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维护血管内皮功能对心脑血管疾病的重要意义——系列研究之二(续) 通心络对家兔血管成形术后Mapk表达的影响及机制
http://www.100md.com 2003年2月13日 《中国医学论坛报》 2003年第6期
    

    作者简介:曾定尹 教授

    1939年11月生,中国医科大学第一临床学院教授、博士生导师。中华医学会心血管病分会常委、中华医学会辽宁省心血管病学会主任委员,任《中华心血管病杂志》、《中国循环杂志》、《中华老年心血管病杂志》及《中国实用内科杂志》编委或常务编委等20多个学术团体职务。1990年率先在东北地区开展冠状动脉成型术及心律失常射频消融术,并多次主持召开全国性心血管病及介入性心脏病学术会议,对推动东北地区心血管病研究学术发展作出积极贡献。完成国家“八五”、“九五”攻关协作课题4项。深入研究中药血脂康、通心络及粉防已碱,阐明其抗动脉粥样硬化、抗心肌缺血及内皮细胞保护作用机制并获科研成果奖。参与编写《中国急性心肌梗死诊疗指南》及《不稳定型心绞痛诊疗建议》。发表论文100多篇,主编和合著专著5部。培养硕士生30多名,博士生21名。
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    (上接2003年1月30日第16版)

    二. 血管形态学测定结果

    管腔面积(LA)以通心络组为最大,与其它两组相比均差异显著(P<0.05);但新生内膜面积(NIA)单纯拉伤组最小,通心络组其次,高脂拉伤组最大,通心络组与高脂拉伤组和单纯拉伤组相比均差异显著(P<0.05);中膜面积(MA)高脂拉伤组和通心络组无显著差异。见表3。

    表3 血管形态学测量结果(mm2)

    指 标

    单纯拉伤组(n=18)

    高脂拉伤组(n=16)

    通心络组(n=18)
, 百拇医药
    管腔面积(LA)

    1.82±0.78

    1.61±0.67

    *

    2.09±0.69Δ

    内膜面积(NIA)

    0.15±0.13

    1.02±.27

    *

    0.65±0.41Δ

    中膜面积(MA)

    0.59±0.19
, 百拇医药
    0.88±0.34

    *

    0.85±0.32Δ

    注:*与单纯拉伤组相比P<

    0.05;Δ与高脂拉伤组相比P< 0.05。

    三. MAPK(ERK1、ERK2)的免疫组化结果

    ERK1及ERK2主要为胞浆阳性,阳性细胞主要集中在内膜和内弹力板区域,单纯拉伤组阳性细胞很少,散布于内膜,阳性细胞面积为20.67±1.38

    mm2(ERK1)和19.55±1.19

    mm2(ERK2);而高脂拉伤组阳性细胞密度较高,密布于内膜和内弹力板周围区域,阳性细胞面积为35.93±2.99
, 百拇医药
    mm2(ERK1)和38.55±3.57

    mm2(ERK2);通心络组阳性细胞多于单纯拉伤组但明显少于高脂拉伤组,阳性细胞主要分布在内弹力板区域,阳性细胞面积为28.16±2.94mm2(ERK1)和30.90±4.68

    mm2(ERK2),与高脂拉伤组相比差异显著(P<0.05)。见图1和图2。

    图1 ERK1的免疫组化结果

    a:单纯拉伤组:棕黄色阳性细胞很少,散布于内膜,内膜增厚不明显。b:高脂拉伤组:棕黄色阳性细胞很多,密布于内膜和内弹力板附近,并见内膜明显增厚。c:通心络组:棕黄色阳性细胞减少,主要集中在内弹力板附近,内膜也明显变薄。
, 百拇医药
    图2 ERK2的免疫组化结果

    a:单纯拉伤组:棕黄色阳性细胞很少,散布于内膜,内膜增厚不明显。b:高脂拉伤组:棕黄色阳性细胞很多,密布于内膜和内弹力板附近,并见内膜明显增厚。c:通心络组:棕黄色阳性细胞减少,主要集中在内弹力板附近,内膜也明显变薄。

    四. MAPK(ERK1和ERK2)的蛋白质印迹结果

    高脂拉伤组ERK1和ERK2的扫描辉度值分别为148872±1428和126009±1006,明显高于单纯拉伤组136329±1639和120931±1027(P<0.05),而通心络组

    ERK1和 ERK2扫描辉度值55926±987和55516±826与高脂拉伤组和单纯拉伤组相比,均显著降低(P均<0.05),见图3。
, 百拇医药
    图3 ERK1及ERK2的蛋白质印迹结果

    D:单纯拉伤组条带密度较低,颜色较淡

    G:高脂拉伤组条带密度最高,颜色最浓

    T:通心络组条带密度最低,颜色最淡

     讨论

    本研究中MAPK的免疫组化测定结果显示各组家兔PTA后MAPK的表达均增加,以高脂拉伤组增加最明显,通心络组MAPK表达明显减低。同时血管形态学计算机分析结果显示PTA后各组家兔新生血管内膜面积也增加,仍是高脂拉伤组新生内膜面积最大,再狭窄最明显,而通心络组再狭窄明显受到抑制,管腔面积扩大,新生内膜面积减小。可见MAPK表达增加与新生内膜面积增加及再狭窄密切相关,二者呈正相关关系,通心络对MAPK表达有抑制作用,并抑制内膜增殖。
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    MAPK是细胞表型变化和增殖的关键酶,是细胞内多种促细胞增殖信息传递的交会点和共同通路,MAPK可以编码两种细胞外信号调节酶P44ERK1和P42ERK2,磷酸化后进入到细胞核内,经过一系列信号传递产生转录因子,再作用于核内癌基因而发挥促细胞增殖的作用。通心络治疗后MAPK表达降低的同时其新生内膜面积也减小,再狭窄程度减轻,证明通心络抑制了 MAPK的表达及其作用。通心络抑制 MAPK表达和作用的机制是什么呢? 通心络胶囊是吴以岭教授首创运用中医络病理论研制而成的中药复方制剂,主要成分是人参、水蛭、全蝎、土鳖虫、赤芍和冰片等,诸药合用具有促进血循环,解除血管痉挛,抗凝及降脂作用。本研究结果显示通心络具有降低TC和LDL-C的作用,同时可以降低血ET水平,升高血NO水平。脂代谢紊乱是造成内皮损害和动脉粥样硬化的重要因素。ET/NO比值是影响PTCA后内膜增殖的重要因素,并与MAPK密切相关,ET 通过激活磷脂酶C起到有丝分裂原的作用,刺激SMC内癌基因的表达,增加SMC的DNA合成,促进SMC增殖,此步骤与MAPK信号传导途径有关。而NO则通过GTMP途径抑制SMC的分裂和增殖,清除自由基,抑制脂质过氧化反应,使内皮损伤减轻,减少MAPK的激活。因此我们推测通心络抑制MAPK的表达和促增殖作用主要是通过降低血脂,抑制ET释放,增加NO释放,改善脂质代谢紊乱,保护内皮功能,从而抑制MAPK激活而实现的。

    本研究证明了MAPK与再狭窄内膜增殖有关,与前人报道一致,并首次证实中药通心络可以抑制MAPK的表达。有关作用机制只是一种推论,也只涉及到MAPK作用途径的一个环节,进一步的研究尚需深入进行。, 百拇医药(中国医科大学第一临床学院心内科 曾定尹 张子新 王绽菲)