Pcr——鉴别肠结核与Crohn病新方法
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本报讯 四川大学华西医院消化内科甘华田博士等的研究发现，聚合酶链反应(PCR)技术检测肠活检组织中结核杆菌DNA是鉴别肠结核与Crohn病的一种十分有价值的新方法。该研究结果发表在今年6月出版的Am J Gastroenterol(2002，97 ∶1446)上。
Crohn病是一种原因不明的肠道慢性肉芽肿性疾病，该病与肠结核在临床表现、结肠镜下所见及病理改变等方面均有许多相似之处。因此，两者的鉴别诊断十分困难，是临床上的一大难题。据文献报道两病误诊率高达65%，目前尚缺乏理想的鉴别方法。以往不少学者从临床表现、内镜所见及病理特点等方面提出了许多鉴别指标，但在临床中均显示出较大的局限性。显然，最佳的鉴别方法是从肠组织中找到结核杆菌，然而传统的抗酸杆菌染色及结核杆菌培养都因其敏感性、特异性及检测速度等方面的问题而远远不能满足临床需要。PCR技术的问世，为从病原学角度解决上述问题开辟了一条新途径。
为了证实PCR技术对两病的鉴别诊断价值，甘华田等应用该技术对39例肠结核和30例Crohn病病人肠活检组织进行了分析。并通过Sal I限制性内切酶酶切及Southern杂交进一步证实扩增产物的特异性。
结果显示，该方法的敏感性为64.1%，特异性为100%，准确性为79.7%，阳性和阴性预测值分别是100%和68.2%，表明该方法是鉴别肠结核与Crohn病极有价值的一种新方法。
研究者发现，尽管病理特点在肠结核与Crohn病的鉴别诊断中十分有价值，但由于活检标本太小，病理上的差别往往不明显甚至难以发现，尤其是一些仅见肉芽肿而找不到干酪样坏死灶的肠结核，其肉芽肿形态几乎与Crohn病完全相同。在这种情况下，想从病理形态上做出鉴别诊断极为困难，此时，PCR技术就显示出了其优越性。甘华田等发现在有肉芽肿而无干酪样坏死灶的肠结核活检组织中，用PCR检测结核杆菌DNA的阳性率达71.4%，而同样形态的Crohn病组织中无一例阳性。由于临床上不可能对疑诊的每例病人均实施手术，更多的情况是行结肠镜检查并取活检组织，因此，PCR技术就更显示出其临床实用价值。
虽然，近年的临床实践证明PCR技术也有一定的局限性，主要表现在假阳性及假阴性两方面。但研究者认为只要进行严格的质量控制是可以防止假阳性和假阴性发生的。如严格“无菌操作”，采用一次性试验材料，小量分装试剂；标本DNA提取，PCR操作及结果判断在不同的工作间进行；每次实验均设立平行的阴性对照和阳性对照；扩增产物用Sal I限制性内切酶酶切及Southern杂交进一步证实其特异性；用β-珠蛋白引物扩增PCR阴性标本以检测有否Taq DNA聚合酶抑制物质存在等，均可以防止假阳性和假阴性发生。
其次，选择特异性强的引物也是避免假阳性发生的关键。研究者选择的引物来自结核杆菌染色体特异重复插入序列IS6110，有10～20个拷贝，故其特异性和敏感性都远远高于其他单拷贝序列。正是由于所选择引物的特异性决定了其只能检测出结核杆菌DNA，而对其他分支杆菌，包括副结核杆菌均不敏感。这是该技术能用于肠结核和Crohn病鉴别的关键。
田宏, 百拇医药