应用平均红细胞体积测定法及红细胞脆性一管定量法筛查地中海贫血
应用平均红细胞体积测定法及红细胞脆性一管定量法筛查地中海贫血
邓捷 刘新质 刘颖琳 曾瑞萍
摘 要 目的 探讨平均红细胞体积(MCV)测定法(MCV法)及红细胞脆性一管定量法(一管法)在筛查地中海贫血中的准确性及其应用价值。方法 用MCV法和一管法检查989对夫妇，并随机抽取其中79对进行聚合酶链反应(PCR)法检测，同时检测孕妇血清铁蛋白以排除缺铁性贫血。结果 MCV法的轻型地中海贫血检出率为9.0%、敏感度为98.9%，一管法的轻型地中海贫血检出率为8.1%、敏感度为88.6%，两者比较，差异有显著性(P均<0.05)；MCV法与一管法诊断轻型地中海贫血的特异度比较，差异无显著性(P>0.05)。结论 MCV法与一管法均能有效地检出轻型地中海贫血患者，且MCV法对轻型地中海贫血具有较好的筛查、诊断价值。
, 百拇医药
关键词：地中海贫血；产前诊断；红细胞指数
地中海贫血是一种遗传异质性很大的遗传病，目前国际上用于明确诊断地中海贫血的方法是聚合酶链反应(PCR)技术结合其他分子生物学手段检测α、β地中海贫血基因[1，2]，但PCR技术因条件要求高，而限制了其用于临床轻型地中海贫血的普查。国外已较普遍应用平均红细胞体积(MCV)低于正常值来筛查地中海贫血基因携带者[3]。本研究比较了MCV测定法(MCV法)与红细胞脆性一管定量筛查法(一管法)筛查地中海贫血的准确性，并以地中海贫血基因PCR诊断结果为对照。现将结果报道如下。
资料与方法
一、资料来源
1998年4月至1999年3月，我院产科门诊及优生门诊就诊的生育期夫妇989对(1978例)。每例受检者同时用血液自动分析仪检测MCV、用一管法检测红细胞脆性。同时从受检者中随机选择了79对(158 例)用PCR技术检测α、β地中海贫血基因，并行血清铁蛋白检测以排除缺铁性贫血。
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二、方法及诊断标准
1. MCV：用美国雅培公司制造的ABBOTT-1600型血液分析仪测定。成年男女MCV的正常值为80～93 fl(μm3)。
2.一管法[4]：正常值为溶血百分率>60%，如<60%可判定为地中海贫血(轻型，携带者)。
3. 地中海贫血基因型分析：提取外周血白细胞DNA后，α珠蛋白基因分析采用PCR扩增、琼脂糖电泳[1]；β珠蛋白基因分析用PCR结合反向点杂交(RDB)[2]。
4. 血清铁蛋白：用放射免疫法测定，放射免疫试剂盒购自天津九鼎医学生物工程有限公司。
三、统计学方法
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采用SPSS统计软件包，用配对分类资料的χ2检验，随机化设计资料均数的t检验。
结果
一、 MCV法与一管法轻型地中海贫血的检出率比较
1978例受检者筛查结果表明，MCV法的轻型地中海贫血检出率为9.0%(178/1978)，一管法检出率为8.1%(161/1978)。两者比较，差异有显著性(P<0.05)。
二、地中海贫血PCR检测结果
158例α、β地中海贫血基因PCR检测，确诊轻型地中海贫血患者88例，其中轻型α地中海贫血47 例、轻型β地中海贫血41 例；其他地中海贫血突变类型7例(这7例未列入检验效率的比较)。158例受检者经血清铁蛋白检测，无一例患缺铁性贫血。
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三、 MCV法与一管法的敏感度与特异度比较
PCR诊断的88例轻型地中海贫血患者中，MCV法检测阳性87例，一管法检测阳性78例，MCV法诊断轻型地中海贫血的敏感度为98.9%，一管法诊断轻型地中海贫血的敏感度为88.6%。两者比较，差异有显著性(P<0.05)。PCR诊断的63例非地中海贫血者中，MCV法检测阴性50例，一管法检测阴性48例，MCV法诊断的特异度为79.4%，一管法诊断的特异度为76.2%，两者比较，差异无显著性(P>0.05)。
四、 MCV法及一管法检测值与β地中海贫血基因突变类型的关系
将β地中海贫血杂合子按基因突变类型分为5组，检测结果显示：β+地中海贫血突变TATA box nt-28A→G杂合子的MCV法、一管法检测均值，显著高于其余4种β0地中海贫血基因突变杂合子(P均<0.05)，见表1。
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讨论
一、MCV法及一管法对轻型地中海贫血的诊断价值
国内外研究表明，积极开展地中海贫血基因携带者的人群筛查，指导婚配及产前基因诊断，预防血红蛋白 Bart′s水肿胎儿和重型β地中海贫血患儿的出生,是控制地中海贫血的发病率，特别是重型地中海贫血发病率的主要方法。
轻型地中海贫血的筛查，国际上并无统一的临床实验方法。传统的血红蛋白电泳法检测血红蛋白A2含量，只能筛查出轻型β地中海贫血。脐血血红蛋白电泳检测血红蛋白Bart′s，筛查轻型α地中海贫血,不适用于生后3个月以上的婴幼儿及成人。
