中药方剂学(2004.03.25)
高剂量紫苏油有抵抗血压升高作用
如何通过科学膳食预防和治疗高血压是人们一直关心的问题。紫苏油是通过从唇形科植物紫苏的干燥成熟果实中冷榨所得的一种富含α-亚麻酸的脂肪油。它有多方面的药理作用，如镇咳、平喘、抗过敏、降脂、促智、预防和治疗血栓性疾病等，但它对血压的影响及其作用的机制是目前尚未深入开展的课题。《中国临床康复》2004年第3期报道了大连大学医学院生理教研室嵇志红、大连大学生物工程学院王钦富和大连大学医学院吕园园等对植物提取剂紫苏油对大鼠血压及心率影响的研究成果。该研究以SD大鼠为实验动物，旨在观察紫苏油对血压的影响，为紫苏油的应用开发提供合理的实验依据。方法：选用健康Sprague-Dawley纯种大鼠60只(购于大连医科大学实验动物中心)，体质量160～180g，雌雄各半，按随机抽签法分成6组(各组雌雄各5只)：对照组、模型组、牛黄降压丸(Niuhuangjiangya
pill，NH)组、紫苏油高剂量(higher Perilla-oil，POH)组、紫苏油中剂量(middle
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Perilla-oil，POM)组、紫苏油低剂量(lower Perilla-oil，POL)组。牛黄降压丸购于天津达仁堂药房，批号为011111；紫苏油醇提物由生物工程学院植化室提供。仪器为中日友好临床医学研究所研制的RBP-1B型大鼠尾压测量仪。
方法：从第1天起，除对照组饮自来水外，其余各组每天均饮20g/l盐水，连续饮15天，复制高盐性高血压大鼠动物模型。在每天饮20g/l盐水的同时，NH组给牛黄降压丸0.12g/kg；POH组、POM组、POL组分别给紫苏油9.00，4.50，2.25g/kg；对照组和模型组每天均给生理盐水10ml/kg，各组均灌胃给药。连续给药15天后，测量各组大鼠的尾动脉收缩压和心率。实验过程中各组均自由饮食饮水，温度(20±3)℃条件下饲养。统计学处理：采用SPSS10.0软件对实验结果进行统计学分析；数据以±s表示；对照与模型组，对照组与NH组间比较采用t检验；POH组、POM组、POL组与对照组和模型组组间差异比较采用F检验。
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结果显示：各组大鼠的血压和心率高盐摄入7天后血压即明显上升，15天后，模型组的尾动脉收缩压显著高于对照组(t=-3.516，P=0.006)，但心率与对照组差异无显著性意义。NH组大鼠的尾动脉收缩压、心率与对照组比较，差异均无显著性意义。紫苏油剂量组与NH组比较，差异有显著性意义(F=5.23，P=0.008)，显示剂量组与NH组有差异。采用Dunnett
t法进一步比较，结果POH组、POM组、POL组的P值分别为0.799、0.506、0.004，POH组、POM组与对照组比较，差异无显著性意义。剂量组与模型组比较，F检验结果显示POH组、POM组、POL组的P值分别为0.007、0.018、0.834，POH组、POM组尾动脉收缩压显著低于模型组。POH组、POM组、POL组3组的心率与对照组比较，差异无显著性意义。
结果表明高、中剂量紫苏油组的尾动脉收缩压显著低于模型组，提示较高剂量的紫苏油有明显的抵抗血压升高的作用，这为紫苏油的应用开发提供了合理的实验依据。
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抗呆I号可恢复脑缺血再灌注损伤细胞功能
抗呆I号是以天麻和钩藤(主要成分为天麻素和钩藤碱)为主的中药制剂，《中国临床康复》2004年第1期报道了北京中医药大学基础医学院形态系宋岳涛、唐一鹏等有关抗呆I号对体外模拟脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞的影响的研究。他们在大鼠大脑皮质星形胶质细胞分离纯化培养的基础上，制作体外模拟脑缺血再灌注损伤模型，观察星形胶质细胞活性及存活率的变化、培养液蛋白质含量的变化和抗呆I号的影响，目的是揭示星形胶质细胞在体外模拟脑缺血再灌注损伤中胞内与胞外的一些变化规律和中药抗呆I号可能的作用途径。
