络病与心脑血管疾病相关性研究及治疗新进展 蛋白C在鼠糖尿病模型中的改变及通心络胶囊干预观察
作者简介
朱雄超 副主任医师，现供职于浙江大学医学院附属第一医院，从事神经内科工作；1988年毕业于北京医科大学临床医学系，主要研究方向为脑血管疾病，以第一第二作者发表论文12篇，主持及参与科研项目3项。
摘要
目的：观察蛋白C在鼠糖尿病模型中的改变及通心络胶囊干预的影响。方法：将SD大鼠随机分为两组，一组经链尿佐菌素诱发的糖尿病模型(DM)组，另一组为血糖正常对照组(C)，两组均再随机分为DM1组、DM2组、C1组、C2组，其中DM2、C2组给予通心络治疗5周。治疗前后称体重、监测血糖，采用发色底物法测定血浆蛋白C活性。结果：DM1、DM2、C1、C2组血浆蛋白C活性分别为(4.95±1.24)%，(6.48±2.02)%，(3.61±1.12)%，(5.08±1.43)%。DM2组高于DM1组，DM1组高于C1组，C2组高于C1组，差别有显著性意义P
研究
糖尿病患者往往伴随出凝血系统功能异常，并与糖尿病心、脑血管病变等慢性并发症发生发展密切相关，而蛋白C作为一个重要的抗凝因子，其在糖尿病时存在明显的合成分泌异常。我们利用鼠糖尿病模型观察糖尿病早期是否存在蛋白C改变，同时观察通心络胶囊治疗对其的干预作用。
对象和方法
对象：SD大鼠50只，清洁级动物，雌雄各半，体重201～237 g 218.0±10.31 g。由浙江大学医学院实验动物中心提供实验动物和标准实验室。
方法：
1.糖尿病模型建立 用天平称取链尿佐菌素450 mg，加入由柠檬酸、柠檬酸钠配成pH值为4.2的缓冲液37.5 mk，摇匀放置冰浴中。随机抽取SD大鼠30只雌雄各半，按60 mg/kg即0.5 mk/100 g在大鼠腹腔注射链尿佐菌素，在45分钟内注射完毕。链尿佐菌素注射后10小时内给予大鼠喂饲10%葡萄糖，以防止低血糖。(24～72)小时分别每天监测一次血糖，连续两次血糖>250 mg/dk视为糖尿病模型造模成功。以后根据血糖情况隔天腹部皮下注射中效胰岛素诺和灵N (2～4) U，使血糖保持在250 mg左右。结果造模成功25只，饲养中于第三、五周共死亡2只，最后入组存活23只，其中雌鼠12只、雄鼠11只。随机弃用雌鼠1只，以保持性别平衡。余20只大鼠同批给予腹腔注射由柠檬酸、柠檬酸钠配成的pH值为4.2的缓冲液，72小时后测定血糖均在正常范围。
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2. 分组 第一组糖尿病模型1组(DM1)：随机抽取糖尿病模型鼠12只雌雄各半，生理盐水灌胃1次/天，共5周；第二组糖尿病模型2组(DM2)：剩余糖尿病模型鼠10只雌雄各半，通心络胶囊灌胃1次/天，1粒/次，共5周；第三组：正常血糖对照1组(C1)：随机抽取未造模SD大鼠10只雌雄各半，生理盐水灌胃1次/天，共5周；第四组：正常血糖对照2组(C2)：剩余未造模SD大鼠10只雌雄各半，通心络胶囊灌胃同第二组。实验开始分别测定四组SD大鼠的体重，1～4组SD大鼠体重分别为(216.3±9.5)g、(219.6±14.0)g、(214.4±7.2)g、(222.1±9.4)g，差异无显著性P>0.05。治疗前后分别测定血糖，血糖测定用Surestep血糖仪 由强生有限公司生产 测定。通心络胶囊由石家庄以岭药业股份有限公司提供。
3. 采血 鼠喂养4周后于心脏采血1.5 mk加入0.3 mk(0.109 mok/L枸橼酸钠，采用常温离心机5000转/分，离心5分钟，取血浆，放置-70℃冰箱中保存待测。
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4. 血浆蛋白 C测定 试剂盒由上海太阳生物技术公司提供，严格按说明书的步骤，采用发色底物法测定血浆蛋白C活性以下简称APC。
