谷维素和维生素B1增强地西泮的抗焦虑作用
潘励山,尹萍,宁亚清,陈磊,张开镐
(北京大学中国药物依赖性研究所，北京100083)
[摘要] 目的：研究地西泮、谷维素和维生素B1按1:32:8的比例合用后的抗焦虑作用，并同地西泮比较。方法：采用大、小鼠高架十字谜宫模型和大鼠五甲烯四氮唑辨别效应对抗模型。结果：在大、小鼠高架十字迷宫试验中，地西泮与谷维素和维生素B1合用后，大、小鼠在开放臂停留时间百分率明显增加，表现出明显的抗焦虑作用；而且其在开放臂停留时间百分率的增加，明显高于单独使用与其含量相等的地西泮的作用。在大鼠五甲烯四氮唑辨别效应对抗试验中，合用后对抗大鼠五甲烯四氮唑辨别效应的ED50值为23.4 mg﹒kg-1，其地西泮含量为0.6 mg﹒kg-1，远低于地西泮单方的ED50值3.5mg﹒kg-1。结论：谷维素和维生素B1具有增强地西泮的抗焦虑作用。
[关键词] 地西泮；谷维素；维生素B1;高架十字迷宫；五甲烯四氮唑辨别实验
, 百拇医药
[中图分类号] R971.41 [文献标识码] B [文章编号] 1003-3734(2001)
Potentiation of anxiolytic effects of diazepam
by oryanolum and vitamin B1
Pan Li-shan, Yin ping, Ning Ya-qing, Chen Lei, Zhang Kai-gao
(National Institute on Drug Dependence,Peking University, Beijing 100083,China)
[Abstract] Objective: To investigate the anxiolytic effect of compound of diazepam, oryzanolum and vitamin B1 (1:32:8,briefly DOV ) and compare its effect with that of diazepam alone. Methods: The elevated plus-maze test and pentylenetetrazol discrimination test was adopted. Results: In the elevated plus-maze test, the percentage of time that rats and mice for DOV spent in the open arms increased markedly, and was more significant than that of diazepam alone which is equal to the content of diazepam in DOV . In the pentylenetetrazol discrimination test, ED50 for DOV are 23.4 mg﹒kg-1. The content of diazepam is 0.6 mg﹒kg-1 which is too far less than 3.5 mg﹒kg-1 for ED50 of diazepam alone. Conclusion: Oryzanolum and vitamin B1 reinforce anxiolytic effect of diazepam.
, 百拇医药
[Key words] diazepam; oryzanolum; vitamin B1;elevated plus-maze; pentylenetetrazol discrimination
地西泮是一种较常用的抗焦虑药物，但长期使用后会产生依赖性，因此在保证临床使用的同时如何减少其依赖性的产生是这类药物首先要考虑的问题。利用药物之间的协同作用，通过与其他药合用，提高其药效，这样在产生相同药效的情况下，可以大大降低这类药物的使用量，从而降低其依赖性的产生，这是减少依赖性药物依赖性产生的非常有效的一种方法。本研究通过对地西泮、谷维素和维生素B1按1:32:8的比例组成复方(以下简称谷维安。该组方依据另文发表)后的抗焦虑作用的研究，发现其合用后在产生相同的抗焦虑的情况下，可以大大降低地西泮的使用量。