方法：先对分离纯化培养的星形胶质细胞进行体外模拟脑缺血再灌注损伤模型的建立，然后采用MTT法对星形胶质细胞的活性和存活率进行测定以及用Bradform法对星形胶质细胞条件培养液中蛋白质含量进行测定。
结果显示：体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞在体外模拟脑缺血再灌注损伤中的活性、存活率、无血清条件培养液蛋白含量的变化具有一定的规律性，可分细胞损伤期、功能代偿期、功能低下期和功能恢复期。抗呆Ⅰ号可使受损的星形胶质细胞的活性明显增强(与模型组相比多数时间点比较t=2.074，P<0.05)，存活率显著提高(与模型组相比多数时间点P<0.05，t>2.219)，使其条件培养液中的蛋白含量迅速增高(与模型组相比多数时间点t>5.087，P<0.001)。
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宋岳涛、唐一鹏等指出：实验结果提示，中药抗呆I号对正常培养的星形胶质细胞只产生轻微的影响，各项测定指标正常组和正常用药组相比均无统计学差异；而它对缺血再灌注损伤的星形胶质细胞则产生显著影响，模型组和模型用药组相比有统计学意义，故在此只分N、M和My来分析。星形胶质细胞在脑缺血再灌注损伤中的变化可分以下4期：1.细胞损伤期：从缺血开始至再灌注3小时末。此期因换液两次，加之细胞功能受损，培养液中的蛋白含量很低。中药抗呆I号加入培养液中，它会促进细胞的分泌功能，减少蛋白质的漏出，未用药的损伤细胞因胞膜破坏胞内蛋白漏出较多，所以此期3组细胞的活性和存活率表现为：N>My>M，而培养液中蛋白含量则是：N>M>My。2.功能代偿期：从再灌注3小时末至再灌注18小时末。此期细胞因受外来因素的刺激在一定程度上表现为细胞活性、增生能力和分泌功能代偿性的增强，胞内细胞活性和存活率为：N>My>M，胞外蛋白含量为：N>My>M，但从增强的幅度来看M组均较小。3.功能低下期：从再灌注18小时末至再灌注36小时末。此期细胞活性和胞外蛋白含量均为：N>My>M，都表现为下降趋势。从培养液蛋白含量的变化来看，N下降幅度较小，而My和M下降幅度较大。4.功能恢复期：从再灌注36小时末至再灌注96小时末。培养的细胞受到一定的损伤刺激后，会激发内源性的保护机制使星形胶质细胞的分泌功能增强，从而达到维持内环境稳定的目的。此期N和My两组细胞的活性和存活率以及细胞培养液蛋白含量逐渐趋于一致，而M组仍处于较低水平，说明抗呆I号具有使受损细胞功能尽快恢复正常的作用。
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结论：抗呆I号具有间接保护和修复受损神经元的作用，其途径为：脑缺血再灌注损伤→星形胶质细胞受刺激或受损→抗呆I号使星形胶质细胞的损伤减轻或使其分泌功能增强→细胞外液中神经营养因子等增多→保护和修复受损的神经元。
斑蝥素有望用于治疗器官组织纤维化
纤维化有关疾病是许多疾病脏器损伤的结果，如肝纤维化、肺纤维化、真皮纤维化等，它的防治尚无有效方法。《中国临床康复》2004年第2期报道了解放军307医院药剂科高振梅、解放军304医院万鲲等通过实验观察了斑蝥素对NIH/3T3细胞形态和增殖的影响，为其在临床防治纤维化有关疾病上提供了实验依据。目前，国内、外公认的体外筛选模型为鼠来源的成纤维细胞株，即NIH/3T3细胞。方法：体外培养NIH/3T3细胞株，加入1.0000，0.5000，0.2500，0.1250，0.0625，0.0313mg/l浓度的斑蝥素，24小时后观察细胞形态学，以乳酸脱氢酶为指标观察细胞毒性，用MTT法检测其增殖活性。
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结果显示：1.斑蝥素对NIH/3T3细胞的毒性作用：加入斑蝥素作用24小时后培养上清液中乳酸脱氢酶值为30.6±0.74与对照组乳酸脱氢酶23.2±0.54无明显差异，说明药物含量在1mg/l和1mg/l以下无细胞毒作用。2.斑蝥素对NIH/3T3细胞形态学的影响：NIH/3T3细胞在用药前伸展良好，折光性较弱，有方向性、呈放射状；而加斑蝥素24小时后，成纤维细胞数目减少，形状变的不规则，突起变短，细胞排列混乱，细胞内代谢产物增多。3.斑蝥素对NIH/3T3细胞增殖的影响：MTT比色结果显示，斑蝥素对NIH/3T3细胞生长增殖呈剂量依赖性抑制，细胞增殖减慢。
