复方丹参片的质量考核研究
http://www.100md.com
中国药学会
史亦丽 李美英 朱倩 石峰 李坤艳 邮电总医院 北京 100032
摘 要 复方丹参片为临床常用药物，生产厂家众多。本品的主药丹参的有效成分为脂溶性的二萜醌类和水溶性的酚酸类成分，均具有心血管方面的药理作用，近年来研究表明水镕性成分丹参素的扩张心脑血管，抗血小板聚集，清除氧自由基等作用较二萜醌类的丹参酮更强，且水溶性成分是抗心肌缺血的主要成分。由于在药典2000版之前，均未制定含量测定方法，因此对市售的复方丹参片的内在质量进行考核是有必要的。目前，国内文献报道的本品含量的监控成分有总丹参酮、丹参酮ⅡA、原儿茶醛等。在药典2000版中，本品含量控制的是丹参酮ⅡA，而与本品处方一致，功能与主治也一致的复方丹参滴丸，含量控制的是丹参素，综合上述情况，在上市药品质量考核研究中，我们对本品主成分丹参中的丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参素、原儿茶醛含量分别进行了考核。
含量测定采用HPIC方法，分别建立了测定脂溶性的丹参酮I、丹参酮ⅡA和水溶性的丹参素、原儿茶醛的色谱条件，方法的线性关系的相关系数分别为0.9998，0.9999，0.9997和0.9995；精密度试验RSD分别为1.66%(n＝6)，1.25%(n＝6)，1.19%(n＝6)和2.31%(n＝6)，加样回收率平均值分别为101.69%，99.40%，9g.91%和99.39%。本试验考核了三个厂家四个样品，对测定结果分别进行了单因素方差分析，结果显示：四种样品的丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参素的含量有非常显著性的差异(P<0.01＝，原儿茶醛的含量无显著性差异(P>0.05)。且丹参酮ⅡA的含量均未达到药典2000版规定(不得少于0，20mg/片)，低的仅为36.4%，高的为82.80%，相差较大。复方制剂中各有效成分的含量差异较大，势必将影响临床疗效，因此，应该加强中药复方制剂的质控方法研究。
, 百拇医药
关键词 复方丹参片 质量考核 HPLC
复方丹参片为临床常用药物，生产厂家众多。由于在药典2000版之前，均未制定含量测定方法，因此对市售的复方丹参片的内在质量进行考核是有必要的。目前，国内文献报道的控制本品含量的监控成分有总丹参酮、丹参酮B A、原儿茶醛等，在药典2000版中，本品含量控制的是丹参酮ⅡA，而与本品处方一致，功能与主治一致的复方丹参滴丸，含量控制的是丹参素，综合上述情况，在上市药品质量考核研究中，我们对本品主成分丹参中的丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参素、原儿茶醛含量分别进行了考核。现将结果报告如下。
1 考核样品来源：北京市药学会提供的上市药品质量考核品种，三个厂家四个品种。
2 仪器设备和试剂
, 百拇医药
2.1 仪器 HPll00高效液相色谱仪：G1311A四元泵，G1322A在线脱气体，G1313A自动进样器，G1316A柱温箱，G1314A可变波长检测器，HPCHEM色谱工作站。TCQ250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)
2.2 试药 化学对照品：丹参酮I，丹参酮ⅡA，原儿茶醛(中国药品生物制品机检定所)；丹参素(天津天土力制药集团有限公司提供)；甲醇、乙氰为色谱试剂，其余试剂均未分析纯。
3方法与结果
3.1 色谱条件
3.1.1 丹参酮I、丹参酮ⅡA：色谱柱：HypersilODS柱(250×4.0mm，5μm)；流动相：甲醇：水(77：33)；流速：1.5ml/min；检测波长：270nm；柱温：40℃。在此条件下丹参素、原儿茶醛完全分离，且峰型稳定。
, 百拇医药
3.1.2 丹参素、原儿茶醛；色谱柱Hypersit ODS柱(250×4.0mm，5μm)：流动相：甲醇：乙氰：1%冰醋酸(含0.04%IPRB7试剂)为10；2：88；流速；1.0m1/min；检测波长：280nm；柱温：40℃.在此条件下丹参素、原儿茶醛完全分离，且峰型稳定.
