头孢地尼和头孢克洛对270株呼吸道致病菌体外抗菌活性研究
头孢地尼(cefdinir)系1988年首次合成的广谱口服三代头孢菌素，1997年美国食品与药物管理局批准用于治疗社区获得性肺炎、慢性支气管炎急性发作、急性支气管炎、咽扁桃体炎、急性中耳炎及皮肤软组织感染1。文献报道其对葡萄球菌、肺炎链球菌、肠杆菌科等有较强的抗菌活性1。为了解头孢地尼对中国临床分离菌的体外抗菌谱，本研究对2002年本院就诊患者呼吸道分离的常见致病菌，进行了头孢地尼体外抗菌活性测定并与头孢克洛进行比较。
材料与方法
一、菌株 本研究共收集菌株270株，其中包括：肺炎球菌59株，流感嗜血杆菌26株，卡他莫拉菌20株，苯唑西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)51株，大肠埃希菌50株，肺炎克雷伯菌50株和β-溶血性链球菌14株。细菌鉴定采用常规鉴定法，必要时用VITEK仪器或Crystak仪器补充鉴定。
二、药敏试验：采用琼脂稀释法测定头孢地尼(cefdinir，西安杨森制药有限公司提供)和头孢克洛(cefackor)的最大抑菌浓度(MIC)，操作严格按美国临床实验室标准化委员会NCCLS推荐的指南进行2。当测试葡萄球菌时，加测苯唑西林筛选MSSA；测试肺炎链球菌时，加测青霉素Etest条(AB Biodisk Co.)，分别报告头孢地尼和头孢克洛对青霉素敏感、中介和耐药的肺炎链球菌的敏感性。每种抗生素对不同的菌株采用不同的浓度稀释，用点种器Orientak Motor Indicator日本佐久间制作所把菌悬液点种到含不同浓度抗生素的Muekker-Hinton(M-H) 琼脂(美国BD公司产品)表面，每个点点种约104 CFU。流感嗜血杆菌加测氨苄西林，药敏采用流感嗜血杆菌试验培养基HTM，而β-溶血性链球菌和肺炎链球菌药敏采用含5%脱纤维羊血的M-H琼脂。快生长菌的药敏平皿在 35℃空气环境中孵育16～20小时，而苛养菌在5% CO2环境中孵育20～24小时。按照文献中规定的折点判定敏感、中介和耐药(表1)。
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表1
在NCCLS(2003)中头孢地尼和头孢克洛的MIC判定折点(mg/L)
头孢地尼
头孢克洛
菌名
敏感
中介
耐药
敏感
中介
耐药
肺炎链球菌
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≤0.5
1
≥32
≤1
2
≥34
流感嗜血杆菌
≤1
≥32
≤8
16
≥332
肠杆菌科菌和葡萄球菌属
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≤1
2
≥34
≤8
16
≥332
三、超广谱β-内酰胺酶(ESBL)及β-内酰胺酶试验：ESBL检测采用 NCCLS推荐的纸片扩散表型确证试验确定2：头孢噻肟单药与头孢噻肟+克拉维酸的复合制剂，头孢他啶与头孢他啶+克拉维酸的复合制剂英国Oxoid公司产品，两方案中任一组抗生素在加克拉维酸后抑菌圈扩大5 mm以上时，判定为ESBL+。大肠埃希菌ATCC 25922和肺炎克雷伯菌ATCC 700603分别用作ESBL-和ESBL+对照。用Nitrocefin法检测流感嗜血杆菌，卡他莫拉菌和金黄色葡萄球菌产生的β-内酰胺酶。
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四、质量保证：大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC 29213、肺炎链球菌ATCC 49619和流感嗜血杆菌ATCC 49247用来评价整个试验的准确性。6个质控MIC值均落在NCCLS质控允许的范围内。因此，所有数据参加统计分析。
五、数据分析：文中的数据和表格采用世界卫生组织耐药监测组Thomas O’Brien和John Stekking提供的WHONET5软件分析所得。
结果
对270株菌的全部研究结果：MIC50、MIC90、MIC范围及MIC平均值，耐药率、中介率和敏感率等列于表2。将270株菌分组进行观察与分析，1组是常见的呼吸道病原菌：青霉素敏感、中介和耐药的肺炎球菌，流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌；2组是ESBL+和ESBL-的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌；3组为苯唑西林敏感的金黄色葡萄球菌MSSA；4组为上呼吸道的条件致病菌β-溶血性链球菌。
