用改良消减杂交结合选择性PCR法构建老年性白内障消减cDNA文库
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第四军医大学生物化学与分子生物学教研室；第四军医大学科研处；第四军医大学西京医院眼科 西安710032 刘燕
改良消减杂交|选择性PCR|老年性白内障|消减CDNa文库|反向点杂交|核酸序列分析,用改良消减杂交结合选择性PCR法构建老年性白内障消减CDNa文库
参见附件(83kb)。
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室；第四军医大学科研处；第四军医大学西京医院眼科 西安710032 刘燕；刘新平；药立波；周健；王吉村；苏景宽；惠延年
关键词：改良消减杂交；选择性PCR；老年性白内障；消减cDNA文库；反向点杂交；核酸序列分析
摘要：为构建含较多大片段的高质量的老年性白内障消减cDNA文库,利用生物素标记、磁珠分离的改良消减杂交法获得差异cDNA .利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA ,将其与T 载体进行T A连接并转化入大肠杆菌,成功构建老年性白内障消减cDNA文库.共获得4 0 0 0余个克隆,随机挑取的2 2个克隆中,≥10 0 0bp的片段有7个,占31 8% ,≥75 0bp有15个,占6 8 2 % .将≥75 0bp的15个克隆进行反向点杂交,排除其中假阳性克隆,阳性克隆经测序并与GenBank比较,得到6个已知基因、1个新基因,6个已知基因中4个为全长基因,说明所得cDNA片段较大,文库质量较高.改良消减杂交法结合.
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室；第四军医大学科研处；第四军医大学西京医院眼科 西安710032 刘燕；刘新平；药立波；周健；王吉村；苏景宽；惠延年
关键词：改良消减杂交；选择性PCR；老年性白内障；消减cDNA文库；反向点杂交；核酸序列分析
摘要：为构建含较多大片段的高质量的老年性白内障消减cDNA文库,利用生物素标记、磁珠分离的改良消减杂交法获得差异cDNA .利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA ,将其与T 载体进行T A连接并转化入大肠杆菌,成功构建老年性白内障消减cDNA文库.共获得4 0 0 0余个克隆,随机挑取的2 2个克隆中,≥10 0 0bp的片段有7个,占31 8% ,≥75 0bp有15个,占6 8 2 % .将≥75 0bp的15个克隆进行反向点杂交,排除其中假阳性克隆,阳性克隆经测序并与GenBank比较,得到6个已知基因、1个新基因,6个已知基因中4个为全长基因,说明所得cDNA片段较大,文库质量较高.改良消减杂交法结合.
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