自制简易免疫组化笔的技术
【摘要】 目的 为解决免疫组化贴片法中免疫组化笔的问题，自制简易免疫组化笔。方法 将一次性筷子从中间折断，分成两根，削尖一端，把尖端用少许棉花裹紧，这样就制成了一只简易笔。用一小瓶倒入2ml树胶，将自制简易笔蘸少量树胶，围绕片子周围0.2cm处画圈，以不覆盖片子为宜。结果 自制简易免疫组化笔的防水率达98%，而美国进口免疫组化笔及国产笔其防水率只达到85%左右，增强了免疫组化阳性细胞的表达效果。结论 自制免疫组化笔完全可以代替任何国产、进口免疫组化笔，且价格低廉。关键词 简易笔 中性树胶 免疫组化
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)23-3143-02
Technique of self-made simple PAP pen
Zhan Heqin，Wang Tinghua，Zhao Xiujun，et al.
, http://www.100md.com
Department of Pharmacology of Kunming Medical College，Kunming650031
【Abstract】 Objective In order to solve the problem of PAP pen in the methods of sticking sample，we made the simple PAP pen of ourselves.Methods We broke a chopstick into two parts，which pointwas banded with cotton.Then the simple PAP pen was made.Afterwards，we put the pen into the neutral balsam.The pen with little neutral balsam was used to circle a ring in the simple-slice，and the ring wasabout 0.2cm away the brain of the sample.It is better not covering the sample-slice. Results The waterproof rate made by the simple PAP pen was compared98%，while the waterproof rate by other PAP pen was not above90%，so as to enhance the effect of immunohistochemistry.Conclusion This simple PAP pen is better enough to replace other PAP pen whether they are homemade or imported，and it is much cheaper.
, 百拇医药
Key words simple PAP pen neutral balsma immunohistochemistry
免疫组织化学技术是利用免疫学抗体与抗原结合的原理以及细胞化学技术对组织、细胞特定抗原或抗体进行定位定量研究的技术。它广泛应用于生物学、组织解剖学、病理学等[1]。做免疫组化不外乎两种方法:漂片法或贴片法[2]。然而，前者容易烂片，不适合做脑片等大而易碎的组织;后者方法较好，但为了保持良好的结果和节省抗体，常常需要免疫组化笔。免疫组化笔无论是国产还是进口，都有下油不利或下油过多、污染片子、隔水性差、圈片数量少等弊病，且价格昂贵。我们通过多次实验，摸索出一种自制的简易组化笔，其防水性好、价格低廉、可保证免疫组化效果。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验用品和器械 树胶2ml(中国医药集团上海化学试剂公司)、一次性筷子数根、卫生棉少许、手术刀片一个、30张贴有脑片的载玻片(每张载玻片2张脑片)、0.05M的PBS、BDNF抗体、0.3%Triton、ABC试剂盒、湿盒、DAB显色剂、恒温细胞培养箱、冰箱、普通显微镜等。
, http://www.100md.com
1.1.2 实验分组 实验分三组:甲组用美国进口免疫组化笔画圈;乙组用国产一般免疫组化笔(北京中杉公司生产)画圈;丙组用自制简易组化笔画圈。每组15张载玻片(30张脑片)。
1.2 方法
1.2.1 免疫组化笔的制作方法 将一次性筷子从中间折短，分成两根，削尖一端，把尖端用少许棉花裹紧，这样就制成了一只简易笔。
1.2.2 代替免疫组化笔的方法 用一小瓶倒入2ml树胶，将自制简易笔蘸少量树胶，围绕片子周围0.2cm处画圈，不能覆盖片子。
