应用自体骨髓肝内移植治疗肝硬化的实验研究
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-6115(2004)03-0215-01
近几年的研究发现，在骨髓干细胞群中存在肝干细胞 [1] 。该干细胞具有与胚胎性肝干细胞相似的生物学功能，可以在肝内定居和分化形成肝细胞，参与肝损伤后的修复与再生[2] 。受此启发，我们探讨了应用自体骨髓肝内移植治疗肝硬化的可行性，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 实验动物 清洁级成年雄性SD大鼠40只，体重250～300g，购买和饲养于南方医院实验动物研究中心。
1.2 主要药物(试剂) 60%四氯化碳橄榄油溶液，新赛斯平(杭州中美华东制药公司产)，肝复肽(吉林省药物研究所产)。
1.3 肝硬化模型制作 大鼠皮下注射60%四氯化碳橄榄油溶液，每4天1次，每次0.3ml/100g，持续10周。与此同时，用混以0.5%胆固醇的单纯玉米面为饲料、用5%酒精代水喂养大鼠。10周后随机活杀5只大鼠检查，证实已发生肝硬化。至此，大鼠四氯化碳中毒性肝硬化模型制作完成。
, 百拇医药
1.4 实验分组 20只肝硬化大鼠随机分为3组:(1)对照组:6只大鼠，乙醚吸入法麻醉，剖腹找出脾静脉，经脾静脉注入生理盐水3ml，然后缝合腹壁和关闭腹腔。大鼠术后给予正常饮食(停喂5%酒精，改喂水)，饲料中掺入抗生素阿莫西林5mg/(只·天)。(2)用药组:7只大鼠，处理同对照组，另加每日肌注肝复肽0.04ml/100g，疗程30天。(3)移植组:7只大鼠，处理同用药组，但经脾静脉注入的不是生理盐水，而是经处理后的等体积骨髓。此外，移植前1天和移植后每日给大鼠灌食新赛斯平5mg/100g，疗程30天。
1.5 骨髓肝内移植 供体为7只雌性成年SD大鼠，体重250g～300g，骨髓从大鼠股骨和胸骨中抽取。受体为移植组7只肝硬化大鼠，采用经脾静脉注入供体骨髓的方法实现骨髓的肝内移植。
1.6 移植后观察 每日观察大鼠变化情况，30天后剖杀检查。
2 结果
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2.1 体重变化 3个组的术后体重变化趋势相似，组间无显著性差异，术后体重逐渐下降，至术后10～15天达到低点，减轻11.0%±3.8%，此后体重逐渐恢复，至术后25～30 天达到术前水平。
2.2 血液生化指标 术后30天，用药组和移植组的血清白蛋白水平虽然高于对照组，但差异无统计学意义。3个组在术后第30天的血清总胆红素、球蛋白、丙氨酸转氨酶差异也没有显著性。
2.3 病理变化 对照组、用药组和移植组的肝脏大体病理学变化相似，肝脏色泽暗红，表面呈结节状，外观犹如菠萝，体积缩小，质地变硬，肝切面满布类圆结节，结节大小与表面结节相近，结节周围被灰白色纤维组织环绕分隔。3个组的肝脏组织病理学变化也相似，呈现典型的肝硬变。但是，无论是大体病理变化，或者是组织病理变化，组间差异都无显著性。
3 讨论
最近几年的临床观察和实验研究均已证实在骨髓干细胞群中存在肝干细胞亚群，并且证实这种肝干细胞可以在肝内定居和发挥潜能 [1，2] 。因而从理论上讲，通过全骨髓细胞移植应该可以达到移植骨髓干细胞群中肝干细胞的目的，但通过这种方法移植的肝干细胞数量能否达到治疗肝病的要求尚待探讨。
, 百拇医药
本试验中三组大鼠的肝功能变化和肝组织病理学变化差异均无显著性，其可能的原因有:(1)观察的时间不够，仅30天，肝干细胞移植改善肝硬化结构和功能的效果尚未体现出来;(2)通过全骨髓移植这种方法移植的肝干细胞数量不够，达不到改善肝硬化结构和功能的要求;(3)新赛斯平的肝脏毒性作用抵消了肝干细胞移植的肝脏改善作用。(4)肝干细胞移植对肝硬化结构和功能的确没有改善作用。由此可见，利用全骨髓细胞移植治疗肝硬化未必完全无效，但其可行性受较多因素制约。在未来，我们可以借助体外扩增技术，先行肝干细胞体外扩增，然后行肝干细胞移植，这样就能够保证肝干细胞移植数量足够，就能够对利用肝干细胞移植治疗肝病的可行性做到正确评价。
参考文献
1 廖彩仙.骨髓细胞中的肝干细胞.肝胆外科杂志，2002，10(6):480.
2 Avital I，Feraresso C，Aoki T，et al.Bone marrow-derived liver stem cell and mature hepatocyte engraftment in livers undergoing rejection.Surgery，2002，132(2):384-390.
