国产伊曲康唑胶囊剂的生物等效性研究
傅强1，朱珠1，刘海净2，徐小薇1，李大魁1(1.中国医学科学院中国协和医科大学-北京协和医院，北京 100730；2.唐山开滦矿物局医院, 河北 唐山063000)
摘要：目的 以进口伊曲康唑胶囊(商品名斯皮仁诺胶囊)为对照品对国产伊曲康唑胶囊剂进行生物等效性评价。方法 18名健康成年男性受试者采用随机交叉分组自身对照试验设计，分别于标准早餐后5min po 200mg单剂量受试和对照制剂并采集72h内动态血标本；用改进的HPLC测定血清中药物浓度并计算相关参数tmax，Cmax，AUC和 t1/2等。按新药审评准对AUC和Cma进行双单侧t检验以判定两种制度是否生物等效。结果 测试品种和对照品生物利用度参数：tmax分别为(4.6±1.3)和(4.1±1.3)h，Cmax分别为(319.2±162.2)和(289.0±110.4)ng·ml-1，t1/2β分别为(23.8±4.7)h，AUC0～∞分别为(5080.5±2451.3)和(4652.1±1610.0)ng·h·ml-1。两组间各参数均无统计学差异(P>0.05)。双单侧检验结果分别为t(H)AUC=2.1598 ,t(L) AUC =3.4587,t(H)cmax=3.3420和t(L)cmax=4.5615，t0.05(16)=1.746；P值均小于0.05。结论 国产胶囊剂的相对生物利用度为102.27%；国产伊曲康唑胶囊与斯皮仁诺胶囊为等效制剂。
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关键词：伊曲康唑；生物等效性；高效液相色谱法
中图分类号：R969.1 文献标识码:A 文章编号:1001-2494 (2001) 05-0323-03
伊曲康唑(itraconazole，ITZ)是一合成广谱抗真菌药，为三氯唑衍生物。对皮肤癣菌、酵母菌、曲霉菌等真菌感染有效。长期以来国内临床只有进口伊曲康唑(商品名斯皮仁诺)口服胶囊剂，但价格较高导致了医生和患者使用上的局限性。我国天津药物研究院已合成研制出伊曲康唑口服胶囊剂。我院按新药审评标准以同类进口产品(斯皮仁诺)为对照品，对该制剂进行生物等效性评价研究。
1 材料和方法
1. 1 受试者选择
18名健康成年男性，年龄(23.8±3.4)岁(20～35岁),体重(64.1±7.1)kg(52～76kg),身高(171.4±5.4)cm(160～182cm),身高体重理想分数控制在±20%内.受试者于试验前6个月内未患严重疾病、前一个月及试验期间未用任何药物且无吸烟、酗酒等不良嗜好;通过体检并自愿签署知情同意书后入选。
, 百拇医药
1. 2 药品
受试品为伊曲康唑胶囊剂(天津药物研究院研制，天津力生制药厂生产，批号 971001，每粒100mg)；对照品为斯皮仁诺胶囊剂(杨森生物制品公司，西安杨森公司分装，生产批号980819380，分装批号81019923，每粒100mg)。
1. 3 试验与给药方案
采用随机分组自身对照交叉试验，两次同隔为3周。于标淮早餐后5min，以100ml温开水分别送服单剂量200mg受试品或对照品；服药后3h给200ml糖水一次，6h进标准午餐。
1.4 血样采集
分别于服药前和服药后O.5，1，2，3，4，5，6，7，9，12，24，48和72h采集前臂静脉血2ml，离心分离出血清后保存于-70℃冰箱待测。
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1.5 样品测定
用本室改进的RP-HPLC测定方法[1]。仪器为日本岛津LC-10A系统；流动相为甲醇-0.5%醋酸铵。乙醚(365：11O：25)，流速O.8mL·min-1；紫外检测波长261nm；SU-PERCOSIL LC-18色谱柱，柱温40℃。200μL待测血清加O.2ml磷酸缓冲液(O.5 mol·L-1，pH8.O)及叔丁基甲醚1.Oml，振荡离心后转移有机相并用氮气吹干；再以60μL 含联苯( IS)0.4mg·L-1的流动相复溶后，取25～50μL进样分析。