材料和方法
1 药品
, 百拇医药
地西泮，谷维素，维生素B1，批号：960411，由山东济宁市粮油化工厂提供，用1%羧甲基纤维素配成混悬液。五甲烯四氮唑，希格玛产品，用生理氯化钠溶液配制。
2 动物
昆明种小鼠，雄性，18~25g；Wistar大鼠，雄性，180~250g。实验动物均由北京大学医学部实验动物部提供，符合国家二级实验动物标准。
3 方法
3.1小鼠高架十字谜宫试验 [1] 迷宫为木制的，由两个开放臂和两个封闭臂组成。开放臂为30 cm ×5cm，封闭臂为30 cm ×5 cm ×15cm，开放臂和封闭臂交叉处为一个5 cm ×5cm的中央平台，开放臂和封闭臂底部离地面38.5cm。实验是在上午8:30~11:30进行。将实验组和对照组动物分别灌胃给予药物或溶剂30min后轻柔地抓到迷宫的中央，动物的头朝向开放臂，松开手后立即开始记录5min内动物在开放臂和封闭臂内停留的时间和进入次数，并计算在开放臂停留时间占开放臂和封闭臂停留时间的百分比。
, 百拇医药
3.2 大鼠高架十字谜宫试验 [2] 迷宫为木制的，由两个开放臂和两个封闭臂组成。开放臂为50 cm ×10cm，封闭臂为50 cm × 10 cm × 40 cm，开放臂和封闭臂交叉处为一个10 cm ×10cm的中央平台，开放臂和封闭臂底部离地面50cm。实验是在上午8:30~11:30进行。将实验组和对照组动物分别灌胃给予药物或溶剂30min后轻柔地抓到迷宫的中央，动物的头朝向开放臂，松开手后立即开始记录5min内动物在开放臂和封闭臂内停留的时间和进入次数，并计算在开放臂停留时间占开放臂和封闭臂停留时间的百分比。
3.3 五甲烯四氮唑辨别刺激拮抗试验[3]
3.3.1 药物辨别装置 大鼠辨别训练箱为经过改进的Skiner式双杆训练箱。训练箱置于具有避光、隔音及通风换气功能的控制箱内。实验过程由计算机自动控制完成。
3.3.2 建立大鼠五甲烯四氮唑辨别模型 指定训练箱内一个杆为药物(五甲烯四氮唑)杆，另一个杆为盐水杆，每天给大鼠i.p五甲烯四氮唑20mg﹒kg-1(D期)或生理氯化钠溶液(N期)15min后放入辨别训练箱开始训练大鼠在D期踏药物杆、在N期踏盐水杆。踏正确杆时便可获得食物强化，踏错误杆得不到强化。从 FR1(踏一次正确杆得到一次强化)开始，依D，N，D，N…..次序循环，每天训练30min为一个试验期，每个试验期结束时记录大鼠踏杆的正确率。若连续4个试验期踏杆正确率均大于80%，则FR增加1，直至FR10(踏10次正确杆得到一次强化)。在FR10条件下，连续4d踏杆正确率均达80%以上，则表明大鼠已建立了对五甲烯四氮唑的辨别效应。
, 百拇医药
3.3.3五甲烯四氮唑辨别效应对抗试验 对五甲烯四氮唑已形成稳定辨别效应的大鼠灌胃给予受试药物或溶剂后15min 腹腔注射20mg﹒kg-1的五甲烯四氮唑，15min后放入辨别刺激试验箱测定大鼠对五甲烯四氮唑的辨别反应。
4 数据处理
数据以均数±标准差表示，组间比较采用成组t-检验，ED50值采用Bliss法计算。
结 果
1 小鼠高架十字迷宫抗焦虑实验
同对照组相比，谷维安3个剂量组和地西泮3个剂量组在开放臂停留时间的百分率都明显增加(P<0.01)，表明都产生了明显的抗焦虑作用。地西泮大、中、小三个剂量组的剂量分别与相应剂量的谷维安所含的地西泮的量相等。谷维安与相应剂量的地西泮相比，谷维安大剂量组在开臂停留时间的百分率明显高于地西泮大剂量组，这表明地西泮与谷维素、维生素B1合用后，地西泮的抗焦虑作用得到明显的加强。结果见表1。
, 百拇医药
表1 各组小鼠在开放臂停留时间百分率的比较
组别
剂量/ mg﹒kg-1
动物数
开放臂时间/%
对照组
地西泮
谷维安
--
0.125
1.0
3.0
, 百拇医药 5.125
41.0
123.0
15
15
15
15
15
15
15
13.5±10.5