3.2 标准曲线制备
3.2.1 丹参酮I、丹参酮ⅡA标准曲线 分别取丹参酮I和丹参酮ⅡA对照品质量，精密称取，加甲醇适量，超声15min使溶解，再加甲醇制成浓度为每1m1含丹参酮I和丹参酮ⅡA各80µg的对照品溶液I。精密吸取对照品溶液I加甲醇稀释，制成每1mI含丹参酮I和丹参酮ⅡA10，20，30，40，50，60µg的标准品，置自动样器，按3.1.1项条件，自动进样10μl，进行色谱分析，以峰面积y对进样浓度C(μg/m1)回归，求得回归方程，线性关系良好，见表1。
, http://www.100md.com 3.2.2 丹参素和原儿茶醛标准曲线 分别取丹参素钠和原儿茶醛对照品适量，精密称取，加甲醇溶解并稀释制成浓度为每1ml含丹参素和原儿茶醛分别为140µg和48µg的对照品溶液B。精密吸取对照品溶液H加甲醇稀释，制成浓度分别为丹参素7，14，28，56，112，140µg/m1，原儿茶醛为2.4，4.8，9.6，19.2，38.4，48.0μg/mI的标准品，置自动样器，按3.1，2项条件，自动进样10μl，进行色谱分析，以峰面积y对进样浓度C(μg/mI)回归，求得回归方程，线性关系良好，见表1。
表1 标准曲线测定结果
成分
线性范围(μg)
回归方程(n＝6)
r
, 百拇医药
丹参酮Ⅰ
0.10—0.60
y＝2.426C-1.586
0.9998
丹参酮ⅡA
0.10—0.60
y＝4.068C-1.797
0.9999
丹参素
0.70—1.40
y＝0.711C-1.86l
0.9997
, 百拇医药
原儿茶醛
0.024—0.48
y＝5.011C-3.944
0.9995
3.3 供试品制备及测定
3.3.1 取供试品10片，除去糖衣或薄膜衣，精密称定，研细，取18，精密称定，置于50m1容量瓶中，加入甲醇25mI，超声处理15min，放冷，滤过，取续滤液，即得.按3.1.1项条件，自动进样10μl，测定丹参酮I和丹参酮ⅡA，结果见表2。
3.3.2 取供试品10片，除去糖衣或薄膜衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置于50ml容量瓶中，加入甲醇适量，超声处理1h，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。按3.1.2项条件，自动进样10μl，测定丹参素和原儿茶醛，结果见表2。
, 百拇医药
表2 复方丹参片含量测定结果
厂家
批号
丹参酮I
丹参酮Ⅱ
丹参素
原儿茶醛
A
980918—45
81.4l±2.51
39.54±0.65
1777±17.58
, 百拇医药
127.9±2.07
B
981209
165.64±2.88
93.08±0.82
3080±30.50
130.7±3.16
C
990205
72.80±0.80
93.66±1.24
1969±28.44
, http://www.100md.com
108.0±3.66
C
20000101
88.82±0.85
58.94±0.99
2670±46.52
123.0±l.73
3.4 精密度试验
3.4.1 丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA 取一供试片剂按3.4.1项制备供试品，置自动进样器中并依法重复进样6次，结果丹参酮I、丹参酮ⅡA含量的RSD分别为：1，66%(n＝6)和1.25%(n＝6)。
3.4.2 丹参素、原儿茶醛 取一供试片剂按3.4，2项制备供试品，置自动进样器中并依法重复进样6次结果丹参素和原儿茶醛含量的RSD分别为：1.19%(n＝6)和2.31%(n＝6)。
, http://www.100md.com
3.5 回收率试验
3.5.1 丹参酮I、丹参酮ⅡA 取含量测定后的四个供试片剂溶液适量，分别加入对照液I适量，得四个供试品，进样测定丹参酮I和丹参酮ⅡA，计算加样回收率，结果见表3。
3.5.2 丹参素和原儿茶醛 取含量测定后的一个供试片剂溶液适量，三份，分别加入对照液Ⅱ适量得三个供试品，进样测定丹参素和原儿茶醛，计算加样回收率，结果见表3。
表3 回收率试验结果
成分
空白含量
μg
对照品加人量
, 百拇医药
μg
测得总量
μg
回收率
%
平均回收率
%
RSD%
丹参酮Ⅰ
0.1325
0.2000
0.3284
97.95
, http://www.100md.com
101.69
3.22
0.1593
0.2400
0.4024
101.29
0.1220
0.3200
0.4610
105.94
0.1925
0.4000
