麻黄汤对哮喘小鼠作用的研究
摘要】 目的 探讨麻黄汤对哮喘小鼠的作用。方法 36只小鼠随机分为正常组、哮喘组、治疗组，用卵蛋白致敏建立哮喘模型，采用HE染色及免疫组织化学染色分析各组小鼠肺组织病理变化及肺组织IFN-γ和IL-4阳性表达情况。结果 麻黄汤治疗组小鼠炎症比哮喘组明显减轻，支气管内及其周围炎症细胞明显减少(P<0.01)，IFN-γ阳性细胞表达比哮喘组明显增加(P<0.01)，而IL-4阳性细胞表达则比哮喘组明显下降(P<0.01)。结论 麻黄汤能够改善哮喘小鼠的支气管炎症，通过调节Th 1 /Th 2 比例，可能是其作用机制之一。
关键词 麻黄汤 哮喘 白细胞介素-4 γ-干扰素
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)07-0964-02
Effects of mahuangtang on asthmatic mouse
, http://www.100md.com
Huang Jianming，Tian Wei，Zhang Zaiqi，et al.
Section of Internal Medicine，Department of Clinic Medicine，Guangdong College of Pharmacy，Guangzhou510224.
【Abstract】 Objective To observe the effects of mahuangtang on asthmatic mouse.Methods 36mice were divided into control group，asthmatic group and treated group.Asthmatic mouse model were made by intraperitoneal inˉjection ovalbumin three weeks before，and the asthma consecutively challenged daily with spray inhalation of5%ovalˉbumin for7days.The pathologic change and the lung tissues expression of interleukin-4and interferon-γof all groups mice were analyzed.Results The number of inflammatory cells in or around the br
, http://www.100md.com
onchi of the mice in treated group were less than that in asthma group，and the expressions of interferon-γin the lung tissues of the mice in treatˉed group were more than that in asthmatic group(P<0.01).While the expressions of interleukin-4in the lung tisˉsues of the mice in treated group were less than that in a
sthmatic group(P<0.01).Conclusion Mahuangtang can alleviate inflammation of bronchus of asthmatic mouse，decreasing interleukin-4and increasing interferon-γ，which maybe one of the mechanism of that mahuangtang operates on asthma.
, http://www.100md.com
Key words mahuangtang asthma interleukin-4 interferon-γ
麻黄汤出自张仲景的《伤寒论》，它是治疗哮喘的基本方，其加减方如射干麻黄汤、小青龙汤等目前广泛应用于临床，本文旨在探讨麻黄汤对卵蛋白致敏的哮喘小鼠的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试剂 卵蛋白(美国Sigma公司);IL-4单克隆抗体(Endogen公司);IFN-γ单克隆抗体(R&D system Inc);HRP-DAB system mouse-kit(R&D system Inc)
