子宫内膜异位症患者T辅助细胞亚群功能失衡的研究
子宫内膜异位症患者T辅助细胞亚群功能失衡的研究
殷红梅 王苏荣 戴淑真 王秋波
摘 要 目的 探讨T辅助细胞(Th)失衡与子宫内膜异位症(内异症)的关系。 方法 对30例内异症患者(内异症组)及15例健康生育年龄妇女(对照组)的外周血单个核细胞(PBMC)加入植物血凝素进行体外培养诱生。采用酶联免疫吸附试验测定血浆及PBMC培养上清液中Th1类因子干扰素γ(IFN-γ)、Th2类因子白细胞介素4(IL-4)的水平。结果 (1)在PBMC诱生培养上清液中，内异症组IL-4的诱生水平[(32.8±12.5)ng/L]比对照组[(24.3±3.5)ng/L]明显升高(P<0.01),而IFN-γ的诱生水平内异症组[(1 095.6±375.6) ng/L]较对照组[(1 549.3±361.9)ng/L]下降,内异症组的IFN-γ/IL-4比值(37.7±17.5)下降,与对照组(71.1±12.1)比较，差异均有极显著性(P<0.01)。(2)在血浆中，除内异症组IL-4水平[(32.0±22.6)ng/L]高于与对照组[(23.3±4.3)ng/L](P<0.05)外，IFN-γ的诱生水平及IFN-γ/IL-4比值与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。结论 内异症患者体内存在Th1/Th2失衡，使子宫内膜能够逃避免疫监视及杀伤而在异位种植，引起内异症的发生发展。
, 百拇医药
关键词：子宫内膜异位症；T淋巴细胞亚群；干扰素Ⅱ型；白细胞介素4
T辅助细胞(T helper cell,Th)根据其产生细胞因子的不同分为Th1和Th2两大亚群。正常状态下Th1、Th2处于动态平衡，一旦失衡则引起疾病。目前对子宫内膜异位症(内异症)患者Th亚群变化的研究结果尚不一致[1，2]。本研究对外周血单个核细胞(PBMC)加植物血凝素诱生培养，用酶联免疫吸附试验测定血浆及培养上清液中Th1类细胞因子干扰素(IFN)-γ、Th2类细胞因子白细胞介素4(IL-4)水平，研究内异症患者有无Th1、Th2失衡现象。
资料与方法
一、研究对象
1.内异症组：为1998年3月至1999年3月在我科住院经腹腔镜手术及临床确诊的30例内异症患者。3个月内未用激素类药物。按美国生育协会分期标准，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为5、8、7、10例。年龄21～45岁，平均年龄(33.2±4.0)岁(X±s，下同)。
, 百拇医药
2.对照组：为同期选择的15 例盆腔结构正常妇女，包括行输卵管结扎及吻合术者。均无自身免疫与过敏性疾病、急性炎症，未用激素类药物。平均年龄(32.5±5.0) 岁。
二、方法
1.PBMC培养诱生上清液的制备：于治疗前取静脉血4 ml，1%依地酸二钠抗凝后取1 ml血浆-70℃冰箱保存待测。淋巴细胞分离液分离PBMC，用Hank′s液洗涤沉积细胞，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基，调整细胞浓度至2×106个/ml，吸取1 ml PBMC悬液至培养板，加入植物血凝素-P 50 μg/ml，5%二氧化碳培养箱37℃培养72 h，取上清液放入-70℃冰箱待测。
2.细胞因子的检测：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定IL-4、INF-γ，试剂盒为美国Genzyme公司生产。
三、统计学方法
, 百拇医药
结果用X±s表示，采用t检验进行分析。
结果
一、PBMC诱生培养上清液中IL-4、IFN-γ的水平及IFN-γ/IL-4比值变化
内异症组，IL-4诱生水平比对照组明显升高，二者差异有极显著性(P<0.01)；IFN-γ诱生水平较对照组下降(P<0.01)；IFN-γ/IL-4比值较对照组下降(P<0.01)。见表1。
二、血浆中IL-4、IFN-γ及IFN-γ/IL-4比值变化
除了内异症组IL-4水平升高(P<0.05)外，IFN-γ的水平及IFN-γ/IL-4比值与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。见表1。
讨论
, 百拇医药
一、 Th1/Th2失衡在内异症中的意义
