肾移植排斥反应诊断方法研究进展
近年来，伴随着细胞分子生物学技术的进步，移植肾内mRNA的检测成为可能，免疫应答过程的研究提高到了分子水平，免疫指标在诊断中的价值受到关注。在此基础上，如果包括基因工程在内的新技术新疗法今后在肾移植临床工作中能够得到应用，那么与之相对应的低侵袭性排斥反应诊断方法的开发和选择必然成为肾移植研究的重要课题。
组织相容性和肾移植排斥反应的诊断
如果受体血液中存在与包括HLA在内的供体抗原发生反应的预存抗体，排斥反应即可发生。淋巴细胞直接交叉试验可用来筛选这些预存抗体。MHCI类在T细胞和B细胞表面都有发现，而MHCII类仅发现于B细胞。将供体淋巴细胞和受体血清混合培养，血清中的抗HLA抗体和淋巴细胞结合，导致细胞凋亡甚至死亡，以此判定预存抗体的存在。近年来，对受体血清中与供体淋巴细胞结合的抗HLA抗体进行荧光标记，利用抗人免疫球蛋白荧光抗体检测这些抗体的方法，以及用其他荧光色素标记抗T细胞荧光抗体(CD3)或抗B细胞抗体(CD19)，通过流式细胞仪检测各预存抗体的交叉试验，得到普及。[ClinTransplant2000，14(Suppl.3)∶15]
, 百拇医药
移植肾活检在排斥反应诊断中的地位
目前，在众多的诊断方法中行移植肾活检，做病理组织学检查是唯一能够明确诊断的方法。为了对肾移植排斥反应作出质的、量的评价，需对移植肾病理活检进行分类。Banff分类法在1994年公布，1997年又在正常、超急性排斥反应、临界变化、急性排斥反应、慢性排斥反应这些质的变化的基础上对后两种分类进行了gradeⅠ～Ⅲ级的定量化分类，并与治疗方法的选择直接对应，同时，这种分类原则也决定了其他免疫监测指标的研究范畴。
在同种移植中，与排斥反应相关的是Th1关联细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12，而Th2细胞因子IL-4、IL-10对Th1关联细胞因子有拮抗作用，于是Th1/Th2成为移植器官存活稳定性的指标之一。在诊断方面，采用ELISA法将受体血清中的细胞因子浓度作为监测指标，以及用RT-PCR法检测移植肾活检标本中细胞因子mRNA的方法的有效性得到了一些学者的认可。为了改进PCR方法的定量性，开发了实时PCR方法，这种方法每当在DNA伸长时，核糖核苷酸从位于两个引物间的探针游离，并且荧光信号增强使PCR产物定量测定成为可能，今后利用RT-实时PCR法测定细胞因子或其他化学因子的mRNA很可能成为定量评价排斥反应的一种手段。(TransplantProc1999,31∶3353)
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低侵袭性肾移植排斥反应诊断方法的开发
移植肾活检标本在最直接可靠地反应排斥反应状况的同时，由于利用了移植肾本身，并带来了不同程度的损伤，难免会影响移植肾的功能，并且不易与药物性肾损害等进行鉴别，诊断需要2～3天的时间。因此，人们从很早就开始开发低侵袭性的排斥反应诊断方法。特别是利用受体的末梢血获得排斥反应信息的研究直到今天仍在进行着。但一般认为Th1相关联的细胞因子在血中的半衰期短，试图通过末梢血寻找移植肾内部产生的细胞因子的信息是困难的。
免疫细胞的一部分通过血流在淋巴组织和移植肾之间循环，移植肾组织浸润淋巴细胞、末梢血淋巴细胞亚群和活性化标志之间存在着整体的一致性。IL-2受体(IL-2R)和HLA-DR作为T淋巴细胞的活性化标志，环孢素A(CsA)使用过程中IL-2R的出现受到抑制，排斥反应发生时HLA-DR阳性化T淋巴细胞增加，而近期也有文献指出HLA-DQ阳性化单核细胞增加可以作为肾移植急性排斥反应早期诊断的有效性指标。人类末梢血中的单核细胞几乎都是HLA-DR、HLA-DQ，作为抗原提呈细胞在机能成熟的过程中CD80、CD86、CD40等为先导，HLA-DR表现在细胞表面，所以一部分学者认为以此作为免疫应答初期阶段的指标是比较合理的。(ImmunolToday1996,17∶273.)