1.1.2 麻黄汤的制备 [1] 取麻黄9g，杏仁12g，桂枝6g，炙甘草3g。先将麻黄置于砂锅中。加入单蒸水1L，用电炉(500W)煮30min，然后加入杏仁、桂枝、炙甘草煮60min后过滤，用生理盐水调配至100ml(浓度为0.3g/ml)。高压消毒后备用。
, 百拇医药
1.1.3 动物 36只健康雄性Balb/c小鼠(清洁级，广东药学院动物实验室提供)，8～10周龄，体重18～25g，适应性饲养7天后开始实验。
1.2 方法
1.2.1 动物分组 随机将小鼠分成3组(对照组、哮喘组、治疗组)，每组12只。对照组:分别于实验第1、7、14、21天腹腔注入生理盐水0.2ml，第28天始用生理盐水雾化30min，雾化前60min用生理盐水0.5ml灌胃。连续7天。哮喘组:取含卵蛋白10μg，氢氧化铝20mg的生理盐水0.2ml，于第1、7、14、21天腹腔注入。第28天始用5%的卵蛋白生理盐水雾化30min，雾化前60min用生理盐水0.5ml灌胃。连续7天。治疗组:小鼠的致敏与激发同哮喘组。雾化前60min用麻黄汤0.5ml灌胃。连续7天。
1.2.2 病理分析和免疫组织化学染色 于实验的第36天断髓处死小鼠，解剖取出肺脏，迅速置于10%中性甲醛溶液中固定24h，置于自动脱水机中处理。脱水后浸蜡、处理后在60℃石蜡中包埋，切片，分别作HE染色和免疫组织化学染色分析。
, 百拇医药
1.2.3 支气管内及支气管管壁炎症细胞计数 在高倍镜下对每一切片的所有支气管内浸润细胞数进行计数，取其平均值作为其支气管内炎症细胞数。每一切片随机取3个支气管高倍视野，计算其管壁浸润细胞数，取其平均值作为其支气管管壁炎症细胞。并对对照组与哮喘组、哮喘组与治疗组的支气管内、支气管管壁的浸润细胞均数，进行两两均数比较的t检验。
1.2.4 IFN-γ和IL-4在肺组织的阳性细胞数的计算 每一切片随机取3个阳性表达高倍视野计算其阳性细胞数，取其平均值作为其阳性细胞数。并对对照组与哮喘组、哮喘组与治疗组的IFN-γ和IL-4的阳性细胞数均数，进行两两均数比较的t检验。
2 结果
2.1 肺组织病理改变 对照组小鼠肺组织无明显炎症变化;哮喘组小鼠肺组织有明显的炎症，可见肺泡轻、中度扩张，肺泡腔内有大量的炎性细胞浸润，肺泡壁、间质有不同程度的充血、出血，以及大量的炎性细胞浸润，支气管呈痉挛状态，腔内有大量的分泌物，管腔上皮细胞脱落坏死，基底膜增厚，管腔周围有大量的炎性细胞浸润;治疗组小鼠肺组织炎症比哮喘组明显减轻，支气管以及血管旁仅见少量的炎性细胞浸润，支气管上皮损害较哮喘组显著减轻。
, 百拇医药
2.2 支气管内及其管壁的炎症细胞数 对照组支气管内炎症细胞数0;哮喘组为6.8056±1.6785;治疗组为1.2779±0.8020。哮喘组支气管内炎症细胞比对照组明显增多，而治疗组比哮喘组有明显减少。
对照组支气管管壁炎症细胞数为1.4444±1.1040;哮喘组为18.6389±3.4770;治疗组为7.8333±1.6847。哮喘组支气管管壁炎症细胞比对照组明显增多，而治疗组比哮喘组明显减少。
2.3 IFN-γ和IL-4在肺组织的阳性细胞数
2.3.1 IFN-γ在肺组织的阳性细胞 正常组、哮喘组、治疗组IFN-γ阳性细胞数分别为3.444±0.9983;14.0139±2.7529;26.0833±3.2196。哮喘组和治疗组小鼠肺内IFN-γ阳性细胞数均明显增多，哮喘组与对照组比较差异有非常显著性(P<0.01)。但治疗组肺内IFN-γ阳性细胞增加比哮喘组更明显，其与哮喘组比较差异有非常显著性(P<0.01)。
, 百拇医药
2.3.2 IL-4在肺组织的阳性细胞数 正常组、哮喘组、治疗组IL-4阳性细胞数分别为2.1667±0.2247;22.8334±7.8081;4.5883±0.5528。哮喘组小鼠肺内IL-4阳性细胞数比对照组明显增多(P<0.01)。而治疗组小鼠肺内IL-4阳性细胞较哮喘组明显减少(P<0.01)。
2.3.3 IFN-γ/IL-4阳性细胞比值 对照组、哮喘组、治疗组IFN-γ/IL-4比值分别为1.5897;0.6137;5.6847。
3 讨论
麻黄汤是治疗寒喘的基本方，其加减方如小青龙汤，射干麻黄汤广泛应用于临床，并取得良好效果。麻黄汤具有辛凉宣泄，清肺平喘的功效，方中麻黄发汗解表，宣肺平喘，桂枝温经散寒，助麻黄发汗，杏仁利肺理气，助麻黄宣肺平喘，甘草益中和气，调和诸药。
我们用麻黄汤治疗经卵蛋白致敏的哮喘小鼠结果显示治疗组支气管痉挛状态、支气管上皮细胞脱落坏死、管腔内分泌物均比哮喘组明显减轻，支气管及其管壁的炎性细胞浸润明显减少，提示其对哮喘的支气管炎症反应有治疗作用。
, http://www.100md.com