高振梅、万鲲等指出：纤维化有关疾病是脏器损伤后常见的并发症。现代细胞生物学和分子生物学的研究认为，成纤维细胞的大量增殖与凋亡抑制，细胞外基质中胶原合成与降解失衡，部分细胞因子的大量产生构成了纤维化有关疾病的生物学基础。纤维化有关疾病的病因及发病机理目前尚不完全清楚，因此寻找和研制理想的纤维化有关疾病治疗药物有待于进一步的努力。成纤维细胞的增殖是通过细胞有丝分裂实现的，每个细胞周期可分为分裂期(M期)和间期(包括G1，S，G2期)，暂时不进行分裂增殖的细胞称为G0期细胞。成纤维细胞的增殖受多种环境因素的影响，其中最重要的已知因素为生长因子。生长因子调控细胞分裂增殖与G0和G1期有关。有实验提示：在G1期中间存在一个细胞分裂的限制点，G1期细胞停留在限制点内则处于休止状态，一旦越过限制点就进入增殖状态。而许多生长因子包括血小板源性生长因子、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、转化生长因子及胰岛素样生长因子都可促使G0和G1期细胞跨越限制点，开始分裂增殖。这种作用通常分为两类：血小板源性生长因子、成纤维细胞生长因子等推动G0和G1期细胞进入分裂前的感受态，所以称感受因子，而表皮生长因子、转化生长因子-α、胰岛素样生长因子等促使感受细胞进一步发展向S期过度，所以称作增进因子。感受因子和增进因子共同作用的结果就是推动细胞通过限制点进入S期，进而完成整个细胞周期。斑蝥素究竟作用于细胞分裂增殖的哪一期以及抑制哪种生长因子还需进一步实验证明。斑蝥素在临床上用于多种癌症的治疗，从本实验结果来看斑蝥素浓度在0.25mg/l时，抑制率最大为67%，效果显著，有望应用于肺纤维化、肝纤维化、皮肤纤维化等疾病的治疗上，其作用机理还有待于进一步研究。, 百拇医药
如何通过科学膳食预防和治疗高血压是人们一直关心的问题。紫苏油是通过从唇形科植物紫苏的干燥成熟果实中冷榨所得的一种富含α-亚麻酸的脂肪油。它有多方面的药理作用，如镇咳、平喘、抗过敏、降脂、促智、预防和治疗血栓性疾病等，但它对血压的影响及其作用的机制是目前尚未深入开展的课题。《中国临床康复》2004年第3期报道了大连大学医学院生理教研室嵇志红、大连大学生物工程学院王钦富和大连大学医学院吕园园等对植物提取剂紫苏油对大鼠血压及心率影响的研究成果。该研究以SD大鼠为实验动物，旨在观察紫苏油对血压的影响，为紫苏油的应用开发提供合理的实验依据。方法：选用健康Sprague-Dawley纯种大鼠60只(购于大连医科大学实验动物中心)，体质量160～180g，雌雄各半，按随机抽签法分成6组(各组雌雄各5只)：对照组、模型组、牛黄降压丸(Niuhuangjiangya
pill，NH)组、紫苏油高剂量(higher Perilla-oil，POH)组、紫苏油中剂量(middle
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Perilla-oil，POM)组、紫苏油低剂量(lower Perilla-oil，POL)组。牛黄降压丸购于天津达仁堂药房，批号为011111；紫苏油醇提物由生物工程学院植化室提供。仪器为中日友好临床医学研究所研制的RBP-1B型大鼠尾压测量仪。
方法：从第1天起，除对照组饮自来水外，其余各组每天均饮20g/l盐水，连续饮15天，复制高盐性高血压大鼠动物模型。在每天饮20g/l盐水的同时，NH组给牛黄降压丸0.12g/kg；POH组、POM组、POL组分别给紫苏油9.00，4.50，2.25g/kg；对照组和模型组每天均给生理盐水10ml/kg，各组均灌胃给药。连续给药15天后，测量各组大鼠的尾动脉收缩压和心率。实验过程中各组均自由饮食饮水，温度(20±3)℃条件下饲养。统计学处理：采用SPSS10.0软件对实验结果进行统计学分析；数据以±s表示；对照与模型组，对照组与NH组间比较采用t检验；POH组、POM组、POL组与对照组和模型组组间差异比较采用F检验。