48.2±12.3a
60.3±19.7 a
, http://www.100md.com
74.4±14.6 a
43.0±10.5 a
59.7±14.6 a
83.8±8.6 ab
a：与溶剂对照组比较，P <0.01 ；b：与地西泮比较， P<0.05。
2 大鼠高架十字抗焦虑实验
同对照组相比，谷维安3个剂量组和地西泮3个剂量组在开臂停留时间的百分率都明显增加(P<0.01)，表明都产生了明显的抗焦虑作用。地西泮3个剂量组的剂量分别与相应剂量的谷维安组所含的地西泮的量相等。谷维安与相应剂量的地西泮相比，谷维安大、中剂量组在开放臂停留时间的百分率明显高于地西泮大、中剂量组，这表明地西泮与谷维素、维生素B1合用后，地西泮的抗焦虑作用得到明显的加强。结果见表2。
, 百拇医药
表2 各组大鼠在开放臂停留时间百分率的比较
组别
剂量/ mg﹒kg-1
动物数
开放臂时间/%
对照
地西泮
谷维安
0.125
0.50
2.0
5.125
, http://www.100md.com 20.5
82.0
10
10
10
10
10
10
10
8.6±4.6
17.2±6.0a
37.6±4.9 a
58.0±11.7 a
, 百拇医药
17.9±7.2 a
49.4±12.7 ab
70.0±13.3 ab
a: 与对照组比，P<0.01；b: 与地西泮组比，P<0.05.
3 五甲烯四氮唑辨别效应对抗试验
谷维安和地西泮对抗大鼠五甲烯四氮唑辨别刺激效应的ED50值分别为23.4和3.5 mg﹒kg-1。复方地西泮23.4 mg﹒kg-1的剂量中含0.6 mg﹒kg-1的地西泮。远远低于单独使用地西泮所测的ED50值3.5 mg﹒kg-1。这表明地西泮与谷维素和维生素B1合用后，地西泮的抗焦虑作用得到了明显的加强。
讨 论
, http://www.100md.com 本研究采用了三种抗焦虑方法：大、小鼠高架十字谜宫法和大鼠五甲烯四氮唑辨别法，对地西泮与谷维素和维生素B1合用后的抗焦虑作用进行了研究，并同单独使用地西泮的抗焦虑作用进行了比较。3种方法都表明，地西泮的抗焦虑作用在合用后得到了明显的加强。但其作用机制还不十分清楚。谷维素的协同作用很可能与其调节间脑功能，激活与自主神经系统有关的丘脑下部和大脑边缘系统，改善自主神经功能的作用有关[4]；维生素B1的协同作用很可能与其在能量代谢中的作用有关[4]。地西泮与谷维素和维生素B1合用后，大大增强了地西泮的抗焦虑作用，这一点在临床上是很有实际意义的。因为在产生相同药效的情况下，这种复方可以降低地西泮的用量，从而减少其依赖性的产生。
[作者简介] 潘励山(1964-)，男，副研究员，理学硕士。主要从事药物依赖性机制及镇痛药和治疗阿片类戒断症状脱毒药的药理毒理评价。联系电话：(010)62091343，E-mail:panls@mail.bjmu.edu.cn。
[参考文献]
, 百拇医药
[1] Lister RG. The use of plus-maze to measure anxiety in the mouse[J]. Psychopharmacology, 1987, 92:180-185.
[2] Pellow S, Chopin P, File SE, et al. Validation of open : closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat[J]. J Neurosci Methods, 1985,14:149-167.
[3]Shearman G and Lal H. Discriminative stimulus properties of pentylenetetrazol and bemegride: some generalization and antagonism tests[J]. Psychopharmacology, 1979,64:315-319.
[4] 江明性. 新编实用药物学[M]. 北京：科学出版社，2000. 114,472.