MCV值低的贫血称小细胞性贫血，常见的有轻型地中海贫血与缺铁性贫血[5]。目前，国外已较普遍应用MCV来筛查地中海贫血基因携带者。
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一管法是利用地中海贫血基因携带者红细胞脆性降低的特点，将红细胞在不同渗透压溶液中的溶解度之比换算成红细胞溶血百分率，具有半定量测定红细胞脆性的特点。若红细胞溶血百分率<60%，即可怀疑为轻型地中海贫血。此方法简单、快速、仪器设备简便，特别适用于在医疗设备较缺乏的基层医疗单位。
本研究结果与曾瑞萍[6]、Xu等[2]报道的广州地区轻型地中海贫血的发病率相近,高于朱琳[7]用血红蛋白电泳等方法获得的轻型地中海贫血检出率。对照PCR检测结果，MCV法诊断轻型地中海贫血的敏感度为98.9%,特异度为79.4%,与Lau等[8]及Aydinok[9]报道的结果相近。对照PCR检测结果，一管法诊断轻型地中海贫血的敏感度为88.6%,特异度为76.2%,同样有较好的诊断效果，但MCV法比一管法具有更好的筛查、诊断价值。
表1 MCV法及一管法检测值与β地中海贫血基因突变类型的关系(%，±s)
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检测方法
例数
突变类型
CD41-42(13例)
654C→T(11例)
CD17→0(6例)
CD71-72(+A)(4例)
28A→G(7例)
MCV法
41
65.1± 4.1
66.9± 2.0
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63.4± 1.9
63.4± 4.2
72.1±2.5
一管法
41
36.5±14.5
45.1±15.1
39.4±10.0
42.7±15.4
63.1±4.4
注：TATA box nt-28A→G者MCV法、一管法检测值均高于CD41-42(-4 bp)、IVS-2nt 654C→T、CD17→0、CD71-72(+A)者同类项
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二、影响一管法敏感度的因素
本研究中，7例β+突变TATA box nt-28A→G杂合子中有5例患者一管法检测结果高于60%，也高于其他4种β0 基因突变杂合子，差异有显著性。提示，对某些珠蛋白肽链合成受损程度较轻的地中海贫血基因突变类型，一管法检测值可能高于一般突变类型。一管法的截断值60%对某些珠蛋白肽链合成受损程度较轻的地中海贫血突变类型来说可能偏低，造成了检测结果的假阴性。此外，一管法系人工操作，不同操作人员技能精确及娴熟程度的不同，可能会影响筛查结果的准确性。
三、可能造成两种筛查方法检测结果假阳性的原因
其他少见的小细胞低色素性贫血如血红蛋白病、非缺失型α地中海贫血、某些慢性内科疾病等，也可引起MCV的下降和红细胞脆性的降低[5]，一管法检测值也可能降低。因PCR技术无法诊断上述其他类型的小细胞低色素性贫血，因而可能是造成两种筛查方法检测结果假阳性的原因。
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本研究用MCV法、一管法与PCR检测对照的结果表明，MCV法与一管法均可有效地检出轻型地中海贫血患者。而且MCV法诊断轻型地中海贫血的敏感度高于一管法。目前大部分市、县级医院都配备有血液自动分析仪，MCV法筛查轻型地中海贫血具有良好应用前景。一管法需要的实验室条件简便，操作简单、快速，可弥补MCV法的不足，并具有半定量的特点，特别适合医疗设备较缺乏的各级基层医院或妇幼保健院，进行轻型地中海贫血的筛查及临床检验。
综上所述，在有血液自动分析仪的医院，可应用MCV法筛查轻型地中海贫血；在没有血液自动分析仪的基层医院及妇幼保健院，开展一管法代替MCV法，也可进行轻型地中海贫血的筛查。MCV法和(或)一管法检测结果阳性者，应建议到有条件的医院行地中海贫血PCR检测确诊。夫妇均为轻型地中海贫血者，应建议于妊娠早中期行产前诊断，重型地中海贫血者应及时终止妊娠，在地中海贫血高发区，从第一胎起就有效地防止血红蛋白Bart′s 水肿胎儿及重型β地中海贫血患儿的出生。
, 百拇医药 作者单位：邓捷(510120 广州，中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科)
刘新质(510120 广州，中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科)
刘颖琳(510120 广州，中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科)
曾瑞萍(510120 广州，中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科)
参考文献
1，钟梅，金志魁，徐湘民，等. 聚合酶链反应技术用于缺失型α地中海贫血的产前诊断. 中华妇产科杂志， 1995，30：597-599.
