水蛭素预防眼内增生性病变的初步观察
水蛭素预防眼内增生性病变的初步观察
袁晓辉 王万杰 郑燕林 蒋纪恺 曾庆华
摘 要 目的 探讨用水蛭素预防眼内增生性病变的效果。方法 建立实验性眼外伤动物模型，随机分为实验组和对照，在实验组玻璃体腔内注入小剂量水蛭素(每只眼10U)，对照组采用空白对照组，分别观察2组1、3、5、7、14d玻璃体混浊及眼底增殖膜形成情况。结果 实验组1、3、5d玻璃体混浊及眼底增殖膜形成明显低于对照组(P<0.05)。结论 水蛭素对眼内增生性病变形成早期有预防作用。
关键词：水蛭素；眼内增生性病变；眼外伤
水蛭是一味传统中药，首载于《神农本草经》，其主要功效为破血逐瘀。有效成分为水蛭素，目前国外主要用于血栓形成的防治。本实验将低浓度的水蛭素用于实验性眼外伤的动物模型中，初步观察水蛭素预防眼内增生性玻璃体视网膜病变(proliferative viteovetinopathy,PVR)的形成，并探讨其作用机理。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 动物 健康日本大耳白兔24只，体重2.5kg左右，雌雄不限，随机分为实验组和对照组，其中实验组10只兔20只眼，对照组14只兔28只眼。
1.2 实验方法 苯巴比妥静脉麻醉，按每公斤体重75mg的剂量从兔耳廓静脉注入。在角膜缘后4mm作平行于角膜缘的穿通伤口约5mm大小，轻压切口，使少许玻璃体脱出。然后取兔自身血0.2mL注入玻璃体腔内，同时实验组每只眼分别注入10单位水蛭素于玻璃体腔内。伤口不缝合，滴氯霉素眼液于结膜囊内，分别观察1、3、5、7、14d实验组和对照组玻璃体混浊及眼底增殖膜形成情况。分别于伤后1、3、5、7、14d随机处死实验组和对照组各2只兔供其他检查。
1.3 观察指标 玻璃体混浊程度分级：“
”玻璃体混浊，眼底窥不清；“
”玻璃体混浊，仅隐约可见视网膜血管；“
”玻璃体混浊轻度，可见视盘及血管；“+”玻璃体细点状混浊，眼底清楚；“0”玻璃体无混浊[1]。统计学处理用χ2检验。
, 百拇医药
1.4 判定标准 好转：玻璃体混浊程度较前次减少“+”或“+”以上者。
2 结果
造模后玻璃体混浊情况见表1，结果表明：造模后1、3、5d，实验组玻璃体混浊
及眼底增殖形成明显低于对照组，有显著性差异(P<0.05)，造模后7、14d 2组比较无明显差异，见表2。实验组无1眼发生牵引性视网膜脱离，对照组中有10眼发生牵引性视网膜脱离，发生率为36%.
表1 造模后玻璃体混浊情况
Table 1 The results of vitreaes opacity after
building up the model
, http://www.100md.com Degree
Control group
Experiment group
1d
3d
5d
7d
14d
1d
3d
5d
7d
14d
, 百拇医药
12
7
3
1
1
2
0
0
0
0
11
, 百拇医药 12
9
3
1
9
6
1
0
0
5
3
6
, 百拇医药
10
3
6
5
5
2
0
+
0
1
1
2
7
3
, 百拇医药
5
6
6
4
-
0
1
1
0
0
0
0
0
0
, 百拇医药
0
表2 实验结果
Table 2 The results of experiment
1d
3d
5d
7d
14d
E
C
E
C
E
, 百拇医药
C
E
C
E
C
Total
20
28
16
24
12
20
8
16
, 百拇医药
4
12
Effective
18
16
8
6
10
8
2
7
2
5
P
, 百拇医药
<0.025
<0.05
<0.05
>0.5
>0.5
Note:E=experiment group，C=control group
3 讨论
