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第三节 载脂蛋白B基因多态性的检测
http://www.100md.com 《动脉粥样硬化》

ApoB是富含胆固醇和甘油三酯脂蛋白的重要组成成分,对脂质在人体转运、代谢、维持体内脂质水平的恒定起重要作用。大量临床资料及流行病学调查表明:血清ApoB及低密度脂蛋白(LDL)水平与动脉粥样硬化呈正相关,是其主要危险因素之一。近十年来,从分子水平研究ApoB,阐明动脉粥样硬化及高脂血症的发病机理,寻找其遗传标志受到广泛重视,现已发现:ApoB基因具有明显的多态性,其核苷酸变异有75处,其中导致氨基酸变异的有54处,例如多种酶限制性片段长度多态性(RFLPs),3’端高变区的数目可变的串联重复顺序(VNTR),信号肽(SP)多态性。大量研究表明,ApoB的基因多态性与动脉粥样硬化有不同程度的关系。

一、分析ApoB基因多态性的方法

对ApoB基因多态性进行检测、分析的方法很多,如:限制性内切酶的酶谱分析法,PCR直接分析法,PCR产物RFLP分析法,等位基因特异性寡核苷酸(ASO)杂交法等等,其中最多用且简单的方法有PCR产物直接分析法和PCR产物RFLP分析法。

PCR产物直接分析法,是采用合适的引物,通过多次扩增,获得靶基因序列扩增片段,直接分析法片段的大小,可用于分析基因的缺失与插入。这种方法简便、快速、灵敏,可分析ApoB基因VNTR、SP多态性。

基因突变往往会造成限制性内切酶识别位点的改变,如位点丢失或产生新位点,通过PCR扩增某一特定片段,再用限制性内切酶酶切扩增产物,电泳观察片段的大小,这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变,可直接判断基因型,是研究ApoB基因PFLPs的较好方法,具有灵敏、简便、可同时对大量样品进行分析等优点。

二、ApoB基因多态性的检测

ApoB基因多态性研究较多的有RFLP、VNTR、SP多态性,分别叙述如下:

1.RFLP的检测

ApoB有10种RFLP ......


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