1.6 数据分析
用PCNONLIN软件(美国SCI v4.2)的非房室模型法得到个体主要参数cmax,tmax，t1/2，AUC71～∞及AUCo～∞，同时AUC72～∞应小于20%AUCo～∞(考查样本动态采点时间是否充分)。再行方差分析(cmax和AUC为非正态分布需先对数化)；分别计算二参数的组间个体比值并对数化进行双单侧t检验(参照“生物等效性试验的突施注意事项及计算简法”)，按AUC：80%～125%和cmax：70%～143%为判定标准，考察受试药与对照药是否具生物等效性。
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2 结果
2.1 方法学
建立的HPLC测定法，色谱分离良好。在10～500μg·L-1范围内呈良好线性(r=O.9997，n=5)；低、中、高3种血清质控样品的批内误差(n=10)均小于4%，批间误差(n=6)均小于3%；方法学回收率( n=16)在97%～102%之间。
2.2 血清药-时浓度及曲线
18名健康受试者分别po单剂量200mg受试和对照品后，72h内组间平均血清动态药物浓度见表1，可看出两制剂均于服药后4h左右达峰，峰值基本落在150～500ng·ml-1之间，并呈现出较明显的个体差异。
2.3 生物利用度参数
非房室模型分析获得的组间平均生物利用度参数列于表2。从两者均值和标准差的数据波动可看
, 百拇医药
表1 受试者po测试品和对照品后血清ITZ浓度。n=18，±s
时间/h
测试品/ng·ml-1
对照品/ng·m l-1
0.5
3.7±4.0
4.1±3.4
1
16.1±22.0
23.4±29.9
2
117..3±175.6
, 百拇医药
141.1±111.8
3
232.3±197.6
221.7±125.1
4
271.9±176.9
249.4±125.6
5
2672±150.3
234.7±98.6
6
247.5±107.9
, http://www.100md.com
209.9±81.3
7
206.0±81.9
168.1±50.5
9
135.3±48.9
121.6±33.4
12
95.1±37.0
87.7±32.2
24
60.4±28.2
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57.7±24.5
48
32.6±18.8
27.5±11.7
72
14.7±7.9
14.1±6.4
出具较大的个体代谢差异，这也是此类药物的一个主要体内行为特征。因此在临床持续应用中，血药浓度监测是很有必要的。
表2 受试者分别po测试品和对照品后生物利用度参数.n=18, ±s
生物利用度参数
, http://www.100md.com 测试品
对照品
Cmax/ng·ml-1
319.2±162.2
289.0±110.4
tmax/h
4.6 ±1.3
4.1±1.3
t1/2β/h
23.8±4.7
23.2±4.8
AUC0-∞/ ng·h·ml-1
, 百拇医药
5080.5±2451.3
4652.1±1610.0
2.4 数据分析
对照与测试组间参数的方差分析结果见表3；双单侧t检验结果见表4。可看出两者的AUC和Cmax双单侧t检验均等效。
表3 组间AUC及Cmax的方差分析结果
方差来源
df
SS
MS
F
α=0.05
, 百拇医药
AUC0-∞
个体间
17
5.0651
0.2979
5.3699
F0.05(17,16)=2.29
周期间
1
0.0859
0.0859
1.5483
, 百拇医药 F0.05(1,16)=4.491)
处方间
1
0.0240
0.540
0.4318
F0.05(1,16)=4.491)
误差
16
0.8878
0.0555
总变异
, 百拇医药 35
6.0628
Cmax
个体间
17
4.7332
0.2784
3.8032
F0.05(17,16)=2.29
周期间
1
0.1429
0.1429
, 百拇医药
1.9513