3.1 中医对眼内增生性病变的认识 祖国医学认为，眼内出血、炎症所致的增生性病变为一种瘀滞表现，易形成瘀血、死血、干血，日久而成积聚、凝块，故当破血逐瘀、软坚散结。《神农本草经》云：“水蛭味咸平，主逐恶血、瘀血、月闭；逐血瘀积聚”。因而水蛭是治疗眼内增生性病变的首选药物之一，其有效成分是水蛭素。
, 百拇医药 3.2 现代医学对眼内增生性病变的认识 关于眼内增生性病变的发病机理报道很多，一般认为是视网膜及周围组织损伤后(如裂孔、外伤和血管炎等)，导致血-视网膜屏障被破坏，血小板与损伤部位接触释放大量血源性细胞因子(如转化生长因子-β、血小板源性生长因子)及其他生物活性物质，血小板源性生长因子能吸引成纤维细胞、神经胶质细胞和色素上皮细胞，刺激平滑肌细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞增殖，而巨噬细胞也能分泌转化生长因子-β、血小板源性生长因子和成纤维细胞生长因子，从而促进炎症、增生反应和纤维膜形成[2，3]。
3.3 水蛭素预防增生性玻璃体视网膜病变的机理 水蛭素是1955年Markwardt首先从医用水蛭唾液中分离纯化的一种多肽，并于1970年确定它是凝血酶的特异抑制剂[4]。水蛭素对凝血酶有很高的亲和性，它是凝血酶的最强有力的天然抑制剂，它们以1∶1的方式形成紧密的非共价相结合的可逆的复合物，这样凝血酶便失去了裂解纤维蛋白原的能力，阻止了纤维蛋白的凝固。此外，水蛭素也阻止凝血酶催化的凝血反应(如因子Ⅴ、Ⅷ、Ⅻ的活化)及凝血酶诱导的血小板反应。因此，我们应用水蛭素防止外伤后眼内出血所致的增生性病变。将小剂量水蛭素注入眼外伤动物模型玻璃体腔内，发现实验组早期PVR形成明显低于对照组，经统计学处理有显著性差异(P<0.05)，且实验组无1眼发生牵引性视网膜脱离，而对照组牵引性视网膜脱离发生率为36%.从实验结果我们推测：水蛭素直接注入玻璃体腔后，抑制了由凝血酶催化的凝血反应及纤维蛋白原的凝固，抑制由凝血酶诱导的血小板反应，从而抑制了色素上皮细胞、神经胶质细胞及成纤维细胞的增殖，阻止了增殖膜的形成，达到了防治眼内增生性病变形成的目的。
, 百拇医药
眼内增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是视网膜脱离手术失败的主要原因，也是眼外伤、视网膜血管炎常见的严重并发症之一，目前尽管PVR的手术成功率已显著提高，但许多患者术后视力恢复不理想，且复发率高。随着对PVR发病机理认识的不断深入，许多学者已开始尝试用药物来防治PVR[5]。因此，我们应用中医理论采用水蛭素预防治PVR形成，对临床防治PVR形成开辟新的途径。
由于本实验未连续用药，故预防后期眼内增生性病变形成的作用不理想，有待进一步完善，以便为水蛭素成为临床防治PVR的有效药物提供可靠依据。
基金项目：四川省教委重点科研基金资助
作者简介：袁晓辉，女，1964年4月出生。1985年毕业于成都中医药大学医学系。毕业后在成都中医药大学附属医院从事眼科临床工作，现任眼科副主任医师，曾在全国性杂志发表论文数篇，主要从事斜视、弱视、近视的防治工作及白内障、青光眼的临床工作。电话：028-7769902-2520
, http://www.100md.com
作者单位：袁晓辉(成都中医药大学附属医院眼科 四川省成都市，610072)
王万杰(成都中医药大学附属医院眼科 四川省成都市，610072)
郑燕林(成都中医药大学附属医院眼科 四川省成都市，610072)
曾庆华(成都中医药大学附属医院眼科 四川省成都市，610072)
蒋纪恺(重庆医科大学检验系)
参考文献
1，李凤鸣.眼科全书(中册)[M].北京：人民卫生出版社1996∶2421.
2，刘 文.视网膜前膜研究新进展[J].国外医学眼科学分册1995；19(4)∶219.
3，石一宁.增殖性玻璃体视网膜病变的免疫机制[J].国外医学眼科学分册1995；19(4)∶239.
4，Markwardt F.Hirudin as an inhibitor of thrombin,Methods enzymelog 1970;19∶924.