2，Xu X, Liao C, Liu Z, et al. Antenatal screening and fetal diagnosis of beta-thalassemia in a Chinese population: prevalence of the beta-thalassemia trait in the Guangzhou area of China. Hum Genet， 1996, 98:199-202.
, http://www.100md.com
3，Kenneth WD, Boehm C, James R, et al. Practical guide to the diagnosis of thalassemia. Am J M Genetics, 1996, 62:29-37.
4，杜传书. 地中海贫血的研究现状. 中华医学遗传学杂志, 1996，13：257-258.
5，Bessman JD, Glimer PR, Frank H, et al. Improved Classification of Anemias by MCV and RDW. Am J Clin Pathol, 1983, 80:322-326.
6，曾瑞萍，杜传书，胡彬，等. 70例α珠蛋白生成障碍性贫血的产前基因诊断. 中华血液学杂志, 1992，13：227-229.
, http://www.100md.com 7，朱琳. 广州市天河区婚检者地中海贫血的筛查. 实用医学杂志, 1996，12：446.
8，Lau YL, Chan LC, Chan YY, et al. Prevalence and genotype of alpha- and beta-thalassemia carriers in HongKong: implication for population screening. N Engl J Med, 1997, 336: 1298-1230.
9，Aydinok Y. Prevalence of the beta-thalassemia trait in 1124 students from Aegean region of Turkey. J Trop Pediatr, 1997, 43:184-185., 百拇医药
邓捷 刘新质 刘颖琳 曾瑞萍
摘 要 目的 探讨平均红细胞体积(MCV)测定法(MCV法)及红细胞脆性一管定量法(一管法)在筛查地中海贫血中的准确性及其应用价值。方法 用MCV法和一管法检查989对夫妇，并随机抽取其中79对进行聚合酶链反应(PCR)法检测，同时检测孕妇血清铁蛋白以排除缺铁性贫血。结果 MCV法的轻型地中海贫血检出率为9.0%、敏感度为98.9%，一管法的轻型地中海贫血检出率为8.1%、敏感度为88.6%，两者比较，差异有显著性(P均<0.05)；MCV法与一管法诊断轻型地中海贫血的特异度比较，差异无显著性(P>0.05)。结论 MCV法与一管法均能有效地检出轻型地中海贫血患者，且MCV法对轻型地中海贫血具有较好的筛查、诊断价值。
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关键词：地中海贫血；产前诊断；红细胞指数
地中海贫血是一种遗传异质性很大的遗传病，目前国际上用于明确诊断地中海贫血的方法是聚合酶链反应(PCR)技术结合其他分子生物学手段检测α、β地中海贫血基因[1，2]，但PCR技术因条件要求高，而限制了其用于临床轻型地中海贫血的普查。国外已较普遍应用平均红细胞体积(MCV)低于正常值来筛查地中海贫血基因携带者[3]。本研究比较了MCV测定法(MCV法)与红细胞脆性一管定量筛查法(一管法)筛查地中海贫血的准确性，并以地中海贫血基因PCR诊断结果为对照。现将结果报道如下。
资料与方法
一、资料来源
1998年4月至1999年3月，我院产科门诊及优生门诊就诊的生育期夫妇989对(1978例)。每例受检者同时用血液自动分析仪检测MCV、用一管法检测红细胞脆性。同时从受检者中随机选择了79对(158 例)用PCR技术检测α、β地中海贫血基因，并行血清铁蛋白检测以排除缺铁性贫血。
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二、方法及诊断标准
1. MCV：用美国雅培公司制造的ABBOTT-1600型血液分析仪测定。成年男女MCV的正常值为80～93 fl(μm3)。
2.一管法[4]：正常值为溶血百分率>60%，如<60%可判定为地中海贫血(轻型，携带者)。
3. 地中海贫血基因型分析：提取外周血白细胞DNA后，α珠蛋白基因分析采用PCR扩增、琼脂糖电泳[1]；β珠蛋白基因分析用PCR结合反向点杂交(RDB)[2]。
4. 血清铁蛋白：用放射免疫法测定，放射免疫试剂盒购自天津九鼎医学生物工程有限公司。
三、统计学方法
