射心通胶囊对实验性心肌缺血损伤的保护作用
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中华中西医杂志 2003年4月 第4卷 第8期
【摘要】 目的 探讨射心通胶囊治疗冠心病心绞痛的可能机制，验证其疗效。方法 应用异丙肾上腺素复制心肌缺血损伤的动物模型。采用高、低剂量射心通胶囊与消心痛对模型进行干预，同时设正常组和模型组。观察各组给药+造模前后心电图∑ST段、心肌组织乳酸(LD)含量和心肌细胞ATP酶活性的变化情况。结果 造模后模型组心电图∑ST段明显高于正常组，显示造模成功，LD含量显著提高(P<0.01)，心肌细胞ATP酶活性明显低于正常组(P<0.01)，而对照组和射心通胶囊组则显示出明显的对抗∑ST段升高的作用(P<0.01)，同时降低心肌组织的LD含量(P<0.01)，并提高心肌细胞ATP酶的活性(P<0.05，0.01)。结论 射心通胶囊可改善心肌细胞能量代谢，保护缺血的心肌。
关键词 射心通胶囊 心肌缺血损伤保护作用
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)08-1144-03
, 百拇医药 Protective effects of capsule shexintong in treating
experimental myocardial ischemia and damage of rats
Zheng Qiongli，Zhang Jiemei，Yu Ronghui，et al.
Wuhan Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine，Wuhan430022.
【Abstract】 Objective To investigate the mechanism of capsule shexintong intreating coronary heart disease.Methods The animal model of experimental myocardial ischemia and damage was induced by isoprenal.To use capˉsule shexintong in high dosage，low dosage and isosorbide dinitrate to treat animal model，at the same time set up norˉmal group and model group.To study the alteration of∑ST segment，cardiac tissue lactic acid(LD)and cardiac musˉcle cells ATPase before and after giving drugs+making model in each group.Results After making model the∑ST segment of model group was higher than that of normal group，cardiac tissue LD was significantly higher than that of normal group(P<0.01)，cardiac muscle cell ATPase was significantly lower than that of normal group(P<0.01)，the improvement of∑ST segment and LD in control group and capsule shexintong group displayed significant intervenˉing effect(P<0.01).Cardiac muscle cell ATP ase was improved(P<0.05，0.01).Conclusion Capsule shexintong protected ischemic myocardium through optimizing the energy metabolism of cardiac muscle cells.
, 百拇医药
Key words capsule shexintong myocardial ischemia and damage protective effect
射心通胶囊在临床治疗中取得了较满意的疗效，为了进一步探明其作用机制，我们对其药效进行了动物实验，方法及要求、参考《中药药理研究方法学》 [1] 。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 SD品系雄性大白鼠50只，体重(310±10)g，购于华中科技大学同济医学院动物实验中心。
1.1.2 实验药物 射心通胶囊悬液，消心痛片悬液由本院制剂中心提供。按处方比例称取适量中药材，并按胶囊制备工艺，以75%乙醇提取回收