作者单位:510515广州第一军医大学南方医院肝胆血管外科
(收稿日期:2003-11-23)
(编辑李年令), 百拇医药
近几年的研究发现，在骨髓干细胞群中存在肝干细胞 [1] 。该干细胞具有与胚胎性肝干细胞相似的生物学功能，可以在肝内定居和分化形成肝细胞，参与肝损伤后的修复与再生[2] 。受此启发，我们探讨了应用自体骨髓肝内移植治疗肝硬化的可行性，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 实验动物 清洁级成年雄性SD大鼠40只，体重250～300g，购买和饲养于南方医院实验动物研究中心。
1.2 主要药物(试剂) 60%四氯化碳橄榄油溶液，新赛斯平(杭州中美华东制药公司产)，肝复肽(吉林省药物研究所产)。
1.3 肝硬化模型制作 大鼠皮下注射60%四氯化碳橄榄油溶液，每4天1次，每次0.3ml/100g，持续10周。与此同时，用混以0.5%胆固醇的单纯玉米面为饲料、用5%酒精代水喂养大鼠。10周后随机活杀5只大鼠检查，证实已发生肝硬化。至此，大鼠四氯化碳中毒性肝硬化模型制作完成。
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1.4 实验分组 20只肝硬化大鼠随机分为3组:(1)对照组:6只大鼠，乙醚吸入法麻醉，剖腹找出脾静脉，经脾静脉注入生理盐水3ml，然后缝合腹壁和关闭腹腔。大鼠术后给予正常饮食(停喂5%酒精，改喂水)，饲料中掺入抗生素阿莫西林5mg/(只·天)。(2)用药组:7只大鼠，处理同对照组，另加每日肌注肝复肽0.04ml/100g，疗程30天。(3)移植组:7只大鼠，处理同用药组，但经脾静脉注入的不是生理盐水，而是经处理后的等体积骨髓。此外，移植前1天和移植后每日给大鼠灌食新赛斯平5mg/100g，疗程30天。
1.5 骨髓肝内移植 供体为7只雌性成年SD大鼠，体重250g～300g，骨髓从大鼠股骨和胸骨中抽取。受体为移植组7只肝硬化大鼠，采用经脾静脉注入供体骨髓的方法实现骨髓的肝内移植。
1.6 移植后观察 每日观察大鼠变化情况，30天后剖杀检查。
2 结果
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2.1 体重变化 3个组的术后体重变化趋势相似，组间无显著性差异，术后体重逐渐下降，至术后10～15天达到低点，减轻11.0%±3.8%，此后体重逐渐恢复，至术后25～30 天达到术前水平。
2.2 血液生化指标 术后30天，用药组和移植组的血清白蛋白水平虽然高于对照组，但差异无统计学意义。3个组在术后第30天的血清总胆红素、球蛋白、丙氨酸转氨酶差异也没有显著性。
2.3 病理变化 对照组、用药组和移植组的肝脏大体病理学变化相似，肝脏色泽暗红，表面呈结节状，外观犹如菠萝，体积缩小，质地变硬，肝切面满布类圆结节，结节大小与表面结节相近，结节周围被灰白色纤维组织环绕分隔。3个组的肝脏组织病理学变化也相似，呈现典型的肝硬变。但是，无论是大体病理变化，或者是组织病理变化，组间差异都无显著性。
3 讨论
最近几年的临床观察和实验研究均已证实在骨髓干细胞群中存在肝干细胞亚群，并且证实这种肝干细胞可以在肝内定居和发挥潜能 [1，2] 。因而从理论上讲，通过全骨髓细胞移植应该可以达到移植骨髓干细胞群中肝干细胞的目的，但通过这种方法移植的肝干细胞数量能否达到治疗肝病的要求尚待探讨。
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本试验中三组大鼠的肝功能变化和肝组织病理学变化差异均无显著性，其可能的原因有:(1)观察的时间不够，仅30天，肝干细胞移植改善肝硬化结构和功能的效果尚未体现出来;(2)通过全骨髓移植这种方法移植的肝干细胞数量不够，达不到改善肝硬化结构和功能的要求;(3)新赛斯平的肝脏毒性作用抵消了肝干细胞移植的肝脏改善作用。(4)肝干细胞移植对肝硬化结构和功能的确没有改善作用。由此可见，利用全骨髓细胞移植治疗肝硬化未必完全无效，但其可行性受较多因素制约。在未来，我们可以借助体外扩增技术，先行肝干细胞体外扩增，然后行肝干细胞移植，这样就能够保证肝干细胞移植数量足够，就能够对利用肝干细胞移植治疗肝病的可行性做到正确评价。
参考文献
1 廖彩仙.骨髓细胞中的肝干细胞.肝胆外科杂志，2002，10(6):480.
2 Avital I，Feraresso C，Aoki T，et al.Bone marrow-derived liver stem cell and mature hepatocyte engraftment in livers undergoing rejection.Surgery，2002，132(2):384-390.
作者单位:510515广州第一军医大学南方医院肝胆血管外科
(收稿日期:2003-11-23)
(编辑李年令), 百拇医药