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采用SPSS统计软件包，用配对分类资料的χ2检验，随机化设计资料均数的t检验。
结果
一、 MCV法与一管法轻型地中海贫血的检出率比较
1978例受检者筛查结果表明，MCV法的轻型地中海贫血检出率为9.0%(178/1978)，一管法检出率为8.1%(161/1978)。两者比较，差异有显著性(P<0.05)。
二、地中海贫血PCR检测结果
158例α、β地中海贫血基因PCR检测，确诊轻型地中海贫血患者88例，其中轻型α地中海贫血47 例、轻型β地中海贫血41 例；其他地中海贫血突变类型7例(这7例未列入检验效率的比较)。158例受检者经血清铁蛋白检测，无一例患缺铁性贫血。
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三、 MCV法与一管法的敏感度与特异度比较
PCR诊断的88例轻型地中海贫血患者中，MCV法检测阳性87例，一管法检测阳性78例，MCV法诊断轻型地中海贫血的敏感度为98.9%，一管法诊断轻型地中海贫血的敏感度为88.6%。两者比较，差异有显著性(P<0.05)。PCR诊断的63例非地中海贫血者中，MCV法检测阴性50例，一管法检测阴性48例，MCV法诊断的特异度为79.4%，一管法诊断的特异度为76.2%，两者比较，差异无显著性(P>0.05)。
四、 MCV法及一管法检测值与β地中海贫血基因突变类型的关系
将β地中海贫血杂合子按基因突变类型分为5组，检测结果显示：β+地中海贫血突变TATA box nt-28A→G杂合子的MCV法、一管法检测均值，显著高于其余4种β0地中海贫血基因突变杂合子(P均<0.05)，见表1。
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讨论
一、MCV法及一管法对轻型地中海贫血的诊断价值
国内外研究表明，积极开展地中海贫血基因携带者的人群筛查，指导婚配及产前基因诊断，预防血红蛋白 Bart′s水肿胎儿和重型β地中海贫血患儿的出生,是控制地中海贫血的发病率，特别是重型地中海贫血发病率的主要方法。
轻型地中海贫血的筛查，国际上并无统一的临床实验方法。传统的血红蛋白电泳法检测血红蛋白A2含量，只能筛查出轻型β地中海贫血。脐血血红蛋白电泳检测血红蛋白Bart′s，筛查轻型α地中海贫血,不适用于生后3个月以上的婴幼儿及成人。
MCV值低的贫血称小细胞性贫血，常见的有轻型地中海贫血与缺铁性贫血[5]。目前，国外已较普遍应用MCV来筛查地中海贫血基因携带者。
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一管法是利用地中海贫血基因携带者红细胞脆性降低的特点，将红细胞在不同渗透压溶液中的溶解度之比换算成红细胞溶血百分率，具有半定量测定红细胞脆性的特点。若红细胞溶血百分率<60%，即可怀疑为轻型地中海贫血。此方法简单、快速、仪器设备简便，特别适用于在医疗设备较缺乏的基层医疗单位。
本研究结果与曾瑞萍[6]、Xu等[2]报道的广州地区轻型地中海贫血的发病率相近,高于朱琳[7]用血红蛋白电泳等方法获得的轻型地中海贫血检出率。对照PCR检测结果，MCV法诊断轻型地中海贫血的敏感度为98.9%,特异度为79.4%,与Lau等[8]及Aydinok[9]报道的结果相近。对照PCR检测结果，一管法诊断轻型地中海贫血的敏感度为88.6%,特异度为76.2%,同样有较好的诊断效果，但MCV法比一管法具有更好的筛查、诊断价值。
表1 MCV法及一管法检测值与β地中海贫血基因突变类型的关系(%，±s)
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检测方法
例数
突变类型
CD41-42(13例)
654C→T(11例)
CD17→0(6例)
CD71-72(+A)(4例)
28A→G(7例)
MCV法
41
65.1± 4.1
66.9± 2.0
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63.4± 1.9
63.4± 4.2
72.1±2.5
一管法
41
36.5±14.5
45.1±15.1
39.4±10.0
42.7±15.4
63.1±4.4
注：TATA box nt-28A→G者MCV法、一管法检测值均高于CD41-42(-4 bp)、IVS-2nt 654C→T、CD17→0、CD71-72(+A)者同类项
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二、影响一管法敏感度的因素