许多研究表明哮喘患者体内存在Th 1 /Th 2 亚群的失衡 [2，3] 。Th 0 细胞越来越多地向Th 2 亚群分化，Th 2 型细胞产生细胞因子IL-4、IL-5等，对哮喘的发病及病理特征的形成起重要作用。相反Th 1 型细胞产生的IFN-γ等则对此过程呈抑制作用。本研究表明哮喘组肺组织IL-4、IFN-γ阳性细胞数较正常组明显增多，其中IL-4阳性细胞数更为明显，IFN-γ/IL-4比值下降。提示哮喘小鼠可能存在Th 1 /Th 2 亚群的失衡。
而用麻黄汤治疗的小鼠IL-4阳性细胞数明显下降，IFN-γ阳性细胞数明显增多，IFN-γ/IL-4比值较哮喘组明显上升。提示麻黄汤能减少Th 2 亚群细胞，增加Th 1 亚群细胞，这可能是其治疗哮喘的作用机制之一。
, 百拇医药
参考文献
1 尚炽昌，冀春茹，苗明三.仲景方药研究应用精鉴.北京:人民军医出版社，1999，60-68.
2 肖伟，余惠，郑春燕，等.哮喘患者外周血单个核细胞中Th 1 /Th 2 类细胞因子的偏移状态及红霉素的纠偏作用.中华结核和呼吸杂志，2000，23(6):347-350.
3 Wong C K，HO C Y，Ko F，et al.Proinflammatory cytokines(IL-17，IL-16，IL-18and IL-12)and Th cytokines(IFN-γ，IL-4，IL-10and IL-13)in patients with allergic asthma.Clin Exp Immunol，2001，125(2):177-183.
作者单位:510224广东药学院临床医学系内科教研室
(编辑 张璇), http://www.100md.com(黄建明)
关键词 麻黄汤 哮喘 白细胞介素-4 γ-干扰素
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)07-0964-02
Effects of mahuangtang on asthmatic mouse
, http://www.100md.com
Huang Jianming，Tian Wei，Zhang Zaiqi，et al.
Section of Internal Medicine，Department of Clinic Medicine，Guangdong College of Pharmacy，Guangzhou510224.
【Abstract】 Objective To observe the effects of mahuangtang on asthmatic mouse.Methods 36mice were divided into control group，asthmatic group and treated group.Asthmatic mouse model were made by intraperitoneal inˉjection ovalbumin three weeks before，and the asthma consecutively challenged daily with spray inhalation of5%ovalˉbumin for7days.The pathologic change and the lung tissues expression of interleukin-4and interferon-γof all groups mice were analyzed.Results The number of inflammatory cells in or around the br
, http://www.100md.com
onchi of the mice in treated group were less than that in asthma group，and the expressions of interferon-γin the lung tissues of the mice in treatˉed group were more than that in asthmatic group(P<0.01).While the expressions of interleukin-4in the lung tisˉsues of the mice in treated group were less than that in a
sthmatic group(P<0.01).Conclusion Mahuangtang can alleviate inflammation of bronchus of asthmatic mouse，decreasing interleukin-4and increasing interferon-γ，which maybe one of the mechanism of that mahuangtang operates on asthma.
