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SARS病原学研究
http://www.100md.com 2003年5月8日 《中国医学论坛报》 2003年第17期
     中国疾病预防控制中心病毒预防控制所副所长梁国栋报告:在SARS 病毒的组织培养方面,他们从SARS病人的咽拭子中可以分离出4个不同的冠状病毒株。它可在Vero-E6细胞和RD细胞中繁殖,同时在接种3~4天后产生明显典型而且稳定的CPE(细胞病变效应)。

    经过有对照的血清学EIA法的分析,认为SARS病人的血清学与冠状病毒是相对应的。在此基础上,CDC病毒研究所与北京贝尔生物工程有限公司已联合完成了酶免测定SARS病毒抗体IgM/IgG试剂盒。但是,抗体诊断有一定的滞后性,特别是IgG;IgM一般是很好的早期诊断指标,但在SARS病人出现相对晚一些。根据WHO电话会议的信息,在SARS发病的最初5天之内很难发现IgM。尽管如此,这个试剂盒的出现对医师明确病原,以及今后SARS的血清流行病学调查很有帮助。

    目前大量的实验显示可在血液、尿液和粪便中发现SARS病毒的核酸序列,这高度提示SARS病毒可能存在于血液、尿液和粪便中,这进一步提示这些样本可能具有传染性。卫生部将很快提出一个关于SARS血、尿和粪便及肝肾功常规检查安全性操作规范,希望把这种再次感染的可能性无限降低到趋近于零。
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    根据美国CDC在网上公布的PCR引物,他们加以改进,并对取自SARS死亡病人的组织标本、在Vero-E6细胞和RD细胞中培养的病毒株和咽拭子标本进行了序列测定,结果显示均与国外发现的SARS病毒的基因序列一致。在此基础上,CDC病毒研究所与华美生物工程公司联合研制了RT-PCR测定SARS病毒试剂盒,它可能可以用于SARS的早期诊断。从取样的可行性和安全性上看,取血进行PCR测定最为理想。

    这两种检测方法将试验性地应用于临床。虽然目前我国县级医院均具有进行这两种检测的技术和设备,但因生物安全性的问题,他们建议首先在较发达地区,具有P3实验室的省级疾病控制中心进行,待对于SARS血、尿和粪便检测安全性评估完成之后,再应用于全国。

    他们与中国科学院北京基因组研究所合作进行了一例SARS病毒全基因进行测序,病毒直接从SARS病人的肺中获得。以下资料对以后的疫苗研制可能会有所帮助:与美国CDC和加拿大的SARS病毒基因序列的同源性高达99%;核蛋白C端的编码序列与副流感病毒3型具有相似之处;与其他已知的冠状病毒相比,外膜蛋白的编码区域的变异度较大;与其他已知的冠状病毒相比,细胞免疫决定族抗原无本质差别;可能存在编码免疫抑制相关成份的序列。
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    另外,在研究初期,他们看到一种难以解释但可能有意义的现象,对此他们依然没有放弃,即在观测来自不同地区、不同医院的7例SARS死亡病例的标本中,电镜观察显示:肺泡上皮细胞损害严重,胞浆内均可见典型的充满衣原体样颗粒chkamydia-kike agents的包含体,大小不等的原生小体(EB)和网质小体(RB)均可见到。在肺毛细血管和肺渗出液中也见到衣原体样颗粒;在心、脾、肝、肾和淋巴结等组织中均可见到典型的衣原体颗粒和包含体。在组织中大量地发现衣原体样颗粒,不得不使要对这种现象做出解释。在组织培养细胞中也发现了衣原体样颗粒和包含体。有趣的现象是,在3例SARS病人的标本中同时,甚至在电镜的同一视野发现冠状病毒样颗粒和衣原体样颗粒同时存在;在没有肺组织内出血的标本中,只能找到冠状病毒样颗粒,而无衣原体样颗粒。但对于衣原体样颗粒,他们尚未获得充分的证据。如果它确实是衣原体,它应是一种新型衣原体。, 百拇医药