禽流感实验室检测技术方案(试行)
本方案是为指导实验室检测禽流感而制定。
一、禽流感病毒实验室安全
禽流感病毒检测的实验室生物安全应按微生物生物安全分类要求在P3级实验室进行。
二、标本的采集、运送
1、采集标本的种类：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血液以及死亡病例的尸检组织。
2、采集标本时间：用于分离病毒的标本应为发病2-3天，最好不超过7天。用于血清检测标本应采急性期和恢复期的双份血液。急性期尽早采集，最迟不超过发病后7天，恢复期血清应在发病后14天采集。
3、标本的运送：参照中国CDC关于SARS标本运送要求。
4、采集时的防护：疑似病例的标本应按照SARS要求。
三、检测程序
1、疑似病例咽拭子或含漱液、鼻拭子和尸检组织
(1)病毒分离、鉴定
用组织培养和鸡胚分离法。具体方法同常规人流感检测，详见《全国流感监测方案(试行)》(中疾控发[2003]445号)附件。不同的是鸡胚接种一定要用SPF鸡胚。
鸡胚或细胞培养物进一步用HA和HI试验鉴定，方法见(中疾控发[2003]445号)附件。试验试剂用WHO提供的试剂盒。
经HI试验H5抗体阳性者报送国家流感中心。HA阳性HI试验H5阴性，也送国家流感中心。
(2)RT-PCR或实时RT-PCR试验
该方法可作为早期实验室诊断的参考依据。可和病毒分离培养同时进行帮助早期判定。
2、疑似病例血清的检测
(1)感染早期的血清标本
用于病毒分离培养方法同上。同时要留部分作为双份血清的急性期血清备用。
(2)感染7天以后的血清标本
与急性期血清配对同时做HI试验检测，方法见(中疾控发[2003]445号)附件。
3、常规检测中可疑标本
在常规流感监测中实验室发现HA阳性而血清HI，H3和B型血清皆不抑制标本，应用H5试剂盒做鉴定。
四、检测结果
1、分离到病毒，HI试验H5抗体阳性或同时PCR试验H5阳性，可报禽流感H5型阳性，送国家流感中心复核。
2、分离到病毒，HI试验H5抗体阴性，PCR试验H5阳性者，原始标本送国家流感中心进一步检测。
3、恢复期H5抗体较急性期抗体4倍增高，可报禽流感H5型阳性，送国家流感中心复核。
4、HA 阳性但HI试验H5阴性，有条件的省需进一步做中和实验确定。无条件的省送邻近省或国家流感中心进一步确定。, 百拇医药(吴晓洋)