IL-2、IFN-γ是Th1分泌的主要因子，IL-4是Th2分泌的因子，可以抑制Th1细胞分泌系列因子[3]。与Th1/Th2平衡有关的细胞因子主要是IFN-γ和IL-4等。IFN-γ和IL-4通常相互排斥，有时Th1或Th2即只指产生IFN-γ或IL-4的细胞[4]。因此本研究测定IL-4、IFN-γ来探讨内异症患者体内Th的状态。
本研究显示，IL-4在血浆及PBMC培养上清液中水平升高，而IFN-γ在内异症组PBMC诱生水平显著下降。PBMC培养上清中IFN-γ/IL-4比值变化，提示了Th1/Th2的失衡状态。机体在对抗自身及外来抗原入侵的过程中以Th1介导的细胞免疫为主，一旦由Th1向Th2偏移，则机体处于免疫抑制状态。本研究中，内异症患者表现的这种向Th2偏移的状况造成细胞免疫抑制，从而使异位内膜象肿瘤细胞或病原体一样逃避免疫监视，造成异位内膜广泛种植。
, 百拇医药
二、IL-4水平升高对内异症的意义
内异症患者外周血淋巴细胞介导针对子宫内膜的毒性下降[5]。IL-4可通过抑制IL-2介导IL-2受体的产生而对IL-2依赖性T细胞及自然杀伤细胞的活性抑制，结果抑制了淋巴杀伤性细胞的活性[6]。本实验说明，在内异位症中巨噬细胞、T杀伤细胞、自然杀伤细胞活性降低可能是由于IL-4及IFN-γ的比例失调引起。
表1 两组患者IL-4、IFN-γ及IFN-γ/IL-4的水平(X±s)
组别
例数
PBMC培养上清液
血浆
IL-4
, 百拇医药
(ng/L)
IFN-γ
(ng/L)
IFN-γ/IL-4
IL-4
(ng/L)
IFN-γ
(ng/L)
IFN-γ/IL-4
内异症组
30
32.8±12.5*
, 百拇医药
1 095.6±375.6*
37.7±17.5*
32.0±22.6**
31.8±10.6
1.5±0.5
对照组
15
24.3± 3.5
1 549.3±361.9
71.1±12.1
23.3± 4.2
, 百拇医药
32.2± 6.8
1.4±0.3
注：与对照组比较，*P<0.01 ** P<0.05作者单位：王苏荣(266003 青岛大学医学院附属医院妇科)
戴淑真(266003 青岛大学医学院附属医院妇科)
殷红梅(胜利油田中心医院妇产科)
殷红梅(266003 青岛大学医学院附属医院妇科)
王秋波(青岛大学医学院免疫教研室)
参考文献
1，Juha P, Teisala K, Ranta H,et al. Increased levels of interleukin-6 and interleukin-10 in the peritoneal fluid of patients with endometriosis. Am J Obstet Gynecol, 1996,174:1522-1526.
, 百拇医药
2，Hsu CC, Yang BC, Wu MH,et al. Enhanced interleukin-4 expression in patients with endometriosis. Fertil Steril, 1997,67:1059-1064.
3，Tanaka T, Huli J, Seder RA, et al. Interleukin 4 suppresses interleukin 2 and interferon gamma production by native T cells stimulated by accessory cell-dependent receptor engagement. Proc Natl Acad Sci USA, 1993,90:5914-5918.
4，Elson LH, Nutman TB, Metcalfe DD, et al. Flow cytometric analysis for cytokine production identifies T helper 1,T helper 2, and T helper 0 cell within the human CD4+ CD27- lymphocyte subpopulation. J Immunol, 1995,154:4294-4301.
, http://www.100md.com
5，Oosterlynck DJ, Cornillie FJ, Wear M, et al. Women with endometriosis show a defect in natural killer activity resulting in a decreased cytotoxicity to autologous endometrium. Fertil Steril, 1991,56:45-51.