本研究中，7例β+突变TATA box nt-28A→G杂合子中有5例患者一管法检测结果高于60%，也高于其他4种β0 基因突变杂合子，差异有显著性。提示，对某些珠蛋白肽链合成受损程度较轻的地中海贫血基因突变类型，一管法检测值可能高于一般突变类型。一管法的截断值60%对某些珠蛋白肽链合成受损程度较轻的地中海贫血突变类型来说可能偏低，造成了检测结果的假阴性。此外，一管法系人工操作，不同操作人员技能精确及娴熟程度的不同，可能会影响筛查结果的准确性。
三、可能造成两种筛查方法检测结果假阳性的原因
其他少见的小细胞低色素性贫血如血红蛋白病、非缺失型α地中海贫血、某些慢性内科疾病等，也可引起MCV的下降和红细胞脆性的降低[5]，一管法检测值也可能降低。因PCR技术无法诊断上述其他类型的小细胞低色素性贫血，因而可能是造成两种筛查方法检测结果假阳性的原因。
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本研究用MCV法、一管法与PCR检测对照的结果表明，MCV法与一管法均可有效地检出轻型地中海贫血患者。而且MCV法诊断轻型地中海贫血的敏感度高于一管法。目前大部分市、县级医院都配备有血液自动分析仪，MCV法筛查轻型地中海贫血具有良好应用前景。一管法需要的实验室条件简便，操作简单、快速，可弥补MCV法的不足，并具有半定量的特点，特别适合医疗设备较缺乏的各级基层医院或妇幼保健院，进行轻型地中海贫血的筛查及临床检验。
综上所述，在有血液自动分析仪的医院，可应用MCV法筛查轻型地中海贫血；在没有血液自动分析仪的基层医院及妇幼保健院，开展一管法代替MCV法，也可进行轻型地中海贫血的筛查。MCV法和(或)一管法检测结果阳性者，应建议到有条件的医院行地中海贫血PCR检测确诊。夫妇均为轻型地中海贫血者，应建议于妊娠早中期行产前诊断，重型地中海贫血者应及时终止妊娠，在地中海贫血高发区，从第一胎起就有效地防止血红蛋白Bart′s 水肿胎儿及重型β地中海贫血患儿的出生。
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刘新质(510120 广州，中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科)
刘颖琳(510120 广州，中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科)
曾瑞萍(510120 广州，中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科)
参考文献
1，钟梅，金志魁，徐湘民，等. 聚合酶链反应技术用于缺失型α地中海贫血的产前诊断. 中华妇产科杂志， 1995，30：597-599.
2，Xu X, Liao C, Liu Z, et al. Antenatal screening and fetal diagnosis of beta-thalassemia in a Chinese population: prevalence of the beta-thalassemia trait in the Guangzhou area of China. Hum Genet， 1996, 98:199-202.
, http://www.100md.com
3，Kenneth WD, Boehm C, James R, et al. Practical guide to the diagnosis of thalassemia. Am J M Genetics, 1996, 62:29-37.
4，杜传书. 地中海贫血的研究现状. 中华医学遗传学杂志, 1996，13：257-258.
5，Bessman JD, Glimer PR, Frank H, et al. Improved Classification of Anemias by MCV and RDW. Am J Clin Pathol, 1983, 80:322-326.
6，曾瑞萍，杜传书，胡彬，等. 70例α珠蛋白生成障碍性贫血的产前基因诊断. 中华血液学杂志, 1992，13：227-229.
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8，Lau YL, Chan LC, Chan YY, et al. Prevalence and genotype of alpha- and beta-thalassemia carriers in HongKong: implication for population screening. N Engl J Med, 1997, 336: 1298-1230.
9，Aydinok Y. Prevalence of the beta-thalassemia trait in 1124 students from Aegean region of Turkey. J Trop Pediatr, 1997, 43:184-185., 百拇医药