沙眼衣原体感染输卵管性不孕患者输卵管液中肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的测定
沙眼衣原体感染输卵管性不孕患者输卵管液中肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的测定
李海燕 梁占光
摘 要 目的 探讨沙眼衣原体(CT)感染所致输卵管性不孕患者输卵管液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平及其意义。方法 用酶联免疫吸附试验法测定22例CT感染输卵管性不孕(A组)、23例非CT感染输卵管性不孕(B组)及19例已生育输卵管正常妇女(对照组)输卵管液中TNF- α和IL-6 的水平。结果 A 组TNF-α的水平为178 ng/L，高于对照组的124 ng/L(P<0.01)；A组中输卵管阻塞者TNF-α为199 ng/L，高于粘连者的142 ng/L(P<0.01)。A 组IL-6的水平为681 ng/L，高于B组的264 ng/L及对照组的229 ng/L(P均<0.01)，B组与对照组之间比较差异无显著性(P>0.05)。结论 无症状输卵管CT感染可使输卵管液中TNF-α和IL-6升高，其中TNF-α与输卵管损伤程度有关。TNF-α越高，损伤越重。
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关键词：衣原体，沙眼；输卵管疾病；不育，女(雌)性；肿瘤坏死因子；白细胞介素6
沙眼衣原体(chlamydia trachomatis，CT)与输卵管性不孕(tubal factor infertility，TFI)关系密切。本研究检测输卵管液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6) 的水平，探讨CT感染TFI的发病机理。
资料与方法
一、研究对象
为1998年10月至12月在我科因TFI作输卵管粘连分离手术的45例患者及19例(对照组，输卵管外观正常)因绝育后复通或妇科良性肿瘤行卵巢囊肿剥出及子宫切除手术者。全部病例均于术中取输卵管液进行CT-DNA聚合酶链反应( PCR)检测，CT-DNA阳性的22例TFI为A组，阴性的23例TFI为B组，对照组CT-DNA均为阴性。
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A组及B组平均27岁，不孕时间3年，原发性不孕A组占41%(9/22)，B组占52%(12/23)。对照组平均年龄34岁，包括绝育术后复通、子宫肌瘤、卵巢囊肿及功能失调性子宫出血等患者。
二、研究方法
1.标本收集及处理： 采用国产定量滤纸(2.5 mm×0.6 mm)取输卵管液[1]，吸液量为(23.2±0.3) μl。此滤纸片血清蛋白回收率为99.2%～101.8%[2]。术中将3张滤纸条分别置入输卵管腔中，浸透输卵管液后放入离心管，加入800 μl生理盐水。所有标本均在-20℃保存，集中测定。
2.CT-DNA、TNF-α、IL-6的检测：CT-DNA采用PCR法，试剂盒由伊利康生物技术有限公司提供，引物扩增产生400 bp片段产物。采用酶联免疫吸附法检测TNF-α及IL-6，试剂盒购于深圳晶美生物工程公司。方法是各取稀释浓度的标准品23.23 μl加入800 μl生理盐水中,按前述方法处理后作滤纸片标准品,其余按试剂盒要求操作，拟合标准曲线相关系数分别为0.99及0.95。
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三、统计学方法
TNF-α比较采用单因素方差分析,IL-6用秩和检验，组间比较用q检验。
结果
一、 输卵管液中CT-DNA 的检测结果
TFI患者的CT-DNA阳性率(49%)明显高于对照组(14%)，差异有极显著性(P<0.01)。其中输卵管梗阻者26例的CT-DNA阳性率(54%)与19例粘连者(42%)比较，差异无显著性(P>0.05)。
二、输卵管液中TNF-α和IL-6的检测结果
A组及B组中TNF-α水平明显高于对照组，差异有显著性(P<0.01，<0.05)，但A 组与B组间差异无显著性(P>0.05)。A 组IL-6水平明显高于B组及对照组,差异有极显著性(P均<0.01)，但B组与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。 见表1。
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表1 3组患者输卵管液中TNF-α、IL-6的水平(ng/L，x±s)
组别
总例数
TNF-α
IL-6
A组
22
178±46
681±596
B组
23
158±46
, 百拇医药
264±189
对照组
19
124±37
229±174
三、CT感染TFI患者不同输卵管病变的TNF-α和IL-6水平比较
TNF-α在输卵管梗阻者(14例)为(199±30)ng/L，明显高于输卵管粘连者(8例)的(142 ±48)ng/L(P<0.01)。而IL-6，输卵管粘连者为(956±810)ng/L，高于输卵管梗阻者的(523±383)ng/L，但差异无显著性(P>0.05)。
讨论
一、输卵管液中TNF-α的产生及其作用
, 百拇医药
CT感染时输卵管上皮细胞首先释放TNF-α，再激活局部单核、巨噬细胞产生更多的TNF-α[3]。Toth等[1]发现，TNF-α与CT感染输卵管炎损伤有关。本研究也提示TNF-α水平升高与输卵管损伤有关，且水平越高损伤越重。
二、输卵管液中IL-6的产生及其作用
CT感染时IL-6水平升高。但IL-6在CT感染中所起的作用仍未明确且有争议。本研究提示，IL-6水平在CT感染时明显升高，与CT的亚临床感染或持续性感染状态密切相关。但非CT感染TFI与对照组之间IL-6水平差异无显著性，而该组包括有输卵管损伤的患者，说明IL-6与输卵管损伤无直接联系[4]。此点有待进一步研究。
