斑点免疫渗滤技术ICS金标法快速测试试剂盒使用评估分析
【摘要】 目的 探讨斑点免疫渗滤技术(dot immunofiltration assay，DIFA)在临床上推广应用的可行性。方法 用华美和ORTHO ELISA试剂盒及快速测试试剂盒分别检测卫生部抗-HCV血清盘和本中心的无偿献血样本。结果 试剂盒对血清盘测试的结果特异性和符合率达90%以上;灵敏度、特异性和符合率同华美试剂完全一致，灵敏度略低于ORTHO试剂。结论该试剂同ELISA国产和进口试剂盒相比均具有较高的灵敏度、特异性和符合率，可以在临床上推广应用。
关键词 斑点免疫渗滤技术 金标法 丙肝
【文献标识码】 B 【文章编号】 1684-2030(2004)02-0158-02
斑点免疫渗滤技术(Dot immunofiltration assay，DIFA)是以微孔膜为载体，利用其过滤功能，使所有反应液均自微孔膜上滤过，迅速完成免疫反应及检测。根据标记物不同分为斑点免疫酶渗滤法(dot immunoenzyme filtration assay，DIEFA)和斑点金免疫渗滤法(Dot immunogoldfiltration assay，DIGFA)。由于胶体金制备简单稳定，无需着色，且能与多种蛋白结合，因而DIGFA技术发展迅速。该试剂选用纯化HCV多种基因工程抗原的混合物作为包被抗原，采用间接二抗法测定原理，结合金标技术检测，具有较高的先进性。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料 ICS金标法丙肝快速测试剂盒(IND集团)，丙肝病毒酶联免疫测试试剂盒(华美公司)，RIBA HCV3.0SIA试剂(CHIKON公司)。卫生部抗-HCV血清盘。FAME和BEPⅢ全自动酶免分析仪。CHIRON全自动RIBA确认分析仪。无偿血肝素抗凝血样。
1.2 评价步骤和方法
1.2.1 血清盘取样 用卫生部抗-HCV血清盘中阳性样随机抽取15份作为阳性样，用经华美和ORTHO ELISA试剂盒筛选后阴性样随机抽取作为阴性标本，组成一个客观评价体系进行评估。
1.2.2 应用评估取样 取用经华美和ORTHO ELISA试剂盒筛选后无偿献血阳性血样作为阳性标本，阴性样随机抽取作为阴性标本，组成应用评价体系。
1.2.3 检出限实验 用临界血清(2ng/L)取样15μl、30μl、45μl进行检测，相当浓度为1ng/L，2ng/L，3ng/L。
, 百拇医药
1.2.4 干扰实验 (1)血清盘含有相关病种样本和已知具有干扰物质样本;(2)随机抽取无偿献血样本中ALT不正常、梅毒阳性、乙肝阳性等样本进行实验;(3)抗凝血的影响。
1.2.5 结果测定 按试剂盒的操作方法进行测定和判读，对结果不同的样本进行复查。ORTHO和华美ELISA试剂检测结果以FAME和BEPⅢ全自动酶免疫分析仪检测结果为准。
2 评价结果
2.1 检出限结果 当临界血清浓度为1ng/L不能检出;2ng/L检测结果为可疑阳性;3ng/L检测结果为弱阳性。由此可推测该试剂盒检出限为2～3ng/L，同报道结果一致。
2.2 干扰实验结果 血清盘实验除一极弱阳性样本未检出外，未发现其他非特异反应。无偿献血阴性样本未发现 假阳性反应。抗凝血对检测无干扰，但降低检测的灵敏度和延长检测时间(全过程需约10min)。弱阳性样本使用抗凝血未检出而血清可以检出共2份，占总数18%。表明使用抗凝血检测会导致弱阳性漏检。
, http://www.100md.com
2.3 血清盘和应用评估结果 见表1。
表1 ICS金标法快速测试试剂盒使用评价结果比较标准
由表1可知，血清盘测试结果特异性和符合率达90%以上，符合国家要求。该试剂盒灵敏度、特异性和符合率同华美试剂完全一致，表明该试剂盒质量接近国产酶免疫试剂盒质量，该试剂可以在临床上使用。由于ORTHO试剂灵敏度很高(可以检出0.5ng/L)，在2ng/L以下，本试剂盒使用的方法不能检出，故符合率相对较国产试剂低。在实际检测中，有2例ELISA弱阳性样本，本法测出阴性。经用RIBA确认1例为阴性，1例为可凝[C100、C33c、C22、NS5、hSOD5条带中检出NS5带(++)]。
3 讨论
该试剂盒操作简单迅速，无需特殊仪器，裸眼可观结果。检测过程设内对照，能有效保证检测质量。该试剂同ELISA国产和进口试剂盒相比均具有较高的灵敏度、特异性和符合率，可以在临床上推广应用。该试剂对环境无特殊要求，故尤适合实验室外的野地、现场和家庭等进行检 测。由于使用抗凝血会导致检测灵敏度下降和检测时间延长等，应尽可能使用血清，同时考虑适当增加样本血清用量，提高检出率。
, http://www.100md.com
本评价过程使用了卫生部临检中心血清盘，具有较高的客观性。共计从3023人份的无偿献血的样本中进行抽样，具有一定的现实意义。由于该试剂盒方法干扰因素较多，在临床上可以进一步做抗干扰实验如RF、补体、体内的酶、抗凝剂和抑制剂等。
参考文献
1 张晓春，陆燕蓉.斑点技术研究进展.中国卫生杂志，2000，10(2):247-248.