, http://www.100md.com
Key words mahuangtang asthma interleukin-4 interferon-γ
麻黄汤出自张仲景的《伤寒论》，它是治疗哮喘的基本方，其加减方如射干麻黄汤、小青龙汤等目前广泛应用于临床，本文旨在探讨麻黄汤对卵蛋白致敏的哮喘小鼠的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试剂 卵蛋白(美国Sigma公司);IL-4单克隆抗体(Endogen公司);IFN-γ单克隆抗体(R&D system Inc);HRP-DAB system mouse-kit(R&D system Inc)
1.1.2 麻黄汤的制备 [1] 取麻黄9g，杏仁12g，桂枝6g，炙甘草3g。先将麻黄置于砂锅中。加入单蒸水1L，用电炉(500W)煮30min，然后加入杏仁、桂枝、炙甘草煮60min后过滤，用生理盐水调配至100ml(浓度为0.3g/ml)。高压消毒后备用。
, 百拇医药
1.1.3 动物 36只健康雄性Balb/c小鼠(清洁级，广东药学院动物实验室提供)，8～10周龄，体重18～25g，适应性饲养7天后开始实验。
1.2 方法
1.2.1 动物分组 随机将小鼠分成3组(对照组、哮喘组、治疗组)，每组12只。对照组:分别于实验第1、7、14、21天腹腔注入生理盐水0.2ml，第28天始用生理盐水雾化30min，雾化前60min用生理盐水0.5ml灌胃。连续7天。哮喘组:取含卵蛋白10μg，氢氧化铝20mg的生理盐水0.2ml，于第1、7、14、21天腹腔注入。第28天始用5%的卵蛋白生理盐水雾化30min，雾化前60min用生理盐水0.5ml灌胃。连续7天。治疗组:小鼠的致敏与激发同哮喘组。雾化前60min用麻黄汤0.5ml灌胃。连续7天。
1.2.2 病理分析和免疫组织化学染色 于实验的第36天断髓处死小鼠，解剖取出肺脏，迅速置于10%中性甲醛溶液中固定24h，置于自动脱水机中处理。脱水后浸蜡、处理后在60℃石蜡中包埋，切片，分别作HE染色和免疫组织化学染色分析。
, 百拇医药
1.2.3 支气管内及支气管管壁炎症细胞计数 在高倍镜下对每一切片的所有支气管内浸润细胞数进行计数，取其平均值作为其支气管内炎症细胞数。每一切片随机取3个支气管高倍视野，计算其管壁浸润细胞数，取其平均值作为其支气管管壁炎症细胞。并对对照组与哮喘组、哮喘组与治疗组的支气管内、支气管管壁的浸润细胞均数，进行两两均数比较的t检验。
1.2.4 IFN-γ和IL-4在肺组织的阳性细胞数的计算 每一切片随机取3个阳性表达高倍视野计算其阳性细胞数，取其平均值作为其阳性细胞数。并对对照组与哮喘组、哮喘组与治疗组的IFN-γ和IL-4的阳性细胞数均数，进行两两均数比较的t检验。
2 结果
2.1 肺组织病理改变 对照组小鼠肺组织无明显炎症变化;哮喘组小鼠肺组织有明显的炎症，可见肺泡轻、中度扩张，肺泡腔内有大量的炎性细胞浸润，肺泡壁、间质有不同程度的充血、出血，以及大量的炎性细胞浸润，支气管呈痉挛状态，腔内有大量的分泌物，管腔上皮细胞脱落坏死，基底膜增厚，管腔周围有大量的炎性细胞浸润;治疗组小鼠肺组织炎症比哮喘组明显减轻，支气管以及血管旁仅见少量的炎性细胞浸润，支气管上皮损害较哮喘组显著减轻。
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2.2 支气管内及其管壁的炎症细胞数 对照组支气管内炎症细胞数0;哮喘组为6.8056±1.6785;治疗组为1.2779±0.8020。哮喘组支气管内炎症细胞比对照组明显增多，而治疗组比哮喘组有明显减少。