F0.05(1,16)=4.491)
处方间
1
0.0364
0.0364
0.4977
F0.05(1,16)=4.491)
误差
16
1.1713
0.0732
, http://www.100md.com
总变异
35
6.0838
注：1)p>0.05无显著差异
3 讨论
2. 1 给药方案 ①餐后服药：由于食物对伊曲康唑的胃肠吸收有促进作用，且于口服后4～5h血药浓度达峰值，临床治疗通常于饭后立即口服该药[2]。故本试验没有选用空腹给药而是餐后给药，即受试者头晚禁食10h以上，于当天早晨统一进标准餐，餐后5min以100ml温开水送服200mg胶囊剂；服药后6h进标准午餐(避开达峰时间)，并定时定量饮水。②单剂量给药：该药具较长的消除半衰期(24～36h)，po7～14体内药物可达稳态浓度；其主要在肝脏代谢。而临床通常以连续7d服药为治疗单元，并要密切注意肝功能变化。因此对健康受试者来说，不宜进行多剂量达稳态给药方案进行相对生物利用度/生物等效性试验。否则，即使是轻微的肝功能损害，不但对健康受试者不利，而且势必影响该药的代谢消除行为，导致试验结果的不平行和人为差异。③周期间隔：考虑到伊曲康唑半衰期较长，交叉试验的两次间隔定为3周时间，以保证首次试验所服药品在体内完全清除。
, 百拇医药
组别
结果
AUC0-∞
第一组 n1=8
(T:R) d1=-0.91742
v1=0.02361
T(H)=2.15981 T(L)=3.45868
t0.05(16)=1.746
Fr(%)=anti Log(d)=102.27%
结论:高低测t检验均P<0.05,等效
第二组 n2=10
, 百拇医药
(T:R) d2=0.58268
v2=0.01923
Cmax
第一组 n1=8
(T:R) d1=-0.24057
v1=0.03552
T(H)=3.34204 T(L)=4.56147
t0.05(16)=1.746
结论:高低测t检验均P<0.05,等效
第二组 n2=10
(T:R) d2=0.73794
, 百拇医药
v2=0.02213
3. 3 个体差异 ①个体间差异：伊曲康唑主要在肝脏代谢，肝药酶活性可直接影响到首过代谢；同时边续服用本药也可导致肝药酶活性的变化,从而可能造成他药和自身口服生物利用度改变及体内血药浓度的改变,导致较大的个体间差异。②个体内差异：即使同一个体，肝药酶活性也可能随情绪、睡眠、活动等机体善或生理周期的变化而改变；从而导致相同个体在不同周期首过效应的不同，体现出较大的个体内差异，最常见的药酶代谢个体内差异实例为酒精代谢。此外，受试者进标准早餐的平均时间可控，而瞬时进餐食物顺序及速度则难以控制；故餐后5min服药时的胃内容物状况的不同，可能导致相同个体在不同受试周期所服胶囊剂的胃内崩解差异，而导致个体内吸收速率的较大波动。
因此，对于具较高肝提取率的口服药品，考虑到其较大的道过个体差异，国外有报道采用“随机分组交叉重复试验”设计，进行生物利用度/生物等效性评价。例如为两品种间比较，则按随机交叉四组进行。不论是测试品还是对照品均于不同周期重复用药。这样对每一个体和每一药品来说，均有两个周期的数据；再进行统计学分析时，同一药品的个体差异可得到一定的校正。当然还有其它一些文献观点和参考方案，但目前都有其局限性且不具法定意义[3]。
, 百拇医药
4 结论
国产伊曲康唑胶囊剂相对进口斯皮仁诺胶囊的生物利用度为102.27%。该制剂与同类进产品为等效制剂。
参考文献
[1] 傅强，刘海净，朱珠，等. 改进的人血清中伊曲康唑浓度的HPLC测定法[J]。
中国药学杂志，2000，35(12)：838.
[2] Barone JA,Koh JG,Bierman RH,et al. Food interaction and steady-state
pharmacokinetics of itraconazole capsules in healthy male volunteers
[j] . Antimicrob Agents Chemother,1993,37(4): 778.