, 百拇医药
随着流式细胞仪技术的进步，细胞内抗原的研究得到进一步发展。利用CD3、CD4、CD8和细胞内Th1及Th2多重染色的方法发现，急性排斥反应的病例中，活性化初期T淋巴细胞(CD69)、IL-2阳性T淋巴细胞(Th1)增加，细胞内IL-4/IL-10阳性T淋巴细胞(Th2)减少。另外，作为其他淋巴细胞活性化标志的CD15s对肾移植急性排斥反应诊断有效性的研究正在进行中。(Transplantation2000,69∶59)
由于尿液中来自供体的细胞数极少，又受温度、药物等外界条件的影响，因此始终未能在低侵袭性诊断方法探索的过程中得到应用。最近，本研究所在这方面的研究中发现肾移植急性排斥反应发生时，尿沉渣中细胞表面的HLA-DR高频率地出现，随着抗排斥治疗移植肾的功能恢复，HLA-DR又逐渐消失，肾功能良好处于稳定期的肾移植患者尿中无HLA-DR出现，提示尿中供体细胞的出现可以作为临床诊断的指标。这种方法简便、精确、可重复、快速，从标本采取到做出诊断仅需3～4小时，同时为鉴别因免疫抑制剂造成的肾损害、感染、IgA肾炎的复发等提供了可能性。(TransplantProc2001,33∶380)
排斥反应诊断的展望
今后，慢性排斥反应的诊断方法、早期诊断方法是未来研究的方向。另外，在免疫耐受诱导中嵌合体状态或基因治疗将来有可能成为免疫检测的指标。基于社会伦理的观点，利用胚胎细胞克隆人类的研究在世界被广泛禁止，然而从部分分化的干细胞中再生包括自己的肾脏在内的再生器官的研究正在进行，不过复杂的生理功能使得再生脏器应用于临床还需要很长的时间。, 百拇医药
组织相容性和肾移植排斥反应的诊断
如果受体血液中存在与包括HLA在内的供体抗原发生反应的预存抗体，排斥反应即可发生。淋巴细胞直接交叉试验可用来筛选这些预存抗体。MHCI类在T细胞和B细胞表面都有发现，而MHCII类仅发现于B细胞。将供体淋巴细胞和受体血清混合培养，血清中的抗HLA抗体和淋巴细胞结合，导致细胞凋亡甚至死亡，以此判定预存抗体的存在。近年来，对受体血清中与供体淋巴细胞结合的抗HLA抗体进行荧光标记，利用抗人免疫球蛋白荧光抗体检测这些抗体的方法，以及用其他荧光色素标记抗T细胞荧光抗体(CD3)或抗B细胞抗体(CD19)，通过流式细胞仪检测各预存抗体的交叉试验，得到普及。[ClinTransplant2000，14(Suppl.3)∶15]
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移植肾活检在排斥反应诊断中的地位
目前，在众多的诊断方法中行移植肾活检，做病理组织学检查是唯一能够明确诊断的方法。为了对肾移植排斥反应作出质的、量的评价，需对移植肾病理活检进行分类。Banff分类法在1994年公布，1997年又在正常、超急性排斥反应、临界变化、急性排斥反应、慢性排斥反应这些质的变化的基础上对后两种分类进行了gradeⅠ～Ⅲ级的定量化分类，并与治疗方法的选择直接对应，同时，这种分类原则也决定了其他免疫监测指标的研究范畴。
在同种移植中，与排斥反应相关的是Th1关联细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12，而Th2细胞因子IL-4、IL-10对Th1关联细胞因子有拮抗作用，于是Th1/Th2成为移植器官存活稳定性的指标之一。在诊断方面，采用ELISA法将受体血清中的细胞因子浓度作为监测指标，以及用RT-PCR法检测移植肾活检标本中细胞因子mRNA的方法的有效性得到了一些学者的认可。为了改进PCR方法的定量性，开发了实时PCR方法，这种方法每当在DNA伸长时，核糖核苷酸从位于两个引物间的探针游离，并且荧光信号增强使PCR产物定量测定成为可能，今后利用RT-实时PCR法测定细胞因子或其他化学因子的mRNA很可能成为定量评价排斥反应的一种手段。(TransplantProc1999,31∶3353)