(收稿日期：201-07-05 修回日期：2001-10-10), 百拇医药
(北京大学中国药物依赖性研究所，北京100083)
[摘要] 目的：研究地西泮、谷维素和维生素B1按1:32:8的比例合用后的抗焦虑作用，并同地西泮比较。方法：采用大、小鼠高架十字谜宫模型和大鼠五甲烯四氮唑辨别效应对抗模型。结果：在大、小鼠高架十字迷宫试验中，地西泮与谷维素和维生素B1合用后，大、小鼠在开放臂停留时间百分率明显增加，表现出明显的抗焦虑作用；而且其在开放臂停留时间百分率的增加，明显高于单独使用与其含量相等的地西泮的作用。在大鼠五甲烯四氮唑辨别效应对抗试验中，合用后对抗大鼠五甲烯四氮唑辨别效应的ED50值为23.4 mg﹒kg-1，其地西泮含量为0.6 mg﹒kg-1，远低于地西泮单方的ED50值3.5mg﹒kg-1。结论：谷维素和维生素B1具有增强地西泮的抗焦虑作用。
[关键词] 地西泮；谷维素；维生素B1;高架十字迷宫；五甲烯四氮唑辨别实验
, 百拇医药
[中图分类号] R971.41 [文献标识码] B [文章编号] 1003-3734(2001)
Potentiation of anxiolytic effects of diazepam
by oryanolum and vitamin B1
Pan Li-shan, Yin ping, Ning Ya-qing, Chen Lei, Zhang Kai-gao
(National Institute on Drug Dependence,Peking University, Beijing 100083,China)
[Abstract] Objective: To investigate the anxiolytic effect of compound of diazepam, oryzanolum and vitamin B1 (1:32:8,briefly DOV ) and compare its effect with that of diazepam alone. Methods: The elevated plus-maze test and pentylenetetrazol discrimination test was adopted. Results: In the elevated plus-maze test, the percentage of time that rats and mice for DOV spent in the open arms increased markedly, and was more significant than that of diazepam alone which is equal to the content of diazepam in DOV . In the pentylenetetrazol discrimination test, ED50 for DOV are 23.4 mg﹒kg-1. The content of diazepam is 0.6 mg﹒kg-1 which is too far less than 3.5 mg﹒kg-1 for ED50 of diazepam alone. Conclusion: Oryzanolum and vitamin B1 reinforce anxiolytic effect of diazepam.
, 百拇医药
[Key words] diazepam; oryzanolum; vitamin B1;elevated plus-maze; pentylenetetrazol discrimination
地西泮是一种较常用的抗焦虑药物，但长期使用后会产生依赖性，因此在保证临床使用的同时如何减少其依赖性的产生是这类药物首先要考虑的问题。利用药物之间的协同作用，通过与其他药合用，提高其药效，这样在产生相同药效的情况下，可以大大降低这类药物的使用量，从而降低其依赖性的产生，这是减少依赖性药物依赖性产生的非常有效的一种方法。本研究通过对地西泮、谷维素和维生素B1按1:32:8的比例组成复方(以下简称谷维安。该组方依据另文发表)后的抗焦虑作用的研究，发现其合用后在产生相同的抗焦虑的情况下，可以大大降低地西泮的使用量。
