趋化因子新变异体MPIF-1β重组蛋白的纯化和活性分析
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北京大学人类疾病基因研究中心 北京100083；北京医科大学联合生物工程公司 范慧；莫晓宁；曹丽；宋泉声；黄
趋化因子|MPIF1β|MPIF1|重组蛋白
参见附件。
北京大学人类疾病基因研究中心 北京100083；北京医科大学联合生物工程公司 范慧；莫晓宁；曹丽；宋泉声；黄大无；马大龙
关键词：趋化因子；MPIF1β；MPIF1；重组蛋白
摘要：目的 为深入研究趋化因子新变异体MPIF 1β的结构与功能 ,利用pKPL3a MPIF 1β表达质粒进行原核表达、纯化工艺研究及活性检测。方法 MPIF 1β重组蛋白以包涵体形式存在 ,占总菌体蛋白的 15 % ,工程菌经超声破碎 ,包涵体洗涤 ,变性、复性、肝素SepharoseCL 6B亲和层析 ,CMSepharoseFastFlow和SephacrylS 2 0 0层析分离获得目的蛋白。结果 还原SDS PAGE分析相对分子质量 15 0 0 0u ,纯度 99.0 % ,纯化倍数 6 .6倍 ,总回收率 9.0 7%。体外生物学活性检测证明MPIF 1β重组蛋白对小鼠骨髓集落形成具有抑制作用 ,对U937细胞具有趋化活性 ,且呈一定的剂量.
北京大学人类疾病基因研究中心 北京100083；北京医科大学联合生物工程公司 范慧；莫晓宁；曹丽；宋泉声；黄大无；马大龙
关键词：趋化因子；MPIF1β；MPIF1；重组蛋白
摘要：目的 为深入研究趋化因子新变异体MPIF 1β的结构与功能 ,利用pKPL3a MPIF 1β表达质粒进行原核表达、纯化工艺研究及活性检测。方法 MPIF 1β重组蛋白以包涵体形式存在 ,占总菌体蛋白的 15 % ,工程菌经超声破碎 ,包涵体洗涤 ,变性、复性、肝素SepharoseCL 6B亲和层析 ,CMSepharoseFastFlow和SephacrylS 2 0 0层析分离获得目的蛋白。结果 还原SDS PAGE分析相对分子质量 15 0 0 0u ,纯度 99.0 % ,纯化倍数 6 .6倍 ,总回收率 9.0 7%。体外生物学活性检测证明MPIF 1β重组蛋白对小鼠骨髓集落形成具有抑制作用 ,对U937细胞具有趋化活性 ,且呈一定的剂量.
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