, http://www.100md.com 0.5989
101.60
丹参酮ⅡA
0.1635
0.2000
0.3625
99.50
99.40
1.35
0.1048
0.2400
0.3409
98.37
, http://www.100md.com
0.0581
0.3200
0.3821
101.25
0.1092
0.4000
0.5031
98.47
丹参素
(片剂)
0.4916
0.2800
0.7796
, http://www.100md.com
102.83
99.91
3.12
0.4916
0.3500
0.8298
96.63
0.4916
0.7000
1.1935
100.27
原儿茶醛
(片剂)
, 百拇医药
0.2018
0.0960
0.2984
100.63
99.39
1.08
0.2018
0.1200
0.3204
98.83
0.2018
0.2400
, http://www.100md.com 0.4387
98.71
4 讨论
4.1 分别取对照品溶液、供试品溶液、流动相、丹参滴丸供试液(按药典处理)，依法处理，置自动进样器，进样记录色谱图，以水溶性成分为主的复方丹参滴丸无丹参酮I和丹参酮ⅡA阳性峰，复方丹参片和复方丹参滴丸一样有丹参素和原儿茶醛阳性峰，由色谱图可知本试验条件，样品中的丹参酮I和丹参酮ⅡA、丹参素和原儿茶醛与其他组分分离完全。理论塔板数以丹参酮ⅡA和丹参素计算分别为11220和6947。
4.2 本品的主药丹参的有效成分为脂溶性的二萜醌类和水溶性的酚酸类成分，均具有心血管方面的药理作用，近年来研究表明水溶性成分丹参素的扩张心脑血管，抗血小板聚集，清除氧自由基等作用较二萜醌类的丹参酮更强，且水溶性成分是抗心肌缺血的主要成分。在药典2000版中，处方、功能与主治一致的复方丹参滴九控制的成分为丹参素，因此，本试验同时考察了脂溶性的丹参酮I、丹参酮ⅡA和水溶性的丹参素和原儿茶醛，结果见表2。
4.3 对供试品四种成分的含量分别进行单因素方差分析，结果显示：四种样品的丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参素的含量有非常显著性的差异(P<0.01)，原儿茶醛的含量无显著性差异(P>0.05).且丹参酮ⅡA的含量均未达到药典2000版规定(不得少于0.20mg/片)，低的仅为36.4%，高的为82.80%，相差较多。复方制剂中各有效成分的含量差异较大，势必将影响临床疗效，因此，应该加强中药复方制剂的质控方法研究。
本文摘自 2000北京地区药学学术年会《大会论文集》, 百拇医药
摘 要 复方丹参片为临床常用药物，生产厂家众多。本品的主药丹参的有效成分为脂溶性的二萜醌类和水溶性的酚酸类成分，均具有心血管方面的药理作用，近年来研究表明水镕性成分丹参素的扩张心脑血管，抗血小板聚集，清除氧自由基等作用较二萜醌类的丹参酮更强，且水溶性成分是抗心肌缺血的主要成分。由于在药典2000版之前，均未制定含量测定方法，因此对市售的复方丹参片的内在质量进行考核是有必要的。目前，国内文献报道的本品含量的监控成分有总丹参酮、丹参酮ⅡA、原儿茶醛等。在药典2000版中，本品含量控制的是丹参酮ⅡA，而与本品处方一致，功能与主治也一致的复方丹参滴丸，含量控制的是丹参素，综合上述情况，在上市药品质量考核研究中，我们对本品主成分丹参中的丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参素、原儿茶醛含量分别进行了考核。
含量测定采用HPIC方法，分别建立了测定脂溶性的丹参酮I、丹参酮ⅡA和水溶性的丹参素、原儿茶醛的色谱条件，方法的线性关系的相关系数分别为0.9998，0.9999，0.9997和0.9995；精密度试验RSD分别为1.66%(n＝6)，1.25%(n＝6)，1.19%(n＝6)和2.31%(n＝6)，加样回收率平均值分别为101.69%，99.40%，9g.91%和99.39%。本试验考核了三个厂家四个样品，对测定结果分别进行了单因素方差分析，结果显示：四种样品的丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参素的含量有非常显著性的差异(P<0.01＝，原儿茶醛的含量无显著性差异(P>0.05)。且丹参酮ⅡA的含量均未达到药典2000版规定(不得少于0，20mg/片)，低的仅为36.4%，高的为82.80%，相差较大。复方制剂中各有效成分的含量差异较大，势必将影响临床疗效，因此，应该加强中药复方制剂的质控方法研究。
, 百拇医药
关键词 复方丹参片 质量考核 HPLC