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结果显示：各组大鼠的血压和心率高盐摄入7天后血压即明显上升，15天后，模型组的尾动脉收缩压显著高于对照组(t=-3.516，P=0.006)，但心率与对照组差异无显著性意义。NH组大鼠的尾动脉收缩压、心率与对照组比较，差异均无显著性意义。紫苏油剂量组与NH组比较，差异有显著性意义(F=5.23，P=0.008)，显示剂量组与NH组有差异。采用Dunnett
t法进一步比较，结果POH组、POM组、POL组的P值分别为0.799、0.506、0.004，POH组、POM组与对照组比较，差异无显著性意义。剂量组与模型组比较，F检验结果显示POH组、POM组、POL组的P值分别为0.007、0.018、0.834，POH组、POM组尾动脉收缩压显著低于模型组。POH组、POM组、POL组3组的心率与对照组比较，差异无显著性意义。
结果表明高、中剂量紫苏油组的尾动脉收缩压显著低于模型组，提示较高剂量的紫苏油有明显的抵抗血压升高的作用，这为紫苏油的应用开发提供了合理的实验依据。
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抗呆I号可恢复脑缺血再灌注损伤细胞功能
抗呆I号是以天麻和钩藤(主要成分为天麻素和钩藤碱)为主的中药制剂，《中国临床康复》2004年第1期报道了北京中医药大学基础医学院形态系宋岳涛、唐一鹏等有关抗呆I号对体外模拟脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞的影响的研究。他们在大鼠大脑皮质星形胶质细胞分离纯化培养的基础上，制作体外模拟脑缺血再灌注损伤模型，观察星形胶质细胞活性及存活率的变化、培养液蛋白质含量的变化和抗呆I号的影响，目的是揭示星形胶质细胞在体外模拟脑缺血再灌注损伤中胞内与胞外的一些变化规律和中药抗呆I号可能的作用途径。
方法：先对分离纯化培养的星形胶质细胞进行体外模拟脑缺血再灌注损伤模型的建立，然后采用MTT法对星形胶质细胞的活性和存活率进行测定以及用Bradform法对星形胶质细胞条件培养液中蛋白质含量进行测定。
结果显示：体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞在体外模拟脑缺血再灌注损伤中的活性、存活率、无血清条件培养液蛋白含量的变化具有一定的规律性，可分细胞损伤期、功能代偿期、功能低下期和功能恢复期。抗呆Ⅰ号可使受损的星形胶质细胞的活性明显增强(与模型组相比多数时间点比较t=2.074，P<0.05)，存活率显著提高(与模型组相比多数时间点P<0.05，t>2.219)，使其条件培养液中的蛋白含量迅速增高(与模型组相比多数时间点t>5.087，P<0.001)。
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宋岳涛、唐一鹏等指出：实验结果提示，中药抗呆I号对正常培养的星形胶质细胞只产生轻微的影响，各项测定指标正常组和正常用药组相比均无统计学差异；而它对缺血再灌注损伤的星形胶质细胞则产生显著影响，模型组和模型用药组相比有统计学意义，故在此只分N、M和My来分析。星形胶质细胞在脑缺血再灌注损伤中的变化可分以下4期：1.细胞损伤期：从缺血开始至再灌注3小时末。此期因换液两次，加之细胞功能受损，培养液中的蛋白含量很低。中药抗呆I号加入培养液中，它会促进细胞的分泌功能，减少蛋白质的漏出，未用药的损伤细胞因胞膜破坏胞内蛋白漏出较多，所以此期3组细胞的活性和存活率表现为：N>My>M，而培养液中蛋白含量则是：N>M>My。2.功能代偿期：从再灌注3小时末至再灌注18小时末。此期细胞因受外来因素的刺激在一定程度上表现为细胞活性、增生能力和分泌功能代偿性的增强，胞内细胞活性和存活率为：N>My>M，胞外蛋白含量为：N>My>M，但从增强的幅度来看M组均较小。3.功能低下期：从再灌注18小时末至再灌注36小时末。此期细胞活性和胞外蛋白含量均为：N>My>M，都表现为下降趋势。从培养液蛋白含量的变化来看，N下降幅度较小，而My和M下降幅度较大。4.功能恢复期：从再灌注36小时末至再灌注96小时末。培养的细胞受到一定的损伤刺激后，会激发内源性的保护机制使星形胶质细胞的分泌功能增强，从而达到维持内环境稳定的目的。此期N和My两组细胞的活性和存活率以及细胞培养液蛋白含量逐渐趋于一致，而M组仍处于较低水平，说明抗呆I号具有使受损细胞功能尽快恢复正常的作用。