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表2. 头孢地尼和头孢克洛对270株菌的体外抗菌活性(mg/L)
I菌名
抗生素
耐药%
中介%
敏感%
MIC50
MIC90
MIC平均值
MIC范围
株数
青霉素敏感的肺炎球菌(28)
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头孢地尼
0.0
0.0
100.0
0.064
0.064
0.058
0.016～0.125
头孢克洛
0.0
0.0
100.0
0.25
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0.5
0.338
0.125～0.5
青霉素中介的肺炎球菌(27)
头孢地尼
25.9
3.7
70.4
0.25
4
0.302
0.064～4
头孢克洛
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29.6
22.2
48.1
1.5
32
2.142
0.5～48
青霉素耐药的肺炎球菌(4)
头孢地尼
100.0
0.0
0.0
4
, 百拇医药
8
4.757
4～8
头孢克洛
100.0
0.0
0.0
64
256
76.109
32～256
流感嗜血杆菌(26)
头孢地尼
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0.0
0.0
100.0
0.25
1
0.286
0.064～1
头孢克洛
0.0
3.8
96.2
2
8
, 百拇医药
2.682
0.5～16
卡他莫拉菌(20)
头孢地尼
0.064
0.125
0.083
0.008～0.25
头孢克洛
0.5
0.5
0.42
0.25～0.5
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ESBL-大肠埃希菌(21)
头孢地尼
4.8
14.3
81.0
0.5
2
0.552
0.125～4
头孢克洛
19.0
14.3
66.7
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8
32
8
2～32
ESBL+大肠埃希菌(29)
头孢地尼
100.0
0.0
0.0
256
256
192.166
64～512
, 百拇医药
头孢克洛
100
0.0
0.0
256
512
288.497
256～512
ESBL-肺炎克雷伯菌(24)
头孢地尼
0.0
0.0
100.0
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0.125
0.25
0.158
0.064～1
头孢克洛
0.0
4.2
95.8
2
8
1.943
1～16
ESBL+肺炎克雷伯菌(26)
, 百拇医药
头孢地尼
100.0
0.0
0.0
512
512
234.09
4～512
头孢克洛
100.0
0.0
0.0
512
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512
498.531
256～512
MSSA(51)
头孢地尼
0.0
0.0
100.0
0.25
0.5
0.257
0.125～0.5
头孢克洛
, 百拇医药
0.0
0.0
100.0
2
2
1.653
1～4
β-溶血性链球菌(14)
头孢地尼
0.064
0.064
0.05
0.016～0.064
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头孢克洛
0.5
1
0.552
0.25～1
1. 头孢地尼和头孢克洛对常见呼吸道病原菌的体外抗菌活性
肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌是中耳炎、鼻窦炎、会厌炎、咽炎和肺炎的常见病原菌。 它们对β-内酰胺类的耐药性，近年来在很多地区，如美国和欧洲，增长很快。这些菌因发生青霉素结合蛋白(PBP)改变(如肺炎链球菌)或产生β-内酰胺酶(如流感嗜血杆菌及卡他莫拉菌)而耐药。