5，武志峰.增殖性玻璃体视网膜病变的药物防治[J].国外医学眼科学分册 1997；21(1)∶51., http://www.100md.com
袁晓辉 王万杰 郑燕林 蒋纪恺 曾庆华
摘 要 目的 探讨用水蛭素预防眼内增生性病变的效果。方法 建立实验性眼外伤动物模型，随机分为实验组和对照，在实验组玻璃体腔内注入小剂量水蛭素(每只眼10U)，对照组采用空白对照组，分别观察2组1、3、5、7、14d玻璃体混浊及眼底增殖膜形成情况。结果 实验组1、3、5d玻璃体混浊及眼底增殖膜形成明显低于对照组(P<0.05)。结论 水蛭素对眼内增生性病变形成早期有预防作用。
关键词：水蛭素；眼内增生性病变；眼外伤
水蛭是一味传统中药，首载于《神农本草经》，其主要功效为破血逐瘀。有效成分为水蛭素，目前国外主要用于血栓形成的防治。本实验将低浓度的水蛭素用于实验性眼外伤的动物模型中，初步观察水蛭素预防眼内增生性玻璃体视网膜病变(proliferative viteovetinopathy,PVR)的形成，并探讨其作用机理。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 动物 健康日本大耳白兔24只，体重2.5kg左右，雌雄不限，随机分为实验组和对照组，其中实验组10只兔20只眼，对照组14只兔28只眼。
1.2 实验方法 苯巴比妥静脉麻醉，按每公斤体重75mg的剂量从兔耳廓静脉注入。在角膜缘后4mm作平行于角膜缘的穿通伤口约5mm大小，轻压切口，使少许玻璃体脱出。然后取兔自身血0.2mL注入玻璃体腔内，同时实验组每只眼分别注入10单位水蛭素于玻璃体腔内。伤口不缝合，滴氯霉素眼液于结膜囊内，分别观察1、3、5、7、14d实验组和对照组玻璃体混浊及眼底增殖膜形成情况。分别于伤后1、3、5、7、14d随机处死实验组和对照组各2只兔供其他检查。
1.3 观察指标 玻璃体混浊程度分级：“
”玻璃体混浊，眼底窥不清；“”玻璃体混浊，仅隐约可见视网膜血管；“”玻璃体混浊轻度，可见视盘及血管；“+”玻璃体细点状混浊，眼底清楚；“0”玻璃体无混浊[1]。统计学处理用χ2检验。, 百拇医药
1.4 判定标准 好转：玻璃体混浊程度较前次减少“+”或“+”以上者。
2 结果
造模后玻璃体混浊情况见表1，结果表明：造模后1、3、5d，实验组玻璃体混浊
及眼底增殖形成明显低于对照组，有显著性差异(P<0.05)，造模后7、14d 2组比较无明显差异，见表2。实验组无1眼发生牵引性视网膜脱离，对照组中有10眼发生牵引性视网膜脱离，发生率为36%.
表1 造模后玻璃体混浊情况
Table 1 The results of vitreaes opacity after
building up the model
, http://www.100md.com Degree
Control group
Experiment group
1d
3d
5d
7d
14d
1d
3d
5d
7d
14d
, 百拇医药
12
7
3
1
1
2
0
0
0
0
11
, 百拇医药 12
9
3
1
9
6
1
0
0
5
3
6
, 百拇医药
10
3
6
5
5
2
0
+
0
1
1
2
7
3
, 百拇医药
5
6
6
4
-
0
1
1
0
0
0
0
0
0
, 百拇医药
0
表2 实验结果
Table 2 The results of experiment
1d
3d
5d
7d
14d
E
C
E
C
E
, 百拇医药
C
E
C
E
C
Total
20
28
16
24
12
20
8
16
, 百拇医药
4
12
Effective
18
16
8
6
10
8
2
7
2
5
P
, 百拇医药
<0.025
<0.05
<0.05
>0.5
>0.5
Note:E=experiment group，C=control group
3 讨论
3.1 中医对眼内增生性病变的认识 祖国医学认为，眼内出血、炎症所致的增生性病变为一种瘀滞表现，易形成瘀血、死血、干血，日久而成积聚、凝块，故当破血逐瘀、软坚散结。《神农本草经》云：“水蛭味咸平，主逐恶血、瘀血、月闭；逐血瘀积聚”。因而水蛭是治疗眼内增生性病变的首选药物之一，其有效成分是水蛭素。
