流感病毒的实验室快速诊断方法(上)(5)
(二)操作步骤
1.常量法，也称大量法
(1)拿一块干净的大孔塑料板，标记所要测定的标本名称。
(2)于塑料板第一孔加入0.2m1(1:2开始稀释)或0.4m1(1:5开始稀释)，从第二孔开始一律各加入0.2m1。
(3)如1：2开始稀释，于第一孔中加入0.2m1病毒悬液；如1:5开始稀释，于第一孔中加入0.1m1病毒悬液。用吸管轻轻吹打第一孔，使会充分相混，吸出o.2m1放入第二孔，以相同方式一直至最后一孔。最后一孔吹打后，应弃掉0.2m1。如做1:5开始稀释，第一孔应还得吹掉0.1ml。
(4)于每孔中加入0.2ml 1%红细胞悬液，轻轻摇匀，置室温或4℃30一60min后观察结果。
(5)观察结果： 以++++ ，+++ ，++ ，+ ，± ，— 来表示。
一层红细胞均匀地铺于孔底上者为 ++++
一层红细胞铺于孔底，面积稍小，边缘不整齐者为 +++
红细胞形成一个环状，周围有小凝集块者为 ++
红细胞形成一个小团，但边缘不整齐有小凝集块者为 +
红细胞于孔底形成一个小团，边缘整齐有立体感，将血凝板倾斜片刻，可见红细胞滑动如泪滴状则为 —
± 为可疑，计算时以 — 处理。
(6)红细胞凝集滴度计算：
结果以++为终点，也就是一个血凝单位。它表明最高稀释度的病毒能引起++的红细胞凝集为终点，此稀释度的倒数为红细胞凝集滴度，简称血凝滴度。理论推算，出现++的高一个稀释度应为—，低一个稀释度应为++++，但结果常常不是这样，因此必须进行计算。为方便计算，以表3—1为例介绍计算方法：
四个血凝单位计算：将血凝单位除以4，如表3—1中标本3，它的四个血凝单位应为：640/4＝160，即将标本1进行1：160稀释时，其稀释液就是含四个血凝单位。请注意!1：160稀释应为1m1病毒悬液加159m1稀释液(一般用生理盐水)。
2.微量法
除用小孔塑料板，稀释用稀释棒或稀释枪，总量为0.05m1(病毒0.025m1，红细胞悬液0.025m1)外，其余同常量法。
三、红细胞凝集抑制试验
(一)材料
1.红细胞凝集试验中所有材料。
2.受体破坏酶(RDE)。
3.免疫血清或测定血清。
(二)操作步骤, http://www.100md.com(丁丽新)
1.常量法，也称大量法
(1)拿一块干净的大孔塑料板，标记所要测定的标本名称。
(2)于塑料板第一孔加入0.2m1(1:2开始稀释)或0.4m1(1:5开始稀释)，从第二孔开始一律各加入0.2m1。
(3)如1：2开始稀释，于第一孔中加入0.2m1病毒悬液；如1:5开始稀释，于第一孔中加入0.1m1病毒悬液。用吸管轻轻吹打第一孔，使会充分相混，吸出o.2m1放入第二孔，以相同方式一直至最后一孔。最后一孔吹打后，应弃掉0.2m1。如做1:5开始稀释，第一孔应还得吹掉0.1ml。
(4)于每孔中加入0.2ml 1%红细胞悬液，轻轻摇匀，置室温或4℃30一60min后观察结果。
(5)观察结果： 以++++ ，+++ ，++ ，+ ，± ，— 来表示。
一层红细胞均匀地铺于孔底上者为 ++++
一层红细胞铺于孔底，面积稍小，边缘不整齐者为 +++
红细胞形成一个环状，周围有小凝集块者为 ++
红细胞形成一个小团，但边缘不整齐有小凝集块者为 +
红细胞于孔底形成一个小团，边缘整齐有立体感，将血凝板倾斜片刻，可见红细胞滑动如泪滴状则为 —
± 为可疑，计算时以 — 处理。
(6)红细胞凝集滴度计算：
结果以++为终点，也就是一个血凝单位。它表明最高稀释度的病毒能引起++的红细胞凝集为终点，此稀释度的倒数为红细胞凝集滴度，简称血凝滴度。理论推算，出现++的高一个稀释度应为—，低一个稀释度应为++++，但结果常常不是这样，因此必须进行计算。为方便计算，以表3—1为例介绍计算方法：
四个血凝单位计算：将血凝单位除以4，如表3—1中标本3，它的四个血凝单位应为：640/4＝160，即将标本1进行1：160稀释时，其稀释液就是含四个血凝单位。请注意!1：160稀释应为1m1病毒悬液加159m1稀释液(一般用生理盐水)。
2.微量法
除用小孔塑料板，稀释用稀释棒或稀释枪，总量为0.05m1(病毒0.025m1，红细胞悬液0.025m1)外，其余同常量法。
三、红细胞凝集抑制试验
(一)材料
1.红细胞凝集试验中所有材料。
2.受体破坏酶(RDE)。
3.免疫血清或测定血清。
(二)操作步骤, http://www.100md.com(丁丽新)