肺炎链球菌 所有测试的59株肺炎链球菌的MIC，分别按青霉素敏感、中介和耐药分3组分析，其结果(表2)显示，28株青霉素敏感的肺炎球菌对头孢地尼和头孢克洛均敏感，但头孢地尼的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围低于头孢克洛3.9～7.8倍。27株青霉素中介的肺炎球菌对头孢地尼和头孢克洛均耐药，耐药率分别为25.9%和29.6%，但头孢地尼和头孢克洛的中介率和敏感率分别为3.7%和70.4%对22.2%和48.1%，说明头孢地尼对PISP株的抗菌活性明显强于头孢克洛。4株青霉素耐药的肺炎球菌对这两种头孢菌素均耐药，但对头孢克洛比头孢地尼的耐药性更高，头孢克洛的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围比头孢地尼高8～32倍。
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流感嗜血杆菌26株流感嗜血杆菌中，有5株对氨苄西林耐药，且Nitrocefin试验+β-内酰胺酶阳性率为19.2%5/26株，对头孢地尼和头孢克洛的敏感率分别为100%和96.2%，未见对二者耐药的流感嗜血杆菌菌株，且头孢地尼的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围低于头孢克洛7.8～16倍。
卡他莫拉菌 本研究中20株卡他莫拉菌β-内酰胺酶阳性率为90.0%18/20株，由于目前NCCLS没有判定折点，无法分析敏感率，这两种头孢菌素有较低的MIC值，且头孢地尼的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围〔(0.008～0.25)mg/L〕明显低于头孢克洛〔(0.25～0.5)mg/L〕。
2. 头孢地尼和头孢克洛对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的抗菌活性
本研究共测试了50株大肠埃希菌和50株肺炎克雷伯菌，把这两种菌分为ESBL(-)和 ESBL(+)组分别进行统计分析(表2)。
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大肠埃希菌：ESBL(-)和 ESBL(+)组的药敏谱明显不同。头孢地尼对21株ESBL菌保持很高的活性耐药率仅为4.8%MIC90值为2 mg/L，MIC范围为(0.125～4) mg/L。而头孢克洛比头孢地尼显示较高的耐药性，耐药率为19%MIC90为32 mg/L，MIC为(2～32) mg/L。29株ESBL+菌体外对这2种抗生素均耐药。
肺炎克雷伯菌：头孢地尼和头孢克洛对24株ESBL-的肺炎克雷伯菌有极好的抗菌活性，未发现耐药菌株，敏感率分别为100%和95.8%。而这2种抗生素对26株ESBL+菌体外高水平耐药，没有敏感的菌株发现。
3.头孢地尼和头孢克洛对MSSA的体外抗菌活性
MSSA NCCLS2推荐不论β-内酰胺药在耐苯唑西林药的葡萄球菌菌株中的体外活性是敏感还是耐药，都应向临床报告为耐药株，因此本研究只评估了对MSSA的抗菌活性，51株MSSA对所测试的2种头孢菌素都高度敏感，敏感率均为100%，但头孢地尼的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围低于头孢克洛4～8倍。
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4. 头孢地尼和头孢克洛对B群β-溶血性链球菌的体外抗菌活性
头孢地尼和头孢克洛无判定折点。2种头孢菌素的抗菌活性都很高
而头孢地尼的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围低于头孢克洛(7.8～15.6)倍。
结论
1.头孢地尼和头孢克洛对青霉素敏感的肺炎球菌，流感嗜血杆菌和MSSA有极好的抗菌活性敏感率为96.2%～100%，而头孢地尼比头孢克洛有较低的MIC值。
2.头孢地尼对青霉素中介的肺炎球菌比头孢克洛有较高的抗菌活性。对青霉素耐药的肺炎球菌对这两种头孢菌素均耐药，尤其对头孢克洛的MIC值比对头孢地尼明显升高。
3.头孢地尼和头孢克洛对易产β-内酰胺酶的卡他莫拉菌和β-溶血性链球菌均有极好的抗菌活性，且头孢地尼比头孢克洛有较低的MIC值。
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4.头孢地尼对ESBL-大肠埃希菌和ESBL-肺炎克雷伯菌比头孢克洛有较高的抗菌活性，但是这两种头孢菌素对ESBL+大肠埃希菌和ESBL+肺炎克雷伯菌均无抗菌活性。
参考文献
[1]David RP G Pharm D. Cefdinir an advanced-Generation Broad-spectrum Orak cephakosporinCkinicak Therapeutics 2002244473-489.