材料和方法
1 药品
, 百拇医药
地西泮，谷维素，维生素B1，批号：960411，由山东济宁市粮油化工厂提供，用1%羧甲基纤维素配成混悬液。五甲烯四氮唑，希格玛产品，用生理氯化钠溶液配制。
2 动物
昆明种小鼠，雄性，18~25g；Wistar大鼠，雄性，180~250g。实验动物均由北京大学医学部实验动物部提供，符合国家二级实验动物标准。
3 方法
3.1小鼠高架十字谜宫试验 [1] 迷宫为木制的，由两个开放臂和两个封闭臂组成。开放臂为30 cm ×5cm，封闭臂为30 cm ×5 cm ×15cm，开放臂和封闭臂交叉处为一个5 cm ×5cm的中央平台，开放臂和封闭臂底部离地面38.5cm。实验是在上午8:30~11:30进行。将实验组和对照组动物分别灌胃给予药物或溶剂30min后轻柔地抓到迷宫的中央，动物的头朝向开放臂，松开手后立即开始记录5min内动物在开放臂和封闭臂内停留的时间和进入次数，并计算在开放臂停留时间占开放臂和封闭臂停留时间的百分比。
, 百拇医药
3.2 大鼠高架十字谜宫试验 [2] 迷宫为木制的，由两个开放臂和两个封闭臂组成。开放臂为50 cm ×10cm，封闭臂为50 cm × 10 cm × 40 cm，开放臂和封闭臂交叉处为一个10 cm ×10cm的中央平台，开放臂和封闭臂底部离地面50cm。实验是在上午8:30~11:30进行。将实验组和对照组动物分别灌胃给予药物或溶剂30min后轻柔地抓到迷宫的中央，动物的头朝向开放臂，松开手后立即开始记录5min内动物在开放臂和封闭臂内停留的时间和进入次数，并计算在开放臂停留时间占开放臂和封闭臂停留时间的百分比。
3.3 五甲烯四氮唑辨别刺激拮抗试验[3]
3.3.1 药物辨别装置 大鼠辨别训练箱为经过改进的Skiner式双杆训练箱。训练箱置于具有避光、隔音及通风换气功能的控制箱内。实验过程由计算机自动控制完成。
3.3.2 建立大鼠五甲烯四氮唑辨别模型 指定训练箱内一个杆为药物(五甲烯四氮唑)杆，另一个杆为盐水杆，每天给大鼠i.p五甲烯四氮唑20mg﹒kg-1(D期)或生理氯化钠溶液(N期)15min后放入辨别训练箱开始训练大鼠在D期踏药物杆、在N期踏盐水杆。踏正确杆时便可获得食物强化，踏错误杆得不到强化。从 FR1(踏一次正确杆得到一次强化)开始，依D，N，D，N…..次序循环，每天训练30min为一个试验期，每个试验期结束时记录大鼠踏杆的正确率。若连续4个试验期踏杆正确率均大于80%，则FR增加1，直至FR10(踏10次正确杆得到一次强化)。在FR10条件下，连续4d踏杆正确率均达80%以上，则表明大鼠已建立了对五甲烯四氮唑的辨别效应。
, 百拇医药
3.3.3五甲烯四氮唑辨别效应对抗试验 对五甲烯四氮唑已形成稳定辨别效应的大鼠灌胃给予受试药物或溶剂后15min 腹腔注射20mg﹒kg-1的五甲烯四氮唑，15min后放入辨别刺激试验箱测定大鼠对五甲烯四氮唑的辨别反应。
4 数据处理
数据以均数±标准差表示，组间比较采用成组t-检验，ED50值采用Bliss法计算。
结 果
1 小鼠高架十字迷宫抗焦虑实验
同对照组相比，谷维安3个剂量组和地西泮3个剂量组在开放臂停留时间的百分率都明显增加(P<0.01)，表明都产生了明显的抗焦虑作用。地西泮大、中、小三个剂量组的剂量分别与相应剂量的谷维安所含的地西泮的量相等。谷维安与相应剂量的地西泮相比，谷维安大剂量组在开臂停留时间的百分率明显高于地西泮大剂量组，这表明地西泮与谷维素、维生素B1合用后，地西泮的抗焦虑作用得到明显的加强。结果见表1。
, 百拇医药
表1 各组小鼠在开放臂停留时间百分率的比较
组别
剂量/ mg﹒kg-1
动物数
开放臂时间/%
对照组
地西泮
谷维安
--
0.125
1.0
3.0
, 百拇医药 5.125
41.0
123.0
15
15
15
15
15
15
15
13.5±10.5
48.2±12.3a
60.3±19.7 a