复方丹参片为临床常用药物，生产厂家众多。由于在药典2000版之前，均未制定含量测定方法，因此对市售的复方丹参片的内在质量进行考核是有必要的。目前，国内文献报道的控制本品含量的监控成分有总丹参酮、丹参酮B A、原儿茶醛等，在药典2000版中，本品含量控制的是丹参酮ⅡA，而与本品处方一致，功能与主治一致的复方丹参滴丸，含量控制的是丹参素，综合上述情况，在上市药品质量考核研究中，我们对本品主成分丹参中的丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参素、原儿茶醛含量分别进行了考核。现将结果报告如下。
1 考核样品来源：北京市药学会提供的上市药品质量考核品种，三个厂家四个品种。
2 仪器设备和试剂
, 百拇医药
2.1 仪器 HPll00高效液相色谱仪：G1311A四元泵，G1322A在线脱气体，G1313A自动进样器，G1316A柱温箱，G1314A可变波长检测器，HPCHEM色谱工作站。TCQ250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)
2.2 试药 化学对照品：丹参酮I，丹参酮ⅡA，原儿茶醛(中国药品生物制品机检定所)；丹参素(天津天土力制药集团有限公司提供)；甲醇、乙氰为色谱试剂，其余试剂均未分析纯。
3方法与结果
3.1 色谱条件
3.1.1 丹参酮I、丹参酮ⅡA：色谱柱：HypersilODS柱(250×4.0mm，5μm)；流动相：甲醇：水(77：33)；流速：1.5ml/min；检测波长：270nm；柱温：40℃。在此条件下丹参素、原儿茶醛完全分离，且峰型稳定。
, 百拇医药
3.1.2 丹参素、原儿茶醛；色谱柱Hypersit ODS柱(250×4.0mm，5μm)：流动相：甲醇：乙氰：1%冰醋酸(含0.04%IPRB7试剂)为10；2：88；流速；1.0m1/min；检测波长：280nm；柱温：40℃.在此条件下丹参素、原儿茶醛完全分离，且峰型稳定.
3.2 标准曲线制备
3.2.1 丹参酮I、丹参酮ⅡA标准曲线 分别取丹参酮I和丹参酮ⅡA对照品质量，精密称取，加甲醇适量，超声15min使溶解，再加甲醇制成浓度为每1m1含丹参酮I和丹参酮ⅡA各80µg的对照品溶液I。精密吸取对照品溶液I加甲醇稀释，制成每1mI含丹参酮I和丹参酮ⅡA10，20，30，40，50，60µg的标准品，置自动样器，按3.1.1项条件，自动进样10μl，进行色谱分析，以峰面积y对进样浓度C(μg/m1)回归，求得回归方程，线性关系良好，见表1。
, http://www.100md.com 3.2.2 丹参素和原儿茶醛标准曲线 分别取丹参素钠和原儿茶醛对照品适量，精密称取，加甲醇溶解并稀释制成浓度为每1ml含丹参素和原儿茶醛分别为140µg和48µg的对照品溶液B。精密吸取对照品溶液H加甲醇稀释，制成浓度分别为丹参素7，14，28，56，112，140µg/m1，原儿茶醛为2.4，4.8，9.6，19.2，38.4，48.0μg/mI的标准品，置自动样器，按3.1，2项条件，自动进样10μl，进行色谱分析，以峰面积y对进样浓度C(μg/mI)回归，求得回归方程，线性关系良好，见表1。
表1 标准曲线测定结果
成分
线性范围(μg)
回归方程(n＝6)
r
, 百拇医药
丹参酮Ⅰ
0.10—0.60
y＝2.426C-1.586
0.9998
丹参酮ⅡA
0.10—0.60
y＝4.068C-1.797
0.9999
丹参素
0.70—1.40
y＝0.711C-1.86l
0.9997
, 百拇医药
原儿茶醛
0.024—0.48
y＝5.011C-3.944
0.9995
3.3 供试品制备及测定
3.3.1 取供试品10片，除去糖衣或薄膜衣，精密称定，研细，取18，精密称定，置于50m1容量瓶中，加入甲醇25mI，超声处理15min，放冷，滤过，取续滤液，即得.按3.1.1项条件，自动进样10μl，测定丹参酮I和丹参酮ⅡA，结果见表2。
3.3.2 取供试品10片，除去糖衣或薄膜衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置于50ml容量瓶中，加入甲醇适量，超声处理1h，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。按3.1.2项条件，自动进样10μl，测定丹参素和原儿茶醛，结果见表2。
, 百拇医药
表2 复方丹参片含量测定结果
厂家
批号
丹参酮I
丹参酮Ⅱ
丹参素
原儿茶醛
A
980918—45
81.4l±2.51
39.54±0.65