[2]Nationak Committee for Ckinicak Laboratory Standards .MIC testing suppkement tabkes. NCCLS M100-S13M7 2003., 百拇医药(中国医学科学院 中国真和医科大学 北京协和医院检验科 王澎 谢秀丽 王辉 张悦贤 )
材料与方法
一、菌株 本研究共收集菌株270株，其中包括：肺炎球菌59株，流感嗜血杆菌26株，卡他莫拉菌20株，苯唑西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)51株，大肠埃希菌50株，肺炎克雷伯菌50株和β-溶血性链球菌14株。细菌鉴定采用常规鉴定法，必要时用VITEK仪器或Crystak仪器补充鉴定。
二、药敏试验：采用琼脂稀释法测定头孢地尼(cefdinir，西安杨森制药有限公司提供)和头孢克洛(cefackor)的最大抑菌浓度(MIC)，操作严格按美国临床实验室标准化委员会NCCLS推荐的指南进行2。当测试葡萄球菌时，加测苯唑西林筛选MSSA；测试肺炎链球菌时，加测青霉素Etest条(AB Biodisk Co.)，分别报告头孢地尼和头孢克洛对青霉素敏感、中介和耐药的肺炎链球菌的敏感性。每种抗生素对不同的菌株采用不同的浓度稀释，用点种器Orientak Motor Indicator日本佐久间制作所把菌悬液点种到含不同浓度抗生素的Muekker-Hinton(M-H) 琼脂(美国BD公司产品)表面，每个点点种约104 CFU。流感嗜血杆菌加测氨苄西林，药敏采用流感嗜血杆菌试验培养基HTM，而β-溶血性链球菌和肺炎链球菌药敏采用含5%脱纤维羊血的M-H琼脂。快生长菌的药敏平皿在 35℃空气环境中孵育16～20小时，而苛养菌在5% CO2环境中孵育20～24小时。按照文献中规定的折点判定敏感、中介和耐药(表1)。
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表1
在NCCLS(2003)中头孢地尼和头孢克洛的MIC判定折点(mg/L)
头孢地尼
头孢克洛
菌名
敏感
中介
耐药
敏感
中介
耐药
肺炎链球菌
, 百拇医药
≤0.5
1
≥32
≤1
2
≥34
流感嗜血杆菌
≤1
≥32
≤8
16
≥332
肠杆菌科菌和葡萄球菌属
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≤1
2
≥34
≤8
16
≥332
三、超广谱β-内酰胺酶(ESBL)及β-内酰胺酶试验：ESBL检测采用 NCCLS推荐的纸片扩散表型确证试验确定2：头孢噻肟单药与头孢噻肟+克拉维酸的复合制剂，头孢他啶与头孢他啶+克拉维酸的复合制剂英国Oxoid公司产品，两方案中任一组抗生素在加克拉维酸后抑菌圈扩大5 mm以上时，判定为ESBL+。大肠埃希菌ATCC 25922和肺炎克雷伯菌ATCC 700603分别用作ESBL-和ESBL+对照。用Nitrocefin法检测流感嗜血杆菌，卡他莫拉菌和金黄色葡萄球菌产生的β-内酰胺酶。
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四、质量保证：大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC 29213、肺炎链球菌ATCC 49619和流感嗜血杆菌ATCC 49247用来评价整个试验的准确性。6个质控MIC值均落在NCCLS质控允许的范围内。因此，所有数据参加统计分析。
五、数据分析：文中的数据和表格采用世界卫生组织耐药监测组Thomas O’Brien和John Stekking提供的WHONET5软件分析所得。
结果
对270株菌的全部研究结果：MIC50、MIC90、MIC范围及MIC平均值，耐药率、中介率和敏感率等列于表2。将270株菌分组进行观察与分析，1组是常见的呼吸道病原菌：青霉素敏感、中介和耐药的肺炎球菌，流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌；2组是ESBL+和ESBL-的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌；3组为苯唑西林敏感的金黄色葡萄球菌MSSA；4组为上呼吸道的条件致病菌β-溶血性链球菌。
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表2. 头孢地尼和头孢克洛对270株菌的体外抗菌活性(mg/L)
I菌名
抗生素
耐药%
中介%
敏感%
MIC50
MIC90
MIC平均值
MIC范围
株数
青霉素敏感的肺炎球菌(28)
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头孢地尼