三、CT感染 TFI局部病变与TNF-α、IL-6的关系
本研究表明，TNF-α的产生与输卵管损伤程度有关，而IL-6与TNF-α的趋势相反。有研究表明，IL-6主要参与机体防御反应，与疾病早期有关，TNF-α在高水平时表现为损害效应，与疾病的持续状态有关[5]。IL-6以剂量依赖方式抑制TNF-α产生[6]。所以，在输卵管损伤较轻时IL-6水平较高，TNF-α水平较低。随着病程延长，输卵管损伤加重，引起阻塞，IL-6产生相对减少，从而解除了对TNF-α的抑制作用，TNF-α产生增多，输卵管损伤加重。
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作者单位：李海燕(现在云南省大理医学院妇产科)
梁占光(610041 成都，华西医科大学附属第二医院妇产科)
参考文献
1，Toth M, Jeremias J, Ledger WJ, et al. In vivo tumor necrosis factor production in women with salpingitis. Surg Gynecol Obstet, 1992, 174: 359-362.
2，苏琼，张莉，王文达. 纸片血清标本检测乙型肝炎病毒标志物及丙型肝炎抗体的应用. 临床肝胆病杂志，1998,11:228-229.
3，Ault KA, Tawfik OW, Smith -King MM, et al. Tumor necrosis factor-alpha response to infection with Chlamydia trachomatis in human fallopian tube organ culture. Am J Obstet Gynecol, 1996, 175:1242-1245.
, 百拇医药
4，Buyalos RP, Funari VA,Azziz R, et al. Elevated interleukin-6 levels in peritoneal fluid of patients with pelvic pathology. Fertil Steril,1992,58:302-306.
5，Heremans H, van Damme J, Dillen C, et al. Interferon gamma, a mediator of lethal lipopolysaccharide-induced shwartzman-like shock reactions in mice. J Exp Med, 1990, 171: 1853-1869.
6，Aderka D, Le JM, Vilcek J. IL-6 inhibits lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor production in cultured human monocytes, U937 cells, and in mice. J Immunol, 1989,143: 3517-3523., http://www.100md.com
李海燕 梁占光
摘 要 目的 探讨沙眼衣原体(CT)感染所致输卵管性不孕患者输卵管液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平及其意义。方法 用酶联免疫吸附试验法测定22例CT感染输卵管性不孕(A组)、23例非CT感染输卵管性不孕(B组)及19例已生育输卵管正常妇女(对照组)输卵管液中TNF- α和IL-6 的水平。结果 A 组TNF-α的水平为178 ng/L，高于对照组的124 ng/L(P<0.01)；A组中输卵管阻塞者TNF-α为199 ng/L，高于粘连者的142 ng/L(P<0.01)。A 组IL-6的水平为681 ng/L，高于B组的264 ng/L及对照组的229 ng/L(P均<0.01)，B组与对照组之间比较差异无显著性(P>0.05)。结论 无症状输卵管CT感染可使输卵管液中TNF-α和IL-6升高，其中TNF-α与输卵管损伤程度有关。TNF-α越高，损伤越重。
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关键词：衣原体，沙眼；输卵管疾病；不育，女(雌)性；肿瘤坏死因子；白细胞介素6
沙眼衣原体(chlamydia trachomatis，CT)与输卵管性不孕(tubal factor infertility，TFI)关系密切。本研究检测输卵管液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6) 的水平，探讨CT感染TFI的发病机理。
资料与方法
一、研究对象
为1998年10月至12月在我科因TFI作输卵管粘连分离手术的45例患者及19例(对照组，输卵管外观正常)因绝育后复通或妇科良性肿瘤行卵巢囊肿剥出及子宫切除手术者。全部病例均于术中取输卵管液进行CT-DNA聚合酶链反应( PCR)检测，CT-DNA阳性的22例TFI为A组，阴性的23例TFI为B组，对照组CT-DNA均为阴性。
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A组及B组平均27岁，不孕时间3年，原发性不孕A组占41%(9/22)，B组占52%(12/23)。对照组平均年龄34岁，包括绝育术后复通、子宫肌瘤、卵巢囊肿及功能失调性子宫出血等患者。
二、研究方法
1.标本收集及处理： 采用国产定量滤纸(2.5 mm×0.6 mm)取输卵管液[1]，吸液量为(23.2±0.3) μl。此滤纸片血清蛋白回收率为99.2%～101.8%[2]。术中将3张滤纸条分别置入输卵管腔中，浸透输卵管液后放入离心管，加入800 μl生理盐水。所有标本均在-20℃保存，集中测定。