1777±17.58
, 百拇医药
127.9±2.07
B
981209
165.64±2.88
93.08±0.82
3080±30.50
130.7±3.16
C
990205
72.80±0.80
93.66±1.24
1969±28.44
, http://www.100md.com
108.0±3.66
C
20000101
88.82±0.85
58.94±0.99
2670±46.52
123.0±l.73
3.4 精密度试验
3.4.1 丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA 取一供试片剂按3.4.1项制备供试品，置自动进样器中并依法重复进样6次，结果丹参酮I、丹参酮ⅡA含量的RSD分别为：1，66%(n＝6)和1.25%(n＝6)。
3.4.2 丹参素、原儿茶醛 取一供试片剂按3.4，2项制备供试品，置自动进样器中并依法重复进样6次结果丹参素和原儿茶醛含量的RSD分别为：1.19%(n＝6)和2.31%(n＝6)。
, http://www.100md.com
3.5 回收率试验
3.5.1 丹参酮I、丹参酮ⅡA 取含量测定后的四个供试片剂溶液适量，分别加入对照液I适量，得四个供试品，进样测定丹参酮I和丹参酮ⅡA，计算加样回收率，结果见表3。
3.5.2 丹参素和原儿茶醛 取含量测定后的一个供试片剂溶液适量，三份，分别加入对照液Ⅱ适量得三个供试品，进样测定丹参素和原儿茶醛，计算加样回收率，结果见表3。
表3 回收率试验结果
成分
空白含量
μg
对照品加人量
, 百拇医药
μg
测得总量
μg
回收率
%
平均回收率
%
RSD%
丹参酮Ⅰ
0.1325
0.2000
0.3284
97.95
, http://www.100md.com
101.69
3.22
0.1593
0.2400
0.4024
101.29
0.1220
0.3200
0.4610
105.94
0.1925
0.4000
, http://www.100md.com 0.5989
101.60
丹参酮ⅡA
0.1635
0.2000
0.3625
99.50
99.40
1.35
0.1048
0.2400
0.3409
98.37
, http://www.100md.com
0.0581
0.3200
0.3821
101.25
0.1092
0.4000
0.5031
98.47
丹参素
(片剂)
0.4916
0.2800
0.7796
, http://www.100md.com
102.83
99.91
3.12
0.4916
0.3500
0.8298
96.63
0.4916
0.7000
1.1935
100.27
原儿茶醛
(片剂)
, 百拇医药
0.2018
0.0960
0.2984
100.63
99.39
1.08
0.2018
0.1200
0.3204
98.83
0.2018
0.2400
, http://www.100md.com 0.4387
98.71
4 讨论
4.1 分别取对照品溶液、供试品溶液、流动相、丹参滴丸供试液(按药典处理)，依法处理，置自动进样器，进样记录色谱图，以水溶性成分为主的复方丹参滴丸无丹参酮I和丹参酮ⅡA阳性峰，复方丹参片和复方丹参滴丸一样有丹参素和原儿茶醛阳性峰，由色谱图可知本试验条件，样品中的丹参酮I和丹参酮ⅡA、丹参素和原儿茶醛与其他组分分离完全。理论塔板数以丹参酮ⅡA和丹参素计算分别为11220和6947。
4.2 本品的主药丹参的有效成分为脂溶性的二萜醌类和水溶性的酚酸类成分，均具有心血管方面的药理作用，近年来研究表明水溶性成分丹参素的扩张心脑血管，抗血小板聚集，清除氧自由基等作用较二萜醌类的丹参酮更强，且水溶性成分是抗心肌缺血的主要成分。在药典2000版中，处方、功能与主治一致的复方丹参滴九控制的成分为丹参素，因此，本试验同时考察了脂溶性的丹参酮I、丹参酮ⅡA和水溶性的丹参素和原儿茶醛，结果见表2。
4.3 对供试品四种成分的含量分别进行单因素方差分析，结果显示：四种样品的丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参素的含量有非常显著性的差异(P<0.01)，原儿茶醛的含量无显著性差异(P>0.05).且丹参酮ⅡA的含量均未达到药典2000版规定(不得少于0.20mg/片)，低的仅为36.4%，高的为82.80%，相差较多。复方制剂中各有效成分的含量差异较大，势必将影响临床疗效，因此，应该加强中药复方制剂的质控方法研究。
本文摘自 2000北京地区药学学术年会《大会论文集》, 百拇医药