0.0
0.0
100.0
0.064
0.064
0.058
0.016～0.125
头孢克洛
0.0
0.0
100.0
0.25
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0.5
0.338
0.125～0.5
青霉素中介的肺炎球菌(27)
头孢地尼
25.9
3.7
70.4
0.25
4
0.302
0.064～4
头孢克洛
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29.6
22.2
48.1
1.5
32
2.142
0.5～48
青霉素耐药的肺炎球菌(4)
头孢地尼
100.0
0.0
0.0
4
, 百拇医药
8
4.757
4～8
头孢克洛
100.0
0.0
0.0
64
256
76.109
32～256
流感嗜血杆菌(26)
头孢地尼
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0.0
0.0
100.0
0.25
1
0.286
0.064～1
头孢克洛
0.0
3.8
96.2
2
8
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2.682
0.5～16
卡他莫拉菌(20)
头孢地尼
0.064
0.125
0.083
0.008～0.25
头孢克洛
0.5
0.5
0.42
0.25～0.5
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ESBL-大肠埃希菌(21)
头孢地尼
4.8
14.3
81.0
0.5
2
0.552
0.125～4
头孢克洛
19.0
14.3
66.7
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8
32
8
2～32
ESBL+大肠埃希菌(29)
头孢地尼
100.0
0.0
0.0
256
256
192.166
64～512
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头孢克洛
100
0.0
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256
512
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256～512
ESBL-肺炎克雷伯菌(24)
头孢地尼
0.0
0.0
100.0
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0.125
0.25
0.158
0.064～1
头孢克洛
0.0
4.2
95.8
2
8
1.943
1～16
ESBL+肺炎克雷伯菌(26)
, 百拇医药
头孢地尼
100.0
0.0
0.0
512
512
234.09
4～512
头孢克洛
100.0
0.0
0.0
512
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512
498.531
256～512
MSSA(51)
头孢地尼
0.0
0.0
100.0
0.25
0.5
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0.125～0.5
头孢克洛
, 百拇医药
0.0
0.0
100.0
2
2
1.653
1～4
β-溶血性链球菌(14)
头孢地尼
0.064
0.064
0.05
0.016～0.064
, 百拇医药
头孢克洛
0.5
1
0.552
0.25～1
1. 头孢地尼和头孢克洛对常见呼吸道病原菌的体外抗菌活性
肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌是中耳炎、鼻窦炎、会厌炎、咽炎和肺炎的常见病原菌。 它们对β-内酰胺类的耐药性，近年来在很多地区，如美国和欧洲，增长很快。这些菌因发生青霉素结合蛋白(PBP)改变(如肺炎链球菌)或产生β-内酰胺酶(如流感嗜血杆菌及卡他莫拉菌)而耐药。
肺炎链球菌 所有测试的59株肺炎链球菌的MIC，分别按青霉素敏感、中介和耐药分3组分析，其结果(表2)显示，28株青霉素敏感的肺炎球菌对头孢地尼和头孢克洛均敏感，但头孢地尼的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围低于头孢克洛3.9～7.8倍。27株青霉素中介的肺炎球菌对头孢地尼和头孢克洛均耐药，耐药率分别为25.9%和29.6%，但头孢地尼和头孢克洛的中介率和敏感率分别为3.7%和70.4%对22.2%和48.1%，说明头孢地尼对PISP株的抗菌活性明显强于头孢克洛。4株青霉素耐药的肺炎球菌对这两种头孢菌素均耐药，但对头孢克洛比头孢地尼的耐药性更高，头孢克洛的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围比头孢地尼高8～32倍。