对照组支气管管壁炎症细胞数为1.4444±1.1040;哮喘组为18.6389±3.4770;治疗组为7.8333±1.6847。哮喘组支气管管壁炎症细胞比对照组明显增多，而治疗组比哮喘组明显减少。
2.3 IFN-γ和IL-4在肺组织的阳性细胞数
2.3.1 IFN-γ在肺组织的阳性细胞 正常组、哮喘组、治疗组IFN-γ阳性细胞数分别为3.444±0.9983;14.0139±2.7529;26.0833±3.2196。哮喘组和治疗组小鼠肺内IFN-γ阳性细胞数均明显增多，哮喘组与对照组比较差异有非常显著性(P<0.01)。但治疗组肺内IFN-γ阳性细胞增加比哮喘组更明显，其与哮喘组比较差异有非常显著性(P<0.01)。
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2.3.2 IL-4在肺组织的阳性细胞数 正常组、哮喘组、治疗组IL-4阳性细胞数分别为2.1667±0.2247;22.8334±7.8081;4.5883±0.5528。哮喘组小鼠肺内IL-4阳性细胞数比对照组明显增多(P<0.01)。而治疗组小鼠肺内IL-4阳性细胞较哮喘组明显减少(P<0.01)。
2.3.3 IFN-γ/IL-4阳性细胞比值 对照组、哮喘组、治疗组IFN-γ/IL-4比值分别为1.5897;0.6137;5.6847。
3 讨论
麻黄汤是治疗寒喘的基本方，其加减方如小青龙汤，射干麻黄汤广泛应用于临床，并取得良好效果。麻黄汤具有辛凉宣泄，清肺平喘的功效，方中麻黄发汗解表，宣肺平喘，桂枝温经散寒，助麻黄发汗，杏仁利肺理气，助麻黄宣肺平喘，甘草益中和气，调和诸药。
我们用麻黄汤治疗经卵蛋白致敏的哮喘小鼠结果显示治疗组支气管痉挛状态、支气管上皮细胞脱落坏死、管腔内分泌物均比哮喘组明显减轻，支气管及其管壁的炎性细胞浸润明显减少，提示其对哮喘的支气管炎症反应有治疗作用。
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许多研究表明哮喘患者体内存在Th 1 /Th 2 亚群的失衡 [2，3] 。Th 0 细胞越来越多地向Th 2 亚群分化，Th 2 型细胞产生细胞因子IL-4、IL-5等，对哮喘的发病及病理特征的形成起重要作用。相反Th 1 型细胞产生的IFN-γ等则对此过程呈抑制作用。本研究表明哮喘组肺组织IL-4、IFN-γ阳性细胞数较正常组明显增多，其中IL-4阳性细胞数更为明显，IFN-γ/IL-4比值下降。提示哮喘小鼠可能存在Th 1 /Th 2 亚群的失衡。
而用麻黄汤治疗的小鼠IL-4阳性细胞数明显下降，IFN-γ阳性细胞数明显增多，IFN-γ/IL-4比值较哮喘组明显上升。提示麻黄汤能减少Th 2 亚群细胞，增加Th 1 亚群细胞，这可能是其治疗哮喘的作用机制之一。
, 百拇医药
参考文献
1 尚炽昌，冀春茹，苗明三.仲景方药研究应用精鉴.北京:人民军医出版社，1999，60-68.
2 肖伟，余惠，郑春燕，等.哮喘患者外周血单个核细胞中Th 1 /Th 2 类细胞因子的偏移状态及红霉素的纠偏作用.中华结核和呼吸杂志，2000，23(6):347-350.
3 Wong C K，HO C Y，Ko F，et al.Proinflammatory cytokines(IL-17，IL-16，IL-18and IL-12)and Th cytokines(IFN-γ，IL-4，IL-10and IL-13)in patients with allergic asthma.Clin Exp Immunol，2001，125(2):177-183.
作者单位:510224广东药学院临床医学系内科教研室
(编辑 张璇), http://www.100md.com(黄建明)