[3] 杜小莉，李大魁，朱珠. 生物等效性评价方法的进展[J]。中国临床药理学杂志
，2000，16(3)：216。, 百拇医药
摘要：目的 以进口伊曲康唑胶囊(商品名斯皮仁诺胶囊)为对照品对国产伊曲康唑胶囊剂进行生物等效性评价。方法 18名健康成年男性受试者采用随机交叉分组自身对照试验设计，分别于标准早餐后5min po 200mg单剂量受试和对照制剂并采集72h内动态血标本；用改进的HPLC测定血清中药物浓度并计算相关参数tmax，Cmax，AUC和 t1/2等。按新药审评准对AUC和Cma进行双单侧t检验以判定两种制度是否生物等效。结果 测试品种和对照品生物利用度参数：tmax分别为(4.6±1.3)和(4.1±1.3)h，Cmax分别为(319.2±162.2)和(289.0±110.4)ng·ml-1，t1/2β分别为(23.8±4.7)h，AUC0～∞分别为(5080.5±2451.3)和(4652.1±1610.0)ng·h·ml-1。两组间各参数均无统计学差异(P>0.05)。双单侧检验结果分别为t(H)AUC=2.1598 ,t(L) AUC =3.4587,t(H)cmax=3.3420和t(L)cmax=4.5615，t0.05(16)=1.746；P值均小于0.05。结论 国产胶囊剂的相对生物利用度为102.27%；国产伊曲康唑胶囊与斯皮仁诺胶囊为等效制剂。
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关键词：伊曲康唑；生物等效性；高效液相色谱法
中图分类号：R969.1 文献标识码:A 文章编号:1001-2494 (2001) 05-0323-03
伊曲康唑(itraconazole，ITZ)是一合成广谱抗真菌药，为三氯唑衍生物。对皮肤癣菌、酵母菌、曲霉菌等真菌感染有效。长期以来国内临床只有进口伊曲康唑(商品名斯皮仁诺)口服胶囊剂，但价格较高导致了医生和患者使用上的局限性。我国天津药物研究院已合成研制出伊曲康唑口服胶囊剂。我院按新药审评标准以同类进口产品(斯皮仁诺)为对照品，对该制剂进行生物等效性评价研究。
1 材料和方法
1. 1 受试者选择
18名健康成年男性，年龄(23.8±3.4)岁(20～35岁),体重(64.1±7.1)kg(52～76kg),身高(171.4±5.4)cm(160～182cm),身高体重理想分数控制在±20%内.受试者于试验前6个月内未患严重疾病、前一个月及试验期间未用任何药物且无吸烟、酗酒等不良嗜好;通过体检并自愿签署知情同意书后入选。
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1. 2 药品
受试品为伊曲康唑胶囊剂(天津药物研究院研制，天津力生制药厂生产，批号 971001，每粒100mg)；对照品为斯皮仁诺胶囊剂(杨森生物制品公司，西安杨森公司分装，生产批号980819380，分装批号81019923，每粒100mg)。
1. 3 试验与给药方案
采用随机分组自身对照交叉试验，两次同隔为3周。于标淮早餐后5min，以100ml温开水分别送服单剂量200mg受试品或对照品；服药后3h给200ml糖水一次，6h进标准午餐。
1.4 血样采集
分别于服药前和服药后O.5，1，2，3，4，5，6，7，9，12，24，48和72h采集前臂静脉血2ml，离心分离出血清后保存于-70℃冰箱待测。
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1.5 样品测定
用本室改进的RP-HPLC测定方法[1]。仪器为日本岛津LC-10A系统；流动相为甲醇-0.5%醋酸铵。乙醚(365：11O：25)，流速O.8mL·min-1；紫外检测波长261nm；SU-PERCOSIL LC-18色谱柱，柱温40℃。200μL待测血清加O.2ml磷酸缓冲液(O.5 mol·L-1，pH8.O)及叔丁基甲醚1.Oml，振荡离心后转移有机相并用氮气吹干；再以60μL 含联苯( IS)0.4mg·L-1的流动相复溶后，取25～50μL进样分析。
1.6 数据分析