2.CT-DNA、TNF-α、IL-6的检测：CT-DNA采用PCR法，试剂盒由伊利康生物技术有限公司提供，引物扩增产生400 bp片段产物。采用酶联免疫吸附法检测TNF-α及IL-6，试剂盒购于深圳晶美生物工程公司。方法是各取稀释浓度的标准品23.23 μl加入800 μl生理盐水中,按前述方法处理后作滤纸片标准品,其余按试剂盒要求操作，拟合标准曲线相关系数分别为0.99及0.95。
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三、统计学方法
TNF-α比较采用单因素方差分析,IL-6用秩和检验，组间比较用q检验。
结果
一、 输卵管液中CT-DNA 的检测结果
TFI患者的CT-DNA阳性率(49%)明显高于对照组(14%)，差异有极显著性(P<0.01)。其中输卵管梗阻者26例的CT-DNA阳性率(54%)与19例粘连者(42%)比较，差异无显著性(P>0.05)。
二、输卵管液中TNF-α和IL-6的检测结果
A组及B组中TNF-α水平明显高于对照组，差异有显著性(P<0.01，<0.05)，但A 组与B组间差异无显著性(P>0.05)。A 组IL-6水平明显高于B组及对照组,差异有极显著性(P均<0.01)，但B组与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。 见表1。
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表1 3组患者输卵管液中TNF-α、IL-6的水平(ng/L，x±s)
组别
总例数
TNF-α
IL-6
A组
22
178±46
681±596
B组
23
158±46
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264±189
对照组
19
124±37
229±174
三、CT感染TFI患者不同输卵管病变的TNF-α和IL-6水平比较
TNF-α在输卵管梗阻者(14例)为(199±30)ng/L，明显高于输卵管粘连者(8例)的(142 ±48)ng/L(P<0.01)。而IL-6，输卵管粘连者为(956±810)ng/L，高于输卵管梗阻者的(523±383)ng/L，但差异无显著性(P>0.05)。
讨论
一、输卵管液中TNF-α的产生及其作用
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CT感染时输卵管上皮细胞首先释放TNF-α，再激活局部单核、巨噬细胞产生更多的TNF-α[3]。Toth等[1]发现，TNF-α与CT感染输卵管炎损伤有关。本研究也提示TNF-α水平升高与输卵管损伤有关，且水平越高损伤越重。
二、输卵管液中IL-6的产生及其作用
CT感染时IL-6水平升高。但IL-6在CT感染中所起的作用仍未明确且有争议。本研究提示，IL-6水平在CT感染时明显升高，与CT的亚临床感染或持续性感染状态密切相关。但非CT感染TFI与对照组之间IL-6水平差异无显著性，而该组包括有输卵管损伤的患者，说明IL-6与输卵管损伤无直接联系[4]。此点有待进一步研究。
三、CT感染 TFI局部病变与TNF-α、IL-6的关系
本研究表明，TNF-α的产生与输卵管损伤程度有关，而IL-6与TNF-α的趋势相反。有研究表明，IL-6主要参与机体防御反应，与疾病早期有关，TNF-α在高水平时表现为损害效应，与疾病的持续状态有关[5]。IL-6以剂量依赖方式抑制TNF-α产生[6]。所以，在输卵管损伤较轻时IL-6水平较高，TNF-α水平较低。随着病程延长，输卵管损伤加重，引起阻塞，IL-6产生相对减少，从而解除了对TNF-α的抑制作用，TNF-α产生增多，输卵管损伤加重。
, 百拇医药
作者单位：李海燕(现在云南省大理医学院妇产科)
梁占光(610041 成都，华西医科大学附属第二医院妇产科)
参考文献
1，Toth M, Jeremias J, Ledger WJ, et al. In vivo tumor necrosis factor production in women with salpingitis. Surg Gynecol Obstet, 1992, 174: 359-362.
2，苏琼，张莉，王文达. 纸片血清标本检测乙型肝炎病毒标志物及丙型肝炎抗体的应用. 临床肝胆病杂志，1998,11:228-229.
3，Ault KA, Tawfik OW, Smith -King MM, et al. Tumor necrosis factor-alpha response to infection with Chlamydia trachomatis in human fallopian tube organ culture. Am J Obstet Gynecol, 1996, 175:1242-1245.
, 百拇医药
4，Buyalos RP, Funari VA,Azziz R, et al. Elevated interleukin-6 levels in peritoneal fluid of patients with pelvic pathology. Fertil Steril,1992,58:302-306.
5，Heremans H, van Damme J, Dillen C, et al. Interferon gamma, a mediator of lethal lipopolysaccharide-induced shwartzman-like shock reactions in mice. J Exp Med, 1990, 171: 1853-1869.
6，Aderka D, Le JM, Vilcek J. IL-6 inhibits lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor production in cultured human monocytes, U937 cells, and in mice. J Immunol, 1989,143: 3517-3523., http://www.100md.com