, 百拇医药 3.2 现代医学对眼内增生性病变的认识 关于眼内增生性病变的发病机理报道很多，一般认为是视网膜及周围组织损伤后(如裂孔、外伤和血管炎等)，导致血-视网膜屏障被破坏，血小板与损伤部位接触释放大量血源性细胞因子(如转化生长因子-β、血小板源性生长因子)及其他生物活性物质，血小板源性生长因子能吸引成纤维细胞、神经胶质细胞和色素上皮细胞，刺激平滑肌细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞增殖，而巨噬细胞也能分泌转化生长因子-β、血小板源性生长因子和成纤维细胞生长因子，从而促进炎症、增生反应和纤维膜形成[2，3]。
3.3 水蛭素预防增生性玻璃体视网膜病变的机理 水蛭素是1955年Markwardt首先从医用水蛭唾液中分离纯化的一种多肽，并于1970年确定它是凝血酶的特异抑制剂[4]。水蛭素对凝血酶有很高的亲和性，它是凝血酶的最强有力的天然抑制剂，它们以1∶1的方式形成紧密的非共价相结合的可逆的复合物，这样凝血酶便失去了裂解纤维蛋白原的能力，阻止了纤维蛋白的凝固。此外，水蛭素也阻止凝血酶催化的凝血反应(如因子Ⅴ、Ⅷ、Ⅻ的活化)及凝血酶诱导的血小板反应。因此，我们应用水蛭素防止外伤后眼内出血所致的增生性病变。将小剂量水蛭素注入眼外伤动物模型玻璃体腔内，发现实验组早期PVR形成明显低于对照组，经统计学处理有显著性差异(P<0.05)，且实验组无1眼发生牵引性视网膜脱离，而对照组牵引性视网膜脱离发生率为36%.从实验结果我们推测：水蛭素直接注入玻璃体腔后，抑制了由凝血酶催化的凝血反应及纤维蛋白原的凝固，抑制由凝血酶诱导的血小板反应，从而抑制了色素上皮细胞、神经胶质细胞及成纤维细胞的增殖，阻止了增殖膜的形成，达到了防治眼内增生性病变形成的目的。
, 百拇医药
眼内增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是视网膜脱离手术失败的主要原因，也是眼外伤、视网膜血管炎常见的严重并发症之一，目前尽管PVR的手术成功率已显著提高，但许多患者术后视力恢复不理想，且复发率高。随着对PVR发病机理认识的不断深入，许多学者已开始尝试用药物来防治PVR[5]。因此，我们应用中医理论采用水蛭素预防治PVR形成，对临床防治PVR形成开辟新的途径。
由于本实验未连续用药，故预防后期眼内增生性病变形成的作用不理想，有待进一步完善，以便为水蛭素成为临床防治PVR的有效药物提供可靠依据。
基金项目：四川省教委重点科研基金资助
作者简介：袁晓辉，女，1964年4月出生。1985年毕业于成都中医药大学医学系。毕业后在成都中医药大学附属医院从事眼科临床工作，现任眼科副主任医师，曾在全国性杂志发表论文数篇，主要从事斜视、弱视、近视的防治工作及白内障、青光眼的临床工作。电话：028-7769902-2520
, http://www.100md.com
作者单位：袁晓辉(成都中医药大学附属医院眼科 四川省成都市，610072)
王万杰(成都中医药大学附属医院眼科 四川省成都市，610072)
郑燕林(成都中医药大学附属医院眼科 四川省成都市，610072)
曾庆华(成都中医药大学附属医院眼科 四川省成都市，610072)
蒋纪恺(重庆医科大学检验系)
参考文献
1，李凤鸣.眼科全书(中册)[M].北京：人民卫生出版社1996∶2421.
2，刘 文.视网膜前膜研究新进展[J].国外医学眼科学分册1995；19(4)∶219.
3，石一宁.增殖性玻璃体视网膜病变的免疫机制[J].国外医学眼科学分册1995；19(4)∶239.
4，Markwardt F.Hirudin as an inhibitor of thrombin,Methods enzymelog 1970;19∶924.
5，武志峰.增殖性玻璃体视网膜病变的药物防治[J].国外医学眼科学分册 1997；21(1)∶51., http://www.100md.com