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第十七章 血清载脂蛋白分离纯化及其鉴定-
-第一节 载脂蛋白分离纯化
http://www.100md.com 《动脉粥样硬化》
载脂蛋白分离纯化、分离脂蛋白、脱脂,第十七章 血清载脂蛋白分离纯化及其鉴定--第一节 载脂蛋白分离纯化

研究载脂蛋白的前提条件是必须得到各种载脂蛋白的纯品,然而各种载脂蛋白的理化性质、分子量、氨基酸组成及其构象相差很大,因此必须根据各自的特性采用不同的方法进行分离纯化,才能达到获得纯品的目的。有关文献报导,目前分离纯化载脂蛋白方法和仪器种类很多,而常用的方法包括四个步骤即:①分离脂蛋白;②脱脂获得脂蛋白中的载脂蛋白部分即ApoHDL、ApoVLDL、ApoLDL等;③将各种载脂蛋白进一步纯化而获得免疫纯或单点纯;④鉴定或定量。

第一节 载脂蛋白分离纯化

一、分离脂蛋白

血浆是分离纯化脂蛋白的首选标本。从血浆(血清)中可分离得到CM、VLDL、LDL和HDL,再经脱脂除去脂蛋白中的脂质,剩下的部分为载脂蛋白的混合物。这一操作过程是获得载脂蛋白的最佳方法。

二、脱脂

由于各种脂蛋白含脂的种类和质量不同,脱脂剂组成略有差异。目前常用的几种脱脂方法有如下几种。

1.Warnick等法

将纯化的脂蛋白慢慢加入到预冷(-20℃)的丙酮:无水乙醇(1:1,V/V)混合液中,脱脂液的量为样品的20倍,不断搅拌,然后在-20℃冰箱放置过夜,4℃离心沉淀,将沉淀重复脱脂一次,用氮气吹干或真空干燥,脱脂物0℃贮存待用。

2.Scanu等法

将脂蛋白加入到预冷的(-15℃)无水乙醇:无水乙醚(3:2)混合液中,不断搅拌,以12h过夜,在-10℃或4℃离心(2000r/min),去上清留沉淀,再重复脱脂一次。用N2或真空干燥,0℃贮存待用。

三、载脂蛋白的分离纯化法

(一)凝胶过滤法

凝胶过滤(gel filtration)技术是60年代兴起的一种简便有效的生物分离纯化方法。当混合溶液通过凝胶过滤层析柱时,因凝胶具有网状结构,小分子物质能进入其内部 ......


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