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第十八章 血清载脂蛋白的免疫测定-
-第一节 血清载脂蛋白定量的方法及其参考值的评价
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血清载脂蛋白、载脂蛋白,第十八章 血清载脂蛋白的免疫测定--第一节 血清载脂蛋白定量的方法及其参考值的评价

血浆中蛋白质种类繁多,对各种单一蛋白进行快速而又特异的定量。目前公认的方法是免疫测定法,即利用其特异的抗体,采用测定抗原抗体复合物的方式定量。血浆(清)中载脂蛋白是以脂蛋白形式存在的少量蛋白,在解联剂作用下,使载脂蛋白从脂蛋白中分离出来,再利用相应的载脂蛋白抗体进行测定。

载脂蛋白的免疫测定方法很多,目前采用的方法各有其特点,所需条件也有差异,现将医学检验中常用的定量方法作一简要介绍。

第一节 血清载脂蛋白定量的方法学及其参考值的评价

一、载脂蛋白测定方法

1.单向免疫扩散法(radial immunodiffusion,RID)

该法较简单,一般实验室均可进行。消耗较多的抗血清,扩散过程至少24h,最多需72h,测定下限值为10μg/ml。该方法虽然简单,应严格控制有关条件如:含抗血清的琼脂糖凝胶厚度要均匀;加入小孔的稀释抗原(血清)量要准确;含ApoB的脂蛋白如VLDL和LDL颗粒大小不一,如琼脂糖凝胶浓度在1.5%~2.0%,可能仅测出LDL的ApoB,大颗粒的LDL及VLDL的ApoB可能无法测出,因为难以穿过琼脂糖凝胶的孔隙。另外,扩散过程中,凝胶板一定要水平,否则易使扩散环呈椭圆形,难以准确测量直径。一般使沉淀环以3.5~10.0mm为宜,应在两个方向测量直径,其精度要求达到0.1mm。采用五种不同浓度参考值,测定沉淀环面积对相应浓度关系以曲线回归方程作图。

2.电免疫测定法(electroimmunoassay,EIA)

该法灵敏,抗血清用量少,如琼脂糖缓冲液中加入聚乙二醇及甘氨酸,其电泳时间可缩短一倍,火箭峰高以1~4cm为宜,火箭峰的测量可以计算面积或峰高,峰高从中心量起。测量精度最好能在0.1mm,灵敏度约2μg/ml,又称为火箭电泳法。

3.免疫比浊法(immunoturbidimetry assay,ITA)

简便快速,在自动分析仪进行操作并能批量检测,是目前临床使用最多的方法学 ......


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