1.2.3 免疫组化ABC法[3](1)0.05M PBS漂洗5min×3次;(2)3%H2O2/0.05M PBS漂洗，室温30min;(3)0.05M PBS漂洗5min×3次;(4)5%羊血清37℃30min;(5)免疫抗体BDNF(1:500)4℃过夜;(6)0.05M PBS漂洗5min×3次;(7)Ⅱ抗37℃1.5h;(8)0.05MPBS漂洗5min×3次;(9)AB复合物37℃1.5h;(10)0.05m PBS漂洗5min×3次;(11)DAB显色5～10min;(12)三蒸水漂洗5min×3次;(13)梯度酒精脱水，二甲苯通透，树胶封片，镜下观察。
, 百拇医药
1.2.4 结果观察及统计学处理 观察整个实验过程中用自制简易组化笔画圈的防水性效果;镜下观察BDNF免疫阳性反应物的表达情况，将所得数据进行统计学处理、分析。
2 结果
2.1 三种免疫组化笔防水率的比较 美国产免疫组化笔的防水率为90%;国产免疫组化笔的防水率为80%;而自制免疫组化笔的防水率可达98%。
2.2 三种免疫组化笔对BDNF免疫阳性结果的影响 镜下大体观察发现:用自制免疫组化笔画圈的切片阳性结果良好，而用美国产免疫组化笔画圈的切片虽有阳性结果，但片子周围有污染现象。
3 讨论
我们在多次免疫组化实验中发现:市售的各种免疫组化笔下油不利，甚至根本画不出来，有的下油很多且污染片子，是影响免疫组化结果的因素之一，而且价格昂贵，一杆进口笔价格大约在400元左右，画圈不超过120个即报废。为此，我们通过多方探索找到了理想的替代品:中性树胶。树胶是一种天然树脂，广泛应用于生物学、医学，作为生物切片的封藏剂，它可溶于二甲苯、苯、甲苯、二氧氯环等，不溶于水[4]。故此，我们应用其特性制作了简易免疫组化笔，在实验中不但节约了大量的资金，而且方便耐用，3ml 树胶可画300个圈左右，代价大约只有2元钱。最重要的是它不影响免疫组化结果，由于防水性能好，保证了抗原抗体的充分结合，增强了免疫组化的效果，故可推荐使用。
, 百拇医药
参考文献
1 翟为溶，张锦生.现代组织化学的原理及应用.上海:上海科学技术文献出版社，1998，1- 2.
2 朱长庚.神经解剖学.第四版.北京:人民卫生出版社，2002，87.
3 曾兢，王廷华，张晓，等.脑缺血后大脑皮质神经生长因子和脑源性神经营养因子的改变. 华西医科大 学学报，2001，32(2):216.
4 杜卓民.实用组织学技术.北京:人民卫生出版社，1982，63.
基金项目:云南省自然科学基金资助项目(No:2002C005M)
作者单位:650031昆明医学院药理教研室(神经生物所)
(编辑 运 河), 百拇医药(詹合琴)
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)23-3143-02
Technique of self-made simple PAP pen
Zhan Heqin，Wang Tinghua，Zhao Xiujun，et al.
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Department of Pharmacology of Kunming Medical College，Kunming650031
【Abstract】 Objective In order to solve the problem of PAP pen in the methods of sticking sample，we made the simple PAP pen of ourselves.Methods We broke a chopstick into two parts，which pointwas banded with cotton.Then the simple PAP pen was made.Afterwards，we put the pen into the neutral balsam.The pen with little neutral balsam was used to circle a ring in the simple-slice，and the ring wasabout 0.2cm away the brain of the sample.It is better not covering the sample-slice. Results The waterproof rate made by the simple PAP pen was compared98%，while the waterproof rate by other PAP pen was not above90%，so as to enhance the effect of immunohistochemistry.Conclusion This simple PAP pen is better enough to replace other PAP pen whether they are homemade or imported，and it is much cheaper.