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结论：抗呆I号具有间接保护和修复受损神经元的作用，其途径为：脑缺血再灌注损伤→星形胶质细胞受刺激或受损→抗呆I号使星形胶质细胞的损伤减轻或使其分泌功能增强→细胞外液中神经营养因子等增多→保护和修复受损的神经元。
斑蝥素有望用于治疗器官组织纤维化
纤维化有关疾病是许多疾病脏器损伤的结果，如肝纤维化、肺纤维化、真皮纤维化等，它的防治尚无有效方法。《中国临床康复》2004年第2期报道了解放军307医院药剂科高振梅、解放军304医院万鲲等通过实验观察了斑蝥素对NIH/3T3细胞形态和增殖的影响，为其在临床防治纤维化有关疾病上提供了实验依据。目前，国内、外公认的体外筛选模型为鼠来源的成纤维细胞株，即NIH/3T3细胞。方法：体外培养NIH/3T3细胞株，加入1.0000，0.5000，0.2500，0.1250，0.0625，0.0313mg/l浓度的斑蝥素，24小时后观察细胞形态学，以乳酸脱氢酶为指标观察细胞毒性，用MTT法检测其增殖活性。
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结果显示：1.斑蝥素对NIH/3T3细胞的毒性作用：加入斑蝥素作用24小时后培养上清液中乳酸脱氢酶值为30.6±0.74与对照组乳酸脱氢酶23.2±0.54无明显差异，说明药物含量在1mg/l和1mg/l以下无细胞毒作用。2.斑蝥素对NIH/3T3细胞形态学的影响：NIH/3T3细胞在用药前伸展良好，折光性较弱，有方向性、呈放射状；而加斑蝥素24小时后，成纤维细胞数目减少，形状变的不规则，突起变短，细胞排列混乱，细胞内代谢产物增多。3.斑蝥素对NIH/3T3细胞增殖的影响：MTT比色结果显示，斑蝥素对NIH/3T3细胞生长增殖呈剂量依赖性抑制，细胞增殖减慢。
高振梅、万鲲等指出：纤维化有关疾病是脏器损伤后常见的并发症。现代细胞生物学和分子生物学的研究认为，成纤维细胞的大量增殖与凋亡抑制，细胞外基质中胶原合成与降解失衡，部分细胞因子的大量产生构成了纤维化有关疾病的生物学基础。纤维化有关疾病的病因及发病机理目前尚不完全清楚，因此寻找和研制理想的纤维化有关疾病治疗药物有待于进一步的努力。成纤维细胞的增殖是通过细胞有丝分裂实现的，每个细胞周期可分为分裂期(M期)和间期(包括G1，S，G2期)，暂时不进行分裂增殖的细胞称为G0期细胞。成纤维细胞的增殖受多种环境因素的影响，其中最重要的已知因素为生长因子。生长因子调控细胞分裂增殖与G0和G1期有关。有实验提示：在G1期中间存在一个细胞分裂的限制点，G1期细胞停留在限制点内则处于休止状态，一旦越过限制点就进入增殖状态。而许多生长因子包括血小板源性生长因子、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、转化生长因子及胰岛素样生长因子都可促使G0和G1期细胞跨越限制点，开始分裂增殖。这种作用通常分为两类：血小板源性生长因子、成纤维细胞生长因子等推动G0和G1期细胞进入分裂前的感受态，所以称感受因子，而表皮生长因子、转化生长因子-α、胰岛素样生长因子等促使感受细胞进一步发展向S期过度，所以称作增进因子。感受因子和增进因子共同作用的结果就是推动细胞通过限制点进入S期，进而完成整个细胞周期。斑蝥素究竟作用于细胞分裂增殖的哪一期以及抑制哪种生长因子还需进一步实验证明。斑蝥素在临床上用于多种癌症的治疗，从本实验结果来看斑蝥素浓度在0.25mg/l时，抑制率最大为67%，效果显著，有望应用于肺纤维化、肝纤维化、皮肤纤维化等疾病的治疗上，其作用机理还有待于进一步研究。, 百拇医药