6，Maggi E, Parronchi P, Manetti R, et al. Reciprocal regulatory effects of IFN-gamma and IL-4 on the in vitro development of human Th1 and Th2 clones. J Immunol, 1992,148:2142-2147., http://www.100md.com
殷红梅 王苏荣 戴淑真 王秋波
摘 要 目的 探讨T辅助细胞(Th)失衡与子宫内膜异位症(内异症)的关系。 方法 对30例内异症患者(内异症组)及15例健康生育年龄妇女(对照组)的外周血单个核细胞(PBMC)加入植物血凝素进行体外培养诱生。采用酶联免疫吸附试验测定血浆及PBMC培养上清液中Th1类因子干扰素γ(IFN-γ)、Th2类因子白细胞介素4(IL-4)的水平。结果 (1)在PBMC诱生培养上清液中，内异症组IL-4的诱生水平[(32.8±12.5)ng/L]比对照组[(24.3±3.5)ng/L]明显升高(P<0.01),而IFN-γ的诱生水平内异症组[(1 095.6±375.6) ng/L]较对照组[(1 549.3±361.9)ng/L]下降,内异症组的IFN-γ/IL-4比值(37.7±17.5)下降,与对照组(71.1±12.1)比较，差异均有极显著性(P<0.01)。(2)在血浆中，除内异症组IL-4水平[(32.0±22.6)ng/L]高于与对照组[(23.3±4.3)ng/L](P<0.05)外，IFN-γ的诱生水平及IFN-γ/IL-4比值与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。结论 内异症患者体内存在Th1/Th2失衡，使子宫内膜能够逃避免疫监视及杀伤而在异位种植，引起内异症的发生发展。
, 百拇医药
关键词：子宫内膜异位症；T淋巴细胞亚群；干扰素Ⅱ型；白细胞介素4
T辅助细胞(T helper cell,Th)根据其产生细胞因子的不同分为Th1和Th2两大亚群。正常状态下Th1、Th2处于动态平衡，一旦失衡则引起疾病。目前对子宫内膜异位症(内异症)患者Th亚群变化的研究结果尚不一致[1，2]。本研究对外周血单个核细胞(PBMC)加植物血凝素诱生培养，用酶联免疫吸附试验测定血浆及培养上清液中Th1类细胞因子干扰素(IFN)-γ、Th2类细胞因子白细胞介素4(IL-4)水平，研究内异症患者有无Th1、Th2失衡现象。
资料与方法
一、研究对象
1.内异症组：为1998年3月至1999年3月在我科住院经腹腔镜手术及临床确诊的30例内异症患者。3个月内未用激素类药物。按美国生育协会分期标准，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为5、8、7、10例。年龄21～45岁，平均年龄(33.2±4.0)岁(X±s，下同)。
, 百拇医药
2.对照组：为同期选择的15 例盆腔结构正常妇女，包括行输卵管结扎及吻合术者。均无自身免疫与过敏性疾病、急性炎症，未用激素类药物。平均年龄(32.5±5.0) 岁。
二、方法
1.PBMC培养诱生上清液的制备：于治疗前取静脉血4 ml，1%依地酸二钠抗凝后取1 ml血浆-70℃冰箱保存待测。淋巴细胞分离液分离PBMC，用Hank′s液洗涤沉积细胞，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基，调整细胞浓度至2×106个/ml，吸取1 ml PBMC悬液至培养板，加入植物血凝素-P 50 μg/ml，5%二氧化碳培养箱37℃培养72 h，取上清液放入-70℃冰箱待测。
2.细胞因子的检测：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定IL-4、INF-γ，试剂盒为美国Genzyme公司生产。
三、统计学方法
, 百拇医药
结果用X±s表示，采用t检验进行分析。
结果
一、PBMC诱生培养上清液中IL-4、IFN-γ的水平及IFN-γ/IL-4比值变化
内异症组，IL-4诱生水平比对照组明显升高，二者差异有极显著性(P<0.01)；IFN-γ诱生水平较对照组下降(P<0.01)；IFN-γ/IL-4比值较对照组下降(P<0.01)。见表1。
二、血浆中IL-4、IFN-γ及IFN-γ/IL-4比值变化
除了内异症组IL-4水平升高(P<0.05)外，IFN-γ的水平及IFN-γ/IL-4比值与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。见表1。
讨论
, 百拇医药
一、 Th1/Th2失衡在内异症中的意义
IL-2、IFN-γ是Th1分泌的主要因子，IL-4是Th2分泌的因子，可以抑制Th1细胞分泌系列因子[3]。与Th1/Th2平衡有关的细胞因子主要是IFN-γ和IL-4等。IFN-γ和IL-4通常相互排斥，有时Th1或Th2即只指产生IFN-γ或IL-4的细胞[4]。因此本研究测定IL-4、IFN-γ来探讨内异症患者体内Th的状态。