用PCNONLIN软件(美国SCI v4.2)的非房室模型法得到个体主要参数cmax,tmax，t1/2，AUC71～∞及AUCo～∞，同时AUC72～∞应小于20%AUCo～∞(考查样本动态采点时间是否充分)。再行方差分析(cmax和AUC为非正态分布需先对数化)；分别计算二参数的组间个体比值并对数化进行双单侧t检验(参照“生物等效性试验的突施注意事项及计算简法”)，按AUC：80%～125%和cmax：70%～143%为判定标准，考察受试药与对照药是否具生物等效性。
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2 结果
2.1 方法学
建立的HPLC测定法，色谱分离良好。在10～500μg·L-1范围内呈良好线性(r=O.9997，n=5)；低、中、高3种血清质控样品的批内误差(n=10)均小于4%，批间误差(n=6)均小于3%；方法学回收率( n=16)在97%～102%之间。
2.2 血清药-时浓度及曲线
18名健康受试者分别po单剂量200mg受试和对照品后，72h内组间平均血清动态药物浓度见表1，可看出两制剂均于服药后4h左右达峰，峰值基本落在150～500ng·ml-1之间，并呈现出较明显的个体差异。
2.3 生物利用度参数
非房室模型分析获得的组间平均生物利用度参数列于表2。从两者均值和标准差的数据波动可看
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表1 受试者po测试品和对照品后血清ITZ浓度。n=18，±s
时间/h
测试品/ng·ml-1
对照品/ng·m l-1
0.5
3.7±4.0
4.1±3.4
1
16.1±22.0
23.4±29.9
2
117..3±175.6
, 百拇医药
141.1±111.8
3
232.3±197.6
221.7±125.1
4
271.9±176.9
249.4±125.6
5
2672±150.3
234.7±98.6
6
247.5±107.9
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209.9±81.3
7
206.0±81.9
168.1±50.5
9
135.3±48.9
121.6±33.4
12
95.1±37.0
87.7±32.2
24
60.4±28.2
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57.7±24.5
48
32.6±18.8
27.5±11.7
72
14.7±7.9
14.1±6.4
出具较大的个体代谢差异，这也是此类药物的一个主要体内行为特征。因此在临床持续应用中，血药浓度监测是很有必要的。
表2 受试者分别po测试品和对照品后生物利用度参数.n=18, ±s
生物利用度参数
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对照品
Cmax/ng·ml-1
319.2±162.2
289.0±110.4
tmax/h
4.6 ±1.3
4.1±1.3
t1/2β/h
23.8±4.7
23.2±4.8
AUC0-∞/ ng·h·ml-1
, 百拇医药
5080.5±2451.3
4652.1±1610.0
2.4 数据分析
对照与测试组间参数的方差分析结果见表3；双单侧t检验结果见表4。可看出两者的AUC和Cmax双单侧t检验均等效。
表3 组间AUC及Cmax的方差分析结果
方差来源
df
SS
MS
F
α=0.05
, 百拇医药
AUC0-∞
个体间
17
5.0651
0.2979
5.3699
F0.05(17,16)=2.29
周期间
1
0.0859
0.0859
1.5483
, 百拇医药 F0.05(1,16)=4.491)
处方间
1
0.0240
0.540
0.4318
F0.05(1,16)=4.491)
误差
16
0.8878
0.0555
总变异
, 百拇医药 35
6.0628
Cmax
个体间
17
4.7332
0.2784
3.8032
F0.05(17,16)=2.29
周期间
1
0.1429
0.1429
, 百拇医药
1.9513
F0.05(1,16)=4.491)
处方间
1
0.0364
0.0364
0.4977