5. 统计学处理 各组数据均用均数±标准差表示，组间均数比较利用SPSS10.0版进行方差分析(ANOVA)及q检验(S-N-K)。
结果
各组治疗前后血糖以及APC见表1。糖尿病组的血糖始终高于正常水平，而正常组血糖则始终在正常范围；APC则DM2组高于DM1、C1、C2组；DM1组高于CI组；C2组高于C1组，差别有显著性意义P
表1 各组APC(单位为%)
组别
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治疗前血糖
mg/d1
治疗后血糖
mg/d1
APC
DM1(n=12)
331.6±59.5
269.3±33.0
4.95±1.24
DM2(n=10)
313.5±44.3
287.1±35.8
, 百拇医药
6.48±2.02
C1(n=10)
73.3±7.6
76.6±9.7
3.61±1.12
C2(n=10)
71.9±6.9
74.2±8.6
5.08±1.43
表2 每两组APC比较检验的P值
组别
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DM2
C1
C2
DM1(n=12)
0.021
0.841
0.041
DM2(n=10)
0.042
0.000
C1(n=10)
0.033
讨论
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糖尿病是一种可导致心、脑血管系统等严重并发症的常见病，其主要病变基础是血管损害。许多研究表明糖尿病伴随出凝血系统异常。人体抗凝系统主要由抗凝血酶肝素系统及血浆蛋白C系统共同组成，其中蛋白C系统具有较强的抗凝活性，约占全血抗凝系统的20%～30%，是体内的一种重要抗凝因子。蛋白C是一种维生素K依赖抗凝因子，平时以无活性酶原形式循环于血浆中，其被激活后通过灭活Ⅴa和Ⅷa因子及促进纤维蛋白溶解而发挥抗凝作用。
由于临床上常常很难确定糖尿病患者准确发病时间，并且患者常常联合应用多种药物治疗疾病，所以临床上难以准确判断APC在糖尿病早期是否出现异常及通心络胶囊干预的影响。为了克服上述影响，采取鼠糖尿病模型作为研究对象。
笔者研究表明，鼠糖尿病模型5周后即出现APC增高，说明糖尿病早期就可能存在蛋白C活化现象，其机制可能与糖尿病致血栓调节蛋白增高有关。血栓调节蛋白可同时结合凝血酶和蛋白C，可明显增高蛋白C的活性，对凝血酶的促凝活性进行下调，蛋白C活性增高可能是先于血管病变的间接征象，可能是糖尿病致血管病变的早期指标之一。本实验未能进行血管病理研究是一个缺憾。蛋白C活性增高也可能与糖尿病致血小板活化使蛋白C活性代偿性增高有关。如果蛋白C活性不能抵抗血小板活化等凝血系统增强因素，微血管病变可能较早发生。因此，及早使用抗血小板活性药物和(或)提高蛋白C活性的药物有着重要临床意义。也可能蛋白C活性增高是上述两种因素共同作用所致。
通心络胶囊是吴以岭教授首创运用中医络病理论研制而成的中药复方制剂，由人参、水蛭、土鳖虫、全蝎、蜈蚣、蝉蜕、赤芍、冰片组成，具有益气活血、通络解痉之功效，在临床治疗心脑血管疾病中取得较好疗效。笔者就糖尿病致蛋白C活性增强，通过通心络胶囊灌胃进行干预研究。结果发现通心络能使正常鼠蛋白C活性增强，也能使蛋白C活性本已增强的糖尿病鼠的蛋白C活性进一步增强。这是令人鼓舞的，预示通心络胶囊不仅对心脑血管疾病有治疗作用，也可能对糖尿病致心脑血管疾病有预防作用。因此，传统医学对预防糖尿病血管病变及延迟糖尿病并发症发生发展，可能有一定的作为，值得进一步深入研究。, http://www.100md.com(浙江大学医学院附属第一医院神经内科 朱雄超 郑旭宁 范慧 余国友 袁圆 胡中荣 作者简介朱雄超 副)