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低侵袭性肾移植排斥反应诊断方法的开发
移植肾活检标本在最直接可靠地反应排斥反应状况的同时，由于利用了移植肾本身，并带来了不同程度的损伤，难免会影响移植肾的功能，并且不易与药物性肾损害等进行鉴别，诊断需要2～3天的时间。因此，人们从很早就开始开发低侵袭性的排斥反应诊断方法。特别是利用受体的末梢血获得排斥反应信息的研究直到今天仍在进行着。但一般认为Th1相关联的细胞因子在血中的半衰期短，试图通过末梢血寻找移植肾内部产生的细胞因子的信息是困难的。
免疫细胞的一部分通过血流在淋巴组织和移植肾之间循环，移植肾组织浸润淋巴细胞、末梢血淋巴细胞亚群和活性化标志之间存在着整体的一致性。IL-2受体(IL-2R)和HLA-DR作为T淋巴细胞的活性化标志，环孢素A(CsA)使用过程中IL-2R的出现受到抑制，排斥反应发生时HLA-DR阳性化T淋巴细胞增加，而近期也有文献指出HLA-DQ阳性化单核细胞增加可以作为肾移植急性排斥反应早期诊断的有效性指标。人类末梢血中的单核细胞几乎都是HLA-DR、HLA-DQ，作为抗原提呈细胞在机能成熟的过程中CD80、CD86、CD40等为先导，HLA-DR表现在细胞表面，所以一部分学者认为以此作为免疫应答初期阶段的指标是比较合理的。(ImmunolToday1996,17∶273.)
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随着流式细胞仪技术的进步，细胞内抗原的研究得到进一步发展。利用CD3、CD4、CD8和细胞内Th1及Th2多重染色的方法发现，急性排斥反应的病例中，活性化初期T淋巴细胞(CD69)、IL-2阳性T淋巴细胞(Th1)增加，细胞内IL-4/IL-10阳性T淋巴细胞(Th2)减少。另外，作为其他淋巴细胞活性化标志的CD15s对肾移植急性排斥反应诊断有效性的研究正在进行中。(Transplantation2000,69∶59)
由于尿液中来自供体的细胞数极少，又受温度、药物等外界条件的影响，因此始终未能在低侵袭性诊断方法探索的过程中得到应用。最近，本研究所在这方面的研究中发现肾移植急性排斥反应发生时，尿沉渣中细胞表面的HLA-DR高频率地出现，随着抗排斥治疗移植肾的功能恢复，HLA-DR又逐渐消失，肾功能良好处于稳定期的肾移植患者尿中无HLA-DR出现，提示尿中供体细胞的出现可以作为临床诊断的指标。这种方法简便、精确、可重复、快速，从标本采取到做出诊断仅需3～4小时，同时为鉴别因免疫抑制剂造成的肾损害、感染、IgA肾炎的复发等提供了可能性。(TransplantProc2001,33∶380)
排斥反应诊断的展望
今后，慢性排斥反应的诊断方法、早期诊断方法是未来研究的方向。另外，在免疫耐受诱导中嵌合体状态或基因治疗将来有可能成为免疫检测的指标。基于社会伦理的观点，利用胚胎细胞克隆人类的研究在世界被广泛禁止，然而从部分分化的干细胞中再生包括自己的肾脏在内的再生器官的研究正在进行，不过复杂的生理功能使得再生脏器应用于临床还需要很长的时间。, 百拇医药