本研究显示，IL-4在血浆及PBMC培养上清液中水平升高，而IFN-γ在内异症组PBMC诱生水平显著下降。PBMC培养上清中IFN-γ/IL-4比值变化，提示了Th1/Th2的失衡状态。机体在对抗自身及外来抗原入侵的过程中以Th1介导的细胞免疫为主，一旦由Th1向Th2偏移，则机体处于免疫抑制状态。本研究中，内异症患者表现的这种向Th2偏移的状况造成细胞免疫抑制，从而使异位内膜象肿瘤细胞或病原体一样逃避免疫监视，造成异位内膜广泛种植。
, 百拇医药
二、IL-4水平升高对内异症的意义
内异症患者外周血淋巴细胞介导针对子宫内膜的毒性下降[5]。IL-4可通过抑制IL-2介导IL-2受体的产生而对IL-2依赖性T细胞及自然杀伤细胞的活性抑制，结果抑制了淋巴杀伤性细胞的活性[6]。本实验说明，在内异位症中巨噬细胞、T杀伤细胞、自然杀伤细胞活性降低可能是由于IL-4及IFN-γ的比例失调引起。
表1 两组患者IL-4、IFN-γ及IFN-γ/IL-4的水平(X±s)
组别
例数
PBMC培养上清液
血浆
IL-4
, 百拇医药
(ng/L)
IFN-γ
(ng/L)
IFN-γ/IL-4
IL-4
(ng/L)
IFN-γ
(ng/L)
IFN-γ/IL-4
内异症组
30
32.8±12.5*
, 百拇医药
1 095.6±375.6*
37.7±17.5*
32.0±22.6**
31.8±10.6
1.5±0.5
对照组
15
24.3± 3.5
1 549.3±361.9
71.1±12.1
23.3± 4.2
, 百拇医药
32.2± 6.8
1.4±0.3
注：与对照组比较，*P<0.01 ** P<0.05作者单位：王苏荣(266003 青岛大学医学院附属医院妇科)
戴淑真(266003 青岛大学医学院附属医院妇科)
殷红梅(胜利油田中心医院妇产科)
殷红梅(266003 青岛大学医学院附属医院妇科)
王秋波(青岛大学医学院免疫教研室)
参考文献
1，Juha P, Teisala K, Ranta H,et al. Increased levels of interleukin-6 and interleukin-10 in the peritoneal fluid of patients with endometriosis. Am J Obstet Gynecol, 1996,174:1522-1526.
, 百拇医药
2，Hsu CC, Yang BC, Wu MH,et al. Enhanced interleukin-4 expression in patients with endometriosis. Fertil Steril, 1997,67:1059-1064.
3，Tanaka T, Huli J, Seder RA, et al. Interleukin 4 suppresses interleukin 2 and interferon gamma production by native T cells stimulated by accessory cell-dependent receptor engagement. Proc Natl Acad Sci USA, 1993,90:5914-5918.
4，Elson LH, Nutman TB, Metcalfe DD, et al. Flow cytometric analysis for cytokine production identifies T helper 1,T helper 2, and T helper 0 cell within the human CD4+ CD27- lymphocyte subpopulation. J Immunol, 1995,154:4294-4301.
, http://www.100md.com
5，Oosterlynck DJ, Cornillie FJ, Wear M, et al. Women with endometriosis show a defect in natural killer activity resulting in a decreased cytotoxicity to autologous endometrium. Fertil Steril, 1991,56:45-51.
6，Maggi E, Parronchi P, Manetti R, et al. Reciprocal regulatory effects of IFN-gamma and IL-4 on the in vitro development of human Th1 and Th2 clones. J Immunol, 1992,148:2142-2147., http://www.100md.com