一种简易的外周血提取DNA的方法
【文献标识码】 【文章编号】 1609-6614(2004)01-0011-01
从外周血中提取DNA，进行核酸水平的研究是临床分子生物学重要的研究手段 [1～3] 。在肿瘤学研究中，可以利用外周血作对照检测肿瘤组织DNA差异，开展PCR，甲基化，基因突变等多项指标的检测。然而，传统的外周血DNA的分离方法较复杂，我们进行了一些改进，具体方法如下。
1 淋巴细胞的分离
(1)取抗凝血5ml，1000～1200r/min离心10min。(2)吸取上层血浆转至新的小管子中，-70℃保存。(3)以等体积的PBS稀释血细胞后加入至4ml淋巴细胞分离液中。(4)室温条件下离心1000～1200r/min25min，吸取中间层白细胞转移到干净离心管中。(5)加入10ml PBS，混匀，离心，1000～1200r/min，共10min，弃掉上清。重复2次。(6)用1.5ml PBS悬浮白细胞，在4℃条件下，5000rpm10min，放弃上清，沉淀-70℃保存。
2 DNA的常规提取白细胞用15ml DNA抽提液悬浮，37℃保温1h，然后按照常规的DNA提取的方法进行提取。这种DNA的提取方法分淋巴细胞的分离和DNA提取两个步骤。相对而言，耗时多，操作复杂，消费的试剂也较昂贵。
3 改进的方法
在日常的外周血的收集过程中，我们利用下面的方法 本课题受辽宁省教委科技攻关项目(编号202203248)提取DNA:(1)取抗凝血5ml在沉淀中加入15ml PBS，混匀，离心2000r/min10min。2000r/min离心10min。(2)将血浆转至新的试管中，-70℃保存。(3)将血细胞转入另一支大的试管中(10ml或50ml)加入尽可能多的冷的蒸馏水混匀。(4)将其插入冰内5～10min或放入-20℃15min。(5)将上述混合液从冰中或-20℃取出放至室温，离心2000r/min20min。(6)弃上清，收集沉淀。(7)在沉淀中加入15ml PBS，混匀，离心2000r/min10min。此步骤重复3次至沉淀为淡红色或白色。(8)将沉淀转入小管，加少量PBS，每分钟5000r/min离心5min，去上清。(9)沉淀-70℃保存。
通过比较我们会发现这种方法不用进行淋巴细胞的分离，直接提取DNA，不仅节省了实验时间，而且节省了淋巴细胞分离液、蛋白酶K和RNase等多种试剂，更重要的是DNA的质量完全可以满足PCR的要求，是一种简便快捷的实验方法。
参考文献
1 卢圣栋.现代分子生物学实验技术，第2版.北京:中国协和医科大学出版社，1999.
2 Zhang J，Zheng S，Gao Y，et al.Apartial allelotyping of urothelial carcinoma of bladder in the Chinese.Carcinogenesis，2003，6:58.
3 Zhang J，Fan Z，Gao Y，et al.Detecting bladder cancer in the Chinese by microsatellite analysis:ethnic and etiologic considerations.J Natl Cancer Inst，2001，Jan3:93(1):45-50.
作者单位:116027大连医科大学组织学与胚胎学教研室
116000大连医科大学第一附属医院胸外科
(编辑青 山), http://www.100md.com(金伟)
从外周血中提取DNA，进行核酸水平的研究是临床分子生物学重要的研究手段 [1～3] 。在肿瘤学研究中，可以利用外周血作对照检测肿瘤组织DNA差异，开展PCR，甲基化，基因突变等多项指标的检测。然而，传统的外周血DNA的分离方法较复杂，我们进行了一些改进，具体方法如下。
1 淋巴细胞的分离
(1)取抗凝血5ml，1000～1200r/min离心10min。(2)吸取上层血浆转至新的小管子中，-70℃保存。(3)以等体积的PBS稀释血细胞后加入至4ml淋巴细胞分离液中。(4)室温条件下离心1000～1200r/min25min，吸取中间层白细胞转移到干净离心管中。(5)加入10ml PBS，混匀，离心，1000～1200r/min，共10min，弃掉上清。重复2次。(6)用1.5ml PBS悬浮白细胞，在4℃条件下，5000rpm10min，放弃上清，沉淀-70℃保存。
2 DNA的常规提取白细胞用15ml DNA抽提液悬浮，37℃保温1h，然后按照常规的DNA提取的方法进行提取。这种DNA的提取方法分淋巴细胞的分离和DNA提取两个步骤。相对而言，耗时多，操作复杂，消费的试剂也较昂贵。
3 改进的方法
在日常的外周血的收集过程中，我们利用下面的方法 本课题受辽宁省教委科技攻关项目(编号202203248)提取DNA:(1)取抗凝血5ml在沉淀中加入15ml PBS，混匀，离心2000r/min10min。2000r/min离心10min。(2)将血浆转至新的试管中，-70℃保存。(3)将血细胞转入另一支大的试管中(10ml或50ml)加入尽可能多的冷的蒸馏水混匀。(4)将其插入冰内5～10min或放入-20℃15min。(5)将上述混合液从冰中或-20℃取出放至室温，离心2000r/min20min。(6)弃上清，收集沉淀。(7)在沉淀中加入15ml PBS，混匀，离心2000r/min10min。此步骤重复3次至沉淀为淡红色或白色。(8)将沉淀转入小管，加少量PBS，每分钟5000r/min离心5min，去上清。(9)沉淀-70℃保存。
通过比较我们会发现这种方法不用进行淋巴细胞的分离，直接提取DNA，不仅节省了实验时间，而且节省了淋巴细胞分离液、蛋白酶K和RNase等多种试剂，更重要的是DNA的质量完全可以满足PCR的要求，是一种简便快捷的实验方法。
参考文献
1 卢圣栋.现代分子生物学实验技术，第2版.北京:中国协和医科大学出版社，1999.
2 Zhang J，Zheng S，Gao Y，et al.Apartial allelotyping of urothelial carcinoma of bladder in the Chinese.Carcinogenesis，2003，6:58.
3 Zhang J，Fan Z，Gao Y，et al.Detecting bladder cancer in the Chinese by microsatellite analysis:ethnic and etiologic considerations.J Natl Cancer Inst，2001，Jan3:93(1):45-50.
作者单位:116027大连医科大学组织学与胚胎学教研室
116000大连医科大学第一附属医院胸外科
(编辑青 山), http://www.100md.com(金伟)