F0.05(1,16)=4.491)
误差
16
1.1713
0.0732
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总变异
35
6.0838
注：1)p>0.05无显著差异
3 讨论
2. 1 给药方案 ①餐后服药：由于食物对伊曲康唑的胃肠吸收有促进作用，且于口服后4～5h血药浓度达峰值，临床治疗通常于饭后立即口服该药[2]。故本试验没有选用空腹给药而是餐后给药，即受试者头晚禁食10h以上，于当天早晨统一进标准餐，餐后5min以100ml温开水送服200mg胶囊剂；服药后6h进标准午餐(避开达峰时间)，并定时定量饮水。②单剂量给药：该药具较长的消除半衰期(24～36h)，po7～14体内药物可达稳态浓度；其主要在肝脏代谢。而临床通常以连续7d服药为治疗单元，并要密切注意肝功能变化。因此对健康受试者来说，不宜进行多剂量达稳态给药方案进行相对生物利用度/生物等效性试验。否则，即使是轻微的肝功能损害，不但对健康受试者不利，而且势必影响该药的代谢消除行为，导致试验结果的不平行和人为差异。③周期间隔：考虑到伊曲康唑半衰期较长，交叉试验的两次间隔定为3周时间，以保证首次试验所服药品在体内完全清除。
, 百拇医药
组别
结果
AUC0-∞
第一组 n1=8
(T:R) d1=-0.91742
v1=0.02361
T(H)=2.15981 T(L)=3.45868
t0.05(16)=1.746
Fr(%)=anti Log(d)=102.27%
结论:高低测t检验均P<0.05,等效
第二组 n2=10
, 百拇医药
(T:R) d2=0.58268
v2=0.01923
Cmax
第一组 n1=8
(T:R) d1=-0.24057
v1=0.03552
T(H)=3.34204 T(L)=4.56147
t0.05(16)=1.746
结论:高低测t检验均P<0.05,等效
第二组 n2=10
(T:R) d2=0.73794
, 百拇医药
v2=0.02213
3. 3 个体差异 ①个体间差异：伊曲康唑主要在肝脏代谢，肝药酶活性可直接影响到首过代谢；同时边续服用本药也可导致肝药酶活性的变化,从而可能造成他药和自身口服生物利用度改变及体内血药浓度的改变,导致较大的个体间差异。②个体内差异：即使同一个体，肝药酶活性也可能随情绪、睡眠、活动等机体善或生理周期的变化而改变；从而导致相同个体在不同周期首过效应的不同，体现出较大的个体内差异，最常见的药酶代谢个体内差异实例为酒精代谢。此外，受试者进标准早餐的平均时间可控，而瞬时进餐食物顺序及速度则难以控制；故餐后5min服药时的胃内容物状况的不同，可能导致相同个体在不同受试周期所服胶囊剂的胃内崩解差异，而导致个体内吸收速率的较大波动。
因此，对于具较高肝提取率的口服药品，考虑到其较大的道过个体差异，国外有报道采用“随机分组交叉重复试验”设计，进行生物利用度/生物等效性评价。例如为两品种间比较，则按随机交叉四组进行。不论是测试品还是对照品均于不同周期重复用药。这样对每一个体和每一药品来说，均有两个周期的数据；再进行统计学分析时，同一药品的个体差异可得到一定的校正。当然还有其它一些文献观点和参考方案，但目前都有其局限性且不具法定意义[3]。
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4 结论
国产伊曲康唑胶囊剂相对进口斯皮仁诺胶囊的生物利用度为102.27%。该制剂与同类进产品为等效制剂。
参考文献
[1] 傅强，刘海净，朱珠，等. 改进的人血清中伊曲康唑浓度的HPLC测定法[J]。
中国药学杂志，2000，35(12)：838.
[2] Barone JA,Koh JG,Bierman RH,et al. Food interaction and steady-state
pharmacokinetics of itraconazole capsules in healthy male volunteers
[j] . Antimicrob Agents Chemother,1993,37(4): 778.
[3] 杜小莉，李大魁，朱珠. 生物等效性评价方法的进展[J]。中国临床药理学杂志
，2000，16(3)：216。, 百拇医药