, http://www.100md.com
74.4±14.6 a
43.0±10.5 a
59.7±14.6 a
83.8±8.6 ab
a：与溶剂对照组比较，P <0.01 ；b：与地西泮比较， P<0.05。
2 大鼠高架十字抗焦虑实验
同对照组相比，谷维安3个剂量组和地西泮3个剂量组在开臂停留时间的百分率都明显增加(P<0.01)，表明都产生了明显的抗焦虑作用。地西泮3个剂量组的剂量分别与相应剂量的谷维安组所含的地西泮的量相等。谷维安与相应剂量的地西泮相比，谷维安大、中剂量组在开放臂停留时间的百分率明显高于地西泮大、中剂量组，这表明地西泮与谷维素、维生素B1合用后，地西泮的抗焦虑作用得到明显的加强。结果见表2。
, 百拇医药
表2 各组大鼠在开放臂停留时间百分率的比较
组别
剂量/ mg﹒kg-1
动物数
开放臂时间/%
对照
地西泮
谷维安
0.125
0.50
2.0
5.125
, http://www.100md.com 20.5
82.0
10
10
10
10
10
10
10
8.6±4.6
17.2±6.0a
37.6±4.9 a
58.0±11.7 a
, 百拇医药
17.9±7.2 a
49.4±12.7 ab
70.0±13.3 ab
a: 与对照组比，P<0.01；b: 与地西泮组比，P<0.05.
3 五甲烯四氮唑辨别效应对抗试验
谷维安和地西泮对抗大鼠五甲烯四氮唑辨别刺激效应的ED50值分别为23.4和3.5 mg﹒kg-1。复方地西泮23.4 mg﹒kg-1的剂量中含0.6 mg﹒kg-1的地西泮。远远低于单独使用地西泮所测的ED50值3.5 mg﹒kg-1。这表明地西泮与谷维素和维生素B1合用后，地西泮的抗焦虑作用得到了明显的加强。
讨 论
, http://www.100md.com 本研究采用了三种抗焦虑方法：大、小鼠高架十字谜宫法和大鼠五甲烯四氮唑辨别法，对地西泮与谷维素和维生素B1合用后的抗焦虑作用进行了研究，并同单独使用地西泮的抗焦虑作用进行了比较。3种方法都表明，地西泮的抗焦虑作用在合用后得到了明显的加强。但其作用机制还不十分清楚。谷维素的协同作用很可能与其调节间脑功能，激活与自主神经系统有关的丘脑下部和大脑边缘系统，改善自主神经功能的作用有关[4]；维生素B1的协同作用很可能与其在能量代谢中的作用有关[4]。地西泮与谷维素和维生素B1合用后，大大增强了地西泮的抗焦虑作用，这一点在临床上是很有实际意义的。因为在产生相同药效的情况下，这种复方可以降低地西泮的用量，从而减少其依赖性的产生。
[作者简介] 潘励山(1964-)，男，副研究员，理学硕士。主要从事药物依赖性机制及镇痛药和治疗阿片类戒断症状脱毒药的药理毒理评价。联系电话：(010)62091343，E-mail:panls@mail.bjmu.edu.cn。
[参考文献]
, 百拇医药
[1] Lister RG. The use of plus-maze to measure anxiety in the mouse[J]. Psychopharmacology, 1987, 92:180-185.
[2] Pellow S, Chopin P, File SE, et al. Validation of open : closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat[J]. J Neurosci Methods, 1985,14:149-167.
[3]Shearman G and Lal H. Discriminative stimulus properties of pentylenetetrazol and bemegride: some generalization and antagonism tests[J]. Psychopharmacology, 1979,64:315-319.
[4] 江明性. 新编实用药物学[M]. 北京：科学出版社，2000. 114,472.
(收稿日期：201-07-05 修回日期：2001-10-10), 百拇医药