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Key words simple PAP pen neutral balsma immunohistochemistry
免疫组织化学技术是利用免疫学抗体与抗原结合的原理以及细胞化学技术对组织、细胞特定抗原或抗体进行定位定量研究的技术。它广泛应用于生物学、组织解剖学、病理学等[1]。做免疫组化不外乎两种方法:漂片法或贴片法[2]。然而，前者容易烂片，不适合做脑片等大而易碎的组织;后者方法较好，但为了保持良好的结果和节省抗体，常常需要免疫组化笔。免疫组化笔无论是国产还是进口，都有下油不利或下油过多、污染片子、隔水性差、圈片数量少等弊病，且价格昂贵。我们通过多次实验，摸索出一种自制的简易组化笔，其防水性好、价格低廉、可保证免疫组化效果。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验用品和器械 树胶2ml(中国医药集团上海化学试剂公司)、一次性筷子数根、卫生棉少许、手术刀片一个、30张贴有脑片的载玻片(每张载玻片2张脑片)、0.05M的PBS、BDNF抗体、0.3%Triton、ABC试剂盒、湿盒、DAB显色剂、恒温细胞培养箱、冰箱、普通显微镜等。
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1.1.2 实验分组 实验分三组:甲组用美国进口免疫组化笔画圈;乙组用国产一般免疫组化笔(北京中杉公司生产)画圈;丙组用自制简易组化笔画圈。每组15张载玻片(30张脑片)。
1.2 方法
1.2.1 免疫组化笔的制作方法 将一次性筷子从中间折短，分成两根，削尖一端，把尖端用少许棉花裹紧，这样就制成了一只简易笔。
1.2.2 代替免疫组化笔的方法 用一小瓶倒入2ml树胶，将自制简易笔蘸少量树胶，围绕片子周围0.2cm处画圈，不能覆盖片子。
1.2.3 免疫组化ABC法[3](1)0.05M PBS漂洗5min×3次;(2)3%H2O2/0.05M PBS漂洗，室温30min;(3)0.05M PBS漂洗5min×3次;(4)5%羊血清37℃30min;(5)免疫抗体BDNF(1:500)4℃过夜;(6)0.05M PBS漂洗5min×3次;(7)Ⅱ抗37℃1.5h;(8)0.05MPBS漂洗5min×3次;(9)AB复合物37℃1.5h;(10)0.05m PBS漂洗5min×3次;(11)DAB显色5～10min;(12)三蒸水漂洗5min×3次;(13)梯度酒精脱水，二甲苯通透，树胶封片，镜下观察。
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1.2.4 结果观察及统计学处理 观察整个实验过程中用自制简易组化笔画圈的防水性效果;镜下观察BDNF免疫阳性反应物的表达情况，将所得数据进行统计学处理、分析。
2 结果
2.1 三种免疫组化笔防水率的比较 美国产免疫组化笔的防水率为90%;国产免疫组化笔的防水率为80%;而自制免疫组化笔的防水率可达98%。
2.2 三种免疫组化笔对BDNF免疫阳性结果的影响 镜下大体观察发现:用自制免疫组化笔画圈的切片阳性结果良好，而用美国产免疫组化笔画圈的切片虽有阳性结果，但片子周围有污染现象。
3 讨论
我们在多次免疫组化实验中发现:市售的各种免疫组化笔下油不利，甚至根本画不出来，有的下油很多且污染片子，是影响免疫组化结果的因素之一，而且价格昂贵，一杆进口笔价格大约在400元左右，画圈不超过120个即报废。为此，我们通过多方探索找到了理想的替代品:中性树胶。树胶是一种天然树脂，广泛应用于生物学、医学，作为生物切片的封藏剂，它可溶于二甲苯、苯、甲苯、二氧氯环等，不溶于水[4]。故此，我们应用其特性制作了简易免疫组化笔，在实验中不但节约了大量的资金，而且方便耐用，3ml 树胶可画300个圈左右，代价大约只有2元钱。最重要的是它不影响免疫组化结果，由于防水性能好，保证了抗原抗体的充分结合，增强了免疫组化的效果，故可推荐使用。
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参考文献
1 翟为溶，张锦生.现代组织化学的原理及应用.上海:上海科学技术文献出版社，1998，1- 2.
2 朱长庚.神经解剖学.第四版.北京:人民卫生出版社，2002，87.
3 曾兢，王廷华，张晓，等.脑缺血后大脑皮质神经生长因子和脑源性神经营养因子的改变. 华西医科大 学学报，2001，32(2):216.
4 杜卓民.实用组织学技术.北京:人民卫生出版社，1982，63.
基金项目:云南省自然科学基金资助项目(No:2002C005M)
作者单位:650031昆明医学院药理教研室(神经生物所)
(编辑 运 河), 百拇医药(詹合琴)