基因芯片研究肝硬化和原发性肝癌的基因差异表达
林菊生 黄海涛 余 爽 谢红英 梁扩寰
华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所 430030
目的：应用基因芯片技术研究原发性肝癌和肝硬化组织的基因差异性表达，并根据获取的基因表达谱，进一步研究能否将临床肝细胞癌在分子水平进行分型。
方法：7例外科手术切除的乙肝相关性原发性肝细胞癌与3例肝硬化组织分别按一步法抽提总RNA并纯化mRNA；将等量的原发性肝细胞癌和肝硬化组织mRNA分别逆转录并标记为cDNA探针，混合后杂交1568点BioDoorChipLiver—16S芯片，经严格洗片后用ScanArrnay 3000扫描仪扫描芯片获取荧光信号图像，计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因。根据芯片数据，选取在各张芯片中至少出现过一次差异的数颁，过滤了所有无效数据。根据PearsonCorrelation应用UPGMA方法进行分层聚类。分析软件选用GeneMaths Versionl.50。
结果：在1568种基因中，原发性肝癌和肝硬化组织间存在19条显著性差异表达的基因，其中上调基因7条，下调基因12条。根据以上基因表达谱，我们进行聚类分析，本实验7例肝癌组织被分为三组。分析的临床因素包括肿瘤分化、TNM血管浸润以及患者性别。然而，只有肿瘤的分化情况与分类紧密相关。共有12条基因在Ⅲ级分化和Ⅱ级分化肝癌两组间存在差异表达。
结论：在乙肝—肝硬化—原发性肝癌这一复杂的病理过程中，热休克蛋白90(heat shock protein 90，HSPgO)可能作为“伴侣蛋白”，介导癌蛋白构象成熟、影响信号传导，参与肝细胞的恶性转化；存在硫酸肝素
—Sydecans—Syntenin·信号传导途径高度激活，推测与肿瘤进展有关；肝癌组织中雄激素受体相关蛋白表达上调，可能通过激活雄激素受体及影响转录调节促进肝硬化组织癌变。聚类分析表明，肿瘤的分化情况与分类紧密相关。我们认为在差异表达的基因中存在可能与分化相关的基因。抗氧自由基基因的异常表达与细胞增殖、衰老及肿瘤发生有关。过氧化物歧化酶、过氧化氢酶表达下调，提示细胞清除自由基能力和抗氧化能力降低，增加激活的癌基因或氧自由基对肝细胞的损伤，促进恶变。血红素过氧化酶—2(hemeoxygenase—2，HO—2)合成内源性CO，作为应激蛋白参与对抗氧损伤机制。CO产生系统和NO产生系统间相互影响。HO—2表达下调可能减少对NOS活性的抑制，调节NO生成，促进肿瘤发展。P14.5表达下调，提示其减少可能增加蛋白合成，影响细胞分化，促进肿瘤细胞生长。我们的研究有助于深入阐明肝硬化和肝癌在基因表达水平上的变化和进一步认识乙肝相关性肝硬化转化为肝癌的分子机制，为肿瘤分型、分子诊断和寻找治疗靶基因提供了新的线索。, 百拇医药
华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所 430030
目的：应用基因芯片技术研究原发性肝癌和肝硬化组织的基因差异性表达，并根据获取的基因表达谱，进一步研究能否将临床肝细胞癌在分子水平进行分型。
方法：7例外科手术切除的乙肝相关性原发性肝细胞癌与3例肝硬化组织分别按一步法抽提总RNA并纯化mRNA；将等量的原发性肝细胞癌和肝硬化组织mRNA分别逆转录并标记为cDNA探针，混合后杂交1568点BioDoorChipLiver—16S芯片，经严格洗片后用ScanArrnay 3000扫描仪扫描芯片获取荧光信号图像，计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因。根据芯片数据，选取在各张芯片中至少出现过一次差异的数颁，过滤了所有无效数据。根据PearsonCorrelation应用UPGMA方法进行分层聚类。分析软件选用GeneMaths Versionl.50。
结果：在1568种基因中，原发性肝癌和肝硬化组织间存在19条显著性差异表达的基因，其中上调基因7条，下调基因12条。根据以上基因表达谱，我们进行聚类分析，本实验7例肝癌组织被分为三组。分析的临床因素包括肿瘤分化、TNM血管浸润以及患者性别。然而，只有肿瘤的分化情况与分类紧密相关。共有12条基因在Ⅲ级分化和Ⅱ级分化肝癌两组间存在差异表达。
结论：在乙肝—肝硬化—原发性肝癌这一复杂的病理过程中，热休克蛋白90(heat shock protein 90，HSPgO)可能作为“伴侣蛋白”，介导癌蛋白构象成熟、影响信号传导，参与肝细胞的恶性转化；存在硫酸肝素
—Sydecans—Syntenin·信号传导途径高度激活，推测与肿瘤进展有关；肝癌组织中雄激素受体相关蛋白表达上调，可能通过激活雄激素受体及影响转录调节促进肝硬化组织癌变。聚类分析表明，肿瘤的分化情况与分类紧密相关。我们认为在差异表达的基因中存在可能与分化相关的基因。抗氧自由基基因的异常表达与细胞增殖、衰老及肿瘤发生有关。过氧化物歧化酶、过氧化氢酶表达下调，提示细胞清除自由基能力和抗氧化能力降低，增加激活的癌基因或氧自由基对肝细胞的损伤，促进恶变。血红素过氧化酶—2(hemeoxygenase—2，HO—2)合成内源性CO，作为应激蛋白参与对抗氧损伤机制。CO产生系统和NO产生系统间相互影响。HO—2表达下调可能减少对NOS活性的抑制，调节NO生成，促进肿瘤发展。P14.5表达下调，提示其减少可能增加蛋白合成，影响细胞分化，促进肿瘤细胞生长。我们的研究有助于深入阐明肝硬化和肝癌在基因表达水平上的变化和进一步认识乙肝相关性肝硬化转化为肝癌的分子机制，为肿瘤分型、分子诊断和寻找治疗靶基因提供了新的线索。, 百拇医药