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流感嗜血杆菌26株流感嗜血杆菌中，有5株对氨苄西林耐药，且Nitrocefin试验+β-内酰胺酶阳性率为19.2%5/26株，对头孢地尼和头孢克洛的敏感率分别为100%和96.2%，未见对二者耐药的流感嗜血杆菌菌株，且头孢地尼的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围低于头孢克洛7.8～16倍。
卡他莫拉菌 本研究中20株卡他莫拉菌β-内酰胺酶阳性率为90.0%18/20株，由于目前NCCLS没有判定折点，无法分析敏感率，这两种头孢菌素有较低的MIC值，且头孢地尼的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围〔(0.008～0.25)mg/L〕明显低于头孢克洛〔(0.25～0.5)mg/L〕。
2. 头孢地尼和头孢克洛对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的抗菌活性
本研究共测试了50株大肠埃希菌和50株肺炎克雷伯菌，把这两种菌分为ESBL(-)和 ESBL(+)组分别进行统计分析(表2)。
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大肠埃希菌：ESBL(-)和 ESBL(+)组的药敏谱明显不同。头孢地尼对21株ESBL菌保持很高的活性耐药率仅为4.8%MIC90值为2 mg/L，MIC范围为(0.125～4) mg/L。而头孢克洛比头孢地尼显示较高的耐药性，耐药率为19%MIC90为32 mg/L，MIC为(2～32) mg/L。29株ESBL+菌体外对这2种抗生素均耐药。
肺炎克雷伯菌：头孢地尼和头孢克洛对24株ESBL-的肺炎克雷伯菌有极好的抗菌活性，未发现耐药菌株，敏感率分别为100%和95.8%。而这2种抗生素对26株ESBL+菌体外高水平耐药，没有敏感的菌株发现。
3.头孢地尼和头孢克洛对MSSA的体外抗菌活性
MSSA NCCLS2推荐不论β-内酰胺药在耐苯唑西林药的葡萄球菌菌株中的体外活性是敏感还是耐药，都应向临床报告为耐药株，因此本研究只评估了对MSSA的抗菌活性，51株MSSA对所测试的2种头孢菌素都高度敏感，敏感率均为100%，但头孢地尼的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围低于头孢克洛4～8倍。
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4. 头孢地尼和头孢克洛对B群β-溶血性链球菌的体外抗菌活性
头孢地尼和头孢克洛无判定折点。2种头孢菌素的抗菌活性都很高
而头孢地尼的MIC50、MIC90、MIC平均值和MIC范围低于头孢克洛(7.8～15.6)倍。
结论
1.头孢地尼和头孢克洛对青霉素敏感的肺炎球菌，流感嗜血杆菌和MSSA有极好的抗菌活性敏感率为96.2%～100%，而头孢地尼比头孢克洛有较低的MIC值。
2.头孢地尼对青霉素中介的肺炎球菌比头孢克洛有较高的抗菌活性。对青霉素耐药的肺炎球菌对这两种头孢菌素均耐药，尤其对头孢克洛的MIC值比对头孢地尼明显升高。
3.头孢地尼和头孢克洛对易产β-内酰胺酶的卡他莫拉菌和β-溶血性链球菌均有极好的抗菌活性，且头孢地尼比头孢克洛有较低的MIC值。
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4.头孢地尼对ESBL-大肠埃希菌和ESBL-肺炎克雷伯菌比头孢克洛有较高的抗菌活性，但是这两种头孢菌素对ESBL+大肠埃希菌和ESBL+肺炎克雷伯菌均无抗菌活性。
参考文献
[1]David RP G Pharm D. Cefdinir an advanced-Generation Broad-spectrum Orak cephakosporinCkinicak Therapeutics 2002244473-489.
[2]Nationak Committee for Ckinicak Laboratory Standards .MIC testing suppkement tabkes. NCCLS M100-S13M7 2003., 百拇医药(中国医学科学院 中国真和医科大学 北京协和医院检验科 王澎 谢秀丽 王辉 张悦贤 )