肾综合征出血热、汉坦病毒肺综合征和汉坦病毒研究近况(下)(3)
Gavrilovskaya,IN等的早期研究表明，表达于血小板和血管内皮细胞表面的整合素(integrins)可以介导HPS的病原NY-1和SNV的感染，这一感染可被抗β3整合素的抗体或β3整合素的配体--玻连蛋白(vitronectin)所抑制。与此相反，用纤连蛋白或抗β1整合素抗体可以抑制非致病的PHV的感染，而不被抗β3整合素的抗体或玻连蛋白抑制。经用含有αⅡbβ3或αVβ3的整合素转染的细胞对NY-1和SNV易感但是对PHV不易感，表明上述2种整合素可以介导病毒对细胞的感染。以上研究结果提示整合素可能是一种HV感染的受体，并且与本病的发病机理有关。
在上述研究的基础上，Gavrilovskaya,IN等在本次会议上又报告了他们有关致病与非致病性HV感染对β3和β1整合素及内皮细胞功能的调节作用。研究发现，①HV的致病毒株与非致病毒株感染均可增加内皮细胞表面β3和β1整合素受体的数量。②致病的HV如NY-1、SNV、HTNV、SEOV和PUUV均可阻断整合素配体引起的含有β3整合素的内皮细胞的移动，但是对含β1类整合素的内皮细胞无效。③抗β3整合素的抗体同样可以阻止玻连蛋白相关的内皮细胞的移动，且NY-1病毒感染后24～48小时即可阻止内皮细胞的移动。④与致病毒株相反，非致病毒株PHV或TULV不能阻止由β3和β1整合素配体引起的内皮细胞移动。上述研究表明致病的HV(HFRS或HPS的病原)可以明显影响由β3整合素配体引起的内皮细胞的移动，而后者是机体维持内皮细胞完整性的重要功能。
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四、实验诊断
(一)血清学诊断
虽然自九十年代初以来韩国、日本和欧洲国家相继开发了新的抗原载体(如高密度颗粒载体)并将其用于HFRS的实验诊断，但是由于多种原因在我国还难以引进、移植和推广。近年已有研制胶体金诊断药盒的报道，但尚未全面推广。因此，适于基层和现场检测的简单快速的诊断方法仍有待开发。本次会议上介绍了几种新的血清学诊断技术。其中之一为芬兰Kuopio大学化学系的Hujakka H等报告的免疫色谱快诊试验(immunochromatographic rapid test)。该项技术应用了杆状病毒表达的PUUV核衣壳蛋白和一种新的免疫扩散技术(immunodiffusion techniques)，类似于免疫滴金试验。该项技术的特点为快速(5分钟出结果)、简便(对标本的要求不高，血清、血浆和指尖采集全血标本皆可测定)、特异和敏感(超过现有的捕获法ELISA商品药盒)，且肉眼即可判定结果，勿需特殊检测仪器设备。已发现美洲和欧洲许多HFRS或HPS疫区同时存在着多种型别的汉坦病毒，由于这些病毒所致疾病的临床表现和病情轻重很不相同，常规血清学诊断技术难以鉴别病原类型，因此迫切需要发展新的分型诊断方法。本次会议上日本北海道大学的Arikawa J等报告，用杆状病毒表达的截短的核衣壳蛋白(aa155～429)作IFA抗原检测恢复期血清可用于区分HTNV与SEOV感染。此外美国CDC的Hjelle B等曾报告(1997)应用多种基因重组抗原和化学合成多肽制备了敷有塑料基质的硝基纤维素膜HV抗原条带，可用于抗HV抗体和病原分型检测，称为条带免疫杂交分析 (strip immunoblot assay,SIA),其优点是勿需特殊检测仪器如ELISA读数仪和荧光显微镜等，可用于现场实验诊断或流行病学调查。
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(二)基因检测
HV感染的基因和基因分型检测国内外已有较多报道，目前均采用RT-PCR技术。由于HFRS或HPS病程早期病毒载量(virus loading)较小，以及检测试剂和仪器的质量较差等，国内目前在临床标本的检测方面还不够敏感稳定。国际上已研究开发了一些新的检测HV基因的PCR技术，如美国陆军传染病研究所Schmal john CS领导的课题组研制了一种新的检测HV基因的免疫PCR方法。他们将9个血清型的18株HV RNA加入含有地高辛精-dUTP的PT-PCR反应体系中进行反转录和基因扩增，然后将扩增产物与生物素标记的特异性探针杂交，并与固化在微板中的亲合素结合，最后加入过氧化物酶标记的抗地高辛精抗体并进行呈色。该方法具有较高的特异性和敏感性，具有型别和株别的特异性，可检出15个空斑形成单位(PFU)即大约50个拷贝的病毒基因，适用于临床诊断和病毒基因分型检测，而且易于发展为自动化检测，有很好的应用前景。, http://www.100md.com(杭长寿)