2 王沛.斑点酶免疫法的技术关键.陕西医学检验，2000，15(2):61-62.
作者单位:518034广东省深圳市血液中心
广东省深圳市罗湖医院检验科
(收稿日期:2003-12-13)
(编辑亦 平), http://www.100md.com(聂冬梅)
关键词 斑点免疫渗滤技术 金标法 丙肝
【文献标识码】 B 【文章编号】 1684-2030(2004)02-0158-02
斑点免疫渗滤技术(Dot immunofiltration assay，DIFA)是以微孔膜为载体，利用其过滤功能，使所有反应液均自微孔膜上滤过，迅速完成免疫反应及检测。根据标记物不同分为斑点免疫酶渗滤法(dot immunoenzyme filtration assay，DIEFA)和斑点金免疫渗滤法(Dot immunogoldfiltration assay，DIGFA)。由于胶体金制备简单稳定，无需着色，且能与多种蛋白结合，因而DIGFA技术发展迅速。该试剂选用纯化HCV多种基因工程抗原的混合物作为包被抗原，采用间接二抗法测定原理，结合金标技术检测，具有较高的先进性。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料 ICS金标法丙肝快速测试剂盒(IND集团)，丙肝病毒酶联免疫测试试剂盒(华美公司)，RIBA HCV3.0SIA试剂(CHIKON公司)。卫生部抗-HCV血清盘。FAME和BEPⅢ全自动酶免分析仪。CHIRON全自动RIBA确认分析仪。无偿血肝素抗凝血样。
1.2 评价步骤和方法
1.2.1 血清盘取样 用卫生部抗-HCV血清盘中阳性样随机抽取15份作为阳性样，用经华美和ORTHO ELISA试剂盒筛选后阴性样随机抽取作为阴性标本，组成一个客观评价体系进行评估。
1.2.2 应用评估取样 取用经华美和ORTHO ELISA试剂盒筛选后无偿献血阳性血样作为阳性标本，阴性样随机抽取作为阴性标本，组成应用评价体系。
1.2.3 检出限实验 用临界血清(2ng/L)取样15μl、30μl、45μl进行检测，相当浓度为1ng/L，2ng/L，3ng/L。
, 百拇医药
1.2.4 干扰实验 (1)血清盘含有相关病种样本和已知具有干扰物质样本;(2)随机抽取无偿献血样本中ALT不正常、梅毒阳性、乙肝阳性等样本进行实验;(3)抗凝血的影响。
1.2.5 结果测定 按试剂盒的操作方法进行测定和判读，对结果不同的样本进行复查。ORTHO和华美ELISA试剂检测结果以FAME和BEPⅢ全自动酶免疫分析仪检测结果为准。
2 评价结果
2.1 检出限结果 当临界血清浓度为1ng/L不能检出;2ng/L检测结果为可疑阳性;3ng/L检测结果为弱阳性。由此可推测该试剂盒检出限为2～3ng/L，同报道结果一致。
2.2 干扰实验结果 血清盘实验除一极弱阳性样本未检出外，未发现其他非特异反应。无偿献血阴性样本未发现 假阳性反应。抗凝血对检测无干扰，但降低检测的灵敏度和延长检测时间(全过程需约10min)。弱阳性样本使用抗凝血未检出而血清可以检出共2份，占总数18%。表明使用抗凝血检测会导致弱阳性漏检。
, http://www.100md.com
2.3 血清盘和应用评估结果 见表1。
表1 ICS金标法快速测试试剂盒使用评价结果比较标准
由表1可知，血清盘测试结果特异性和符合率达90%以上，符合国家要求。该试剂盒灵敏度、特异性和符合率同华美试剂完全一致，表明该试剂盒质量接近国产酶免疫试剂盒质量，该试剂可以在临床上使用。由于ORTHO试剂灵敏度很高(可以检出0.5ng/L)，在2ng/L以下，本试剂盒使用的方法不能检出，故符合率相对较国产试剂低。在实际检测中，有2例ELISA弱阳性样本，本法测出阴性。经用RIBA确认1例为阴性，1例为可凝[C100、C33c、C22、NS5、hSOD5条带中检出NS5带(++)]。
3 讨论
该试剂盒操作简单迅速，无需特殊仪器，裸眼可观结果。检测过程设内对照，能有效保证检测质量。该试剂同ELISA国产和进口试剂盒相比均具有较高的灵敏度、特异性和符合率，可以在临床上推广应用。该试剂对环境无特殊要求，故尤适合实验室外的野地、现场和家庭等进行检 测。由于使用抗凝血会导致检测灵敏度下降和检测时间延长等，应尽可能使用血清，同时考虑适当增加样本血清用量，提高检出率。
, http://www.100md.com
本评价过程使用了卫生部临检中心血清盘，具有较高的客观性。共计从3023人份的无偿献血的样本中进行抽样，具有一定的现实意义。由于该试剂盒方法干扰因素较多，在临床上可以进一步做抗干扰实验如RF、补体、体内的酶、抗凝剂和抑制剂等。
参考文献
1 张晓春，陆燕蓉.斑点技术研究进展.中国卫生杂志，2000，10(2):247-248.
2 王沛.斑点酶免疫法的技术关键.陕西医学检验，2000，15(2):61-62.
作者单位:518034广东省深圳市血液中心
广东省深圳市罗湖医院检验科
(收稿日期:2003-12-13)
(编辑亦 平), http://www.100md.com(聂冬梅)