癌盆腔淋巴结存在隐匿转移者，5年内均死于盆腔复发，生存率明显低于淋巴结阴性者。这可能与淋巴结转移的漏诊，患者术后未及时接受辅助治疗有关。提示，CK及EMA检测淋巴结隐匿转移可能对进一步治疗有一定指导意义，具有临床应用价值。但因病例数少，需积累资料进一步研究。
作者单位：应晔(310022 杭州，浙江省肿瘤医院妇瘤科)
高永良(310022 杭州，浙江省肿瘤医院妇瘤科)
倪型灏(310022 杭州，浙江省肿瘤医院病理科)
孙文勇(310022 杭州，浙江省肿瘤医院病理科)
张谷(310022 杭州，浙江省肿瘤医院病理科)
参考文献
, 百拇医药
1，陈朝伦,卢小梅,黎英,等. 乳腺癌局部淋巴结内隐匿性微小癌转移的免疫研究. 中国肿瘤临床，1996，23：851-854.
2，马大烈，郑青渝，李全华，等.微波 EnVision 免疫组织化学技术及应用. 中华病理学杂志，1998，27:153-154.
3，van Bommel PFJ, Kenmans P, Helmerhorst TJM, et al. Expression of cytokeratin 10、13 and involucrin as prognostic factors in low stage squamous cell carcinoma of the uterine cervix. Cancer, 1994, 74 : 2314-2320.
4，Yeh SA, Leung SW, Wang CJ. Postoperative radiotherapy in early stage carcinoma of the uterine cervix: treatment results and prognostic factors. Gynecol Oncol， 1999, 72: 10-15.
5，邵永胜，彭开勤，张彤,等. 细胞角蛋白免疫组化染色在乳腺癌淋巴结转移检测中的价值. 中国实用外科杂志，1997，17：89-90.
6，黄伟良，徐建勋，杨莉芳.抗角蛋白抗体对Ⅰ期肺癌淋巴结检测的临床意义. 中国癌症杂志，1999，9：43-44.
7，Nasser IA, Lee AK, Bosari S, et al. Occult axillary lymph node metastases in “node - negative” breast carcinoma. Hum Path, 1993, 24: 950-957., http://www.100md.com
应晔 高永良 倪型灏 孙文勇 张谷
关键词；盆腔淋巴结转移；宫颈癌；免疫组织化学 盆腔淋巴结转移是影响宫颈癌预后的重要因素。常规病理检查有一部分阳性淋巴结未能被检出，称之为隐匿转移。单克隆抗细胞角蛋白[cytokeratin (AE1/AE3),CK]、抗上皮膜抗原(EMA)能检测乳腺癌患者腋淋巴结的隐匿微小转移癌[1]。宫颈癌属上皮来源，CK检测对宫颈癌淋巴结转移的价值如何，文献报道极少。本研究探讨CK、EMA单克隆抗体对检测宫颈癌盆腔淋巴结隐匿转移的价值。
一、资料与方法
1. 研究对象： 选自1990年～1992年我院行根治性子宫切除加盆腔淋巴结清扫术的临床Ⅰb期及Ⅱa期宫颈癌患者33例。平均年龄53岁(31～70岁)。5年内死亡者15例，其中淋巴结阳性7例，阴性8例；存活5年以上者18例，其中淋巴结阳性3例，阴性15例。鳞癌28例，腺癌5例；病理分化程度：高分化2例，中分化24例，低分化 7例。
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2. 方法： 所有病理切片均重新复核。对盆腔淋巴结行5 μm的连续切片，在同一切片上除苏木精和伊红(HE)染色外，应用免疫组织化学(免疫组化)EnVision法[2]对33例患者的503个淋巴结分别行CK(1∶50)及EMA(1∶50)抗体免疫组化检测。第一抗体和EnVision System复合物由美国DAKO公司提供。判断标准:肿瘤细胞浆内或细胞膜上见棕黄色颗粒者为阳性显色瘤细胞，根据阳性显色瘤细胞数量的多少分为，阴性: 瘤细胞无阳性显色；阳性：1%～50%瘤细胞呈阳性显色；强阳性：≥50%的瘤细胞呈阳性显色。
3.统计方法：两个样本率的比较采用U检验。
二、结果
33例患者中，10例常规HE染色检查呈阳性的43个盆腔转移淋巴结中，CK及EMA染色均呈阳性；HE染色检查阴性的460个无转移淋巴结中，有3个淋巴结CK及EMA同时呈阳性(隐匿转移)，占0.7% (3/460)。3个有隐匿转移的淋巴结分别属于3例患者，其中1例存在其他淋巴结HE染色检查阳性者，2例为HE染色阴性，即CK、EMA检出2例隐匿转移患者。3例淋巴结有隐匿转移者中，1例CK及EMA均呈强阳性，2例CK呈强阳性，而EMA呈阳性。CK及EMA抗原的阳性表达率为36.4%(12/33例)；隐匿转移的阳性表达率为8.7%(2/23例)。3例淋巴结有隐匿转移者中，2例为中分化鳞癌，1例为低分化鳞癌；隐匿转移癌组织2例位于淋巴结边缘窦，1例在淋巴结副髓质区，为微小癌灶或单个癌细胞。5例腺癌中，均未发现隐匿转移。33例患者均随访5年以上，盆腔淋巴结阳性者(包括隐匿转移2例)5年生存率为25%(3/12例)，隐匿转移患者2例，5年内均死于盆腔复发；盆腔淋巴结阴性者5年生存率为57%(12/21例)，两者比较，差异无显著性(P>0.05)。
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三、讨论
1.检测宫颈癌盆腔淋巴结有无转移的重要性： 宫颈癌盆腔淋巴结有、无转移患者的5年生存率分别为45%和90%[3]。Yeh等[4]报道，临床Ⅰb和Ⅱa期宫颈癌中，无淋巴结转移者5年生存率为81%，有转移者为53%，单个淋巴结转移较多个转移者生存时间长。对淋巴结有转移的患者术后辅助放射治疗可减少盆腔复发，提高治愈率，因而成为常规治疗。但盆腔淋巴结无转移者仍有一定的复发率，探讨其与预后有关的因素，将有助于识别淋巴结阴性却具有复发、转移可能的高危患者。对高危者，术后辅助放射治疗将进一步提高生存率，而对低危者则可避免不必要的过分治疗及可能带来的毒副反应。因此，检测宫颈癌盆腔淋巴结有无转移至关重要。
2.检测CK及EMA对宫颈癌盆腔淋巴结隐匿转移的价值： 目前，宫颈癌盆腔淋巴结转移的诊断主要根据HE染色后组织切片的病理形态特点(即癌细胞的异型性)进行判断，有一定局限性和主观性，尤其当细胞异型性不明显或癌灶较小时，极难识别，常造成误诊或漏诊[5]。近年来，采用免疫组化检测肿瘤根治手术后标本的淋巴结，使用高度特异性和高效价的抗体检测相应抗原，使癌细胞染成特殊颜色而明显区别于背景淋巴结，提高了显微镜检查对癌细胞的识别力，甚至可以识别单个癌细胞，故能提高隐匿转移的检出率。曾有对比研究发现，HE染色仅可检出≥50个细胞的微小转移癌灶，而CK抗体则敏感性更高[6]。另有报道，HE染色发现的转移淋巴结，通过CK抗体均可检出，而多数单个癌细胞或非常小的癌灶的转移，HE染色却无法检出，常需通过CK抗体方能检出[7]。本研究也说明，CK及EMA抗体检测适用于HE染色不易鉴别或难以发现的淋巴结隐匿转移。
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3.隐匿转移与宫颈癌预后的关系：本研究中，宫颈癌盆腔淋巴结存在隐匿转移者，5年内均死于盆腔复发，生存率明显低于淋巴结阴性者。这可能与淋巴结转移的漏诊，患者术后未及时接受辅助治疗有关。提示，CK及EMA检测淋巴结隐匿转移可能对进一步治疗有一定指导意义，具有临床应用价值。但因病例数少，需积累资料进一步研究。
作者单位：应晔(310022 杭州，浙江省肿瘤医院妇瘤科)
高永良(310022 杭州，浙江省肿瘤医院妇瘤科)
倪型灏(310022 杭州，浙江省肿瘤医院病理科)
孙文勇(310022 杭州，浙江省肿瘤医院病理科)
张谷(310022 杭州，浙江省肿瘤医院病理科)
参考文献
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1，陈朝伦,卢小梅,黎英,等. 乳腺癌局部淋巴结内隐匿性微小癌转移的免疫研究. 中国肿瘤临床，1996，23：851-854.
2，马大烈，郑青渝，李全华，等.微波 EnVision 免疫组织化学技术及应用. 中华病理学杂志，1998，27:153-154.
3，van Bommel PFJ, Kenmans P, Helmerhorst TJM, et al. Expression of cytokeratin 10、13 and involucrin as prognostic factors in low stage squamous cell carcinoma of the uterine cervix. Cancer, 1994, 74 : 2314-2320.
4，Yeh SA, Leung SW, Wang CJ. Postoperative radiotherapy in early stage carcinoma of the uterine cervix: treatment results and prognostic factors. Gynecol Oncol， 1999, 72: 10-15.
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6，黄伟良，徐建勋，杨莉芳.抗角蛋白抗体对Ⅰ期肺癌淋巴结检测的临床意义. 中国癌症杂志，1999，9：43-44.
7，Nasser IA, Lee AK, Bosari S, et al. Occult axillary lymph node metastases in “node - negative” breast carcinoma. Hum Path, 1993, 24: 950-957., http://www.100md.com