在上述研究的基础上，Gavrilovskaya,IN等在本次会议上又报告了他们有关致病与非致病性HV感染对β3和β1整合素及内皮细胞功能的调节作用。研究发现，①HV的致病毒株与非致病毒株感染均可增加内皮细胞表面β3和β1整合素受体的数量。②致病的HV如NY-1、SNV、HTNV、SEOV和PUUV均可阻断整合素配体引起的含有β3整合素的内皮细胞的移动，但是对含β1类整合素的内皮细胞无效。③抗β3整合素的抗体同样可以阻止玻连蛋白相关的内皮细胞的移动，且NY-1病毒感染后24～48小时即可阻止内皮细胞的移动。④与致病毒株相反，非致病毒株PHV或TULV不能阻止由β3和β1整合素配体引起的内皮细胞移动。上述研究表明致病的HV(HFRS或HPS的病原)可以明显影响由β3整合素配体引起的内皮细胞的移动，而后者是机体维持内皮细胞完整性的重要功能。
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四、实验诊断
(一)血清学诊断
虽然自九十年代初以来韩国、日本和欧洲国家相继开发了新的抗原载体(如高密度颗粒载体)并将其用于HFRS的实验诊断，但是由于多种原因在我国还难以引进、移植和推广。近年已有研制胶体金诊断药盒的报道，但尚未全面推广。因此，适于基层和现场检测的简单快速的诊断方法仍有待开发。本次会议上介绍了几种新的血清学诊断技术。其中之一为芬兰Kuopio大学化学系的Hujakka H等报告的免疫色谱快诊试验(immunochromatographic rapid test)。该项技术应用了杆状病毒表达的PUUV核衣壳蛋白和一种新的免疫扩散技术(immunodiffusion techniques)，类似于免疫滴金试验。该项技术的特点为快速(5分钟出结果)、简便(对标本的要求不高，血清、血浆和指尖采集全血标本皆可测定)、特异和敏感(超过现有的捕获法ELISA商品药盒)，且肉眼即可判定结果，勿需特殊检测仪器设备。已发现美洲和欧洲许多HFRS或HPS疫区同时存在着多种型别的汉坦病毒，由于这些病毒所致疾病的临床表现和病情轻重很不相同，常规血清学诊断技术难以鉴别病原类型，因此迫切需要发展新的分型诊断方法。本次会议上日本北海道大学的Arikawa J等报告，用杆状病毒表达的截短的核衣壳蛋白(aa155～429)作IFA抗原检测恢复期血清可用于区分HTNV与SEOV感染。此外美国CDC的Hjelle B等曾报告(1997)应用多种基因重组抗原和化学合成多肽制备了敷有塑料基质的硝基纤维素膜HV抗原条带，可用于抗HV抗体和病原分型检测，称为条带免疫杂交分析 (strip immunoblot assay,SIA),其优点是勿需特殊检测仪器如ELISA读数仪和荧光显微镜等，可用于现场实验诊断或流行病学调查。
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(二)基因检测
HV感染的基因和基因分型检测国内外已有较多报道，目前均采用RT-PCR技术。由于HFRS或HPS病程早期病毒载量(virus loading)较小，以及检测试剂和仪器的质量较差等，国内目前在临床标本的检测方面还不够敏感稳定。国际上已研究开发了一些新的检测HV基因的PCR技术，如美国陆军传染病研究所Schmal john CS领导的课题组研制了一种新的检测HV基因的免疫PCR方法。他们将9个血清型的18株HV RNA加入含有地高辛精-dUTP的PT-PCR反应体系中进行反转录和基因扩增，然后将扩增产物与生物素标记的特异性探针杂交，并与固化在微板中的亲合素结合，最后加入过氧化物酶标记的抗地高辛精抗体并进行呈色。该方法具有较高的特异性和敏感性，具有型别和株别的特异性，可检出15个空斑形成单位(PFU)即大约50个拷贝的病毒基因，适用于临床诊断和病毒基因分型检测，而且易于发展为自动化检测，有很好的应用前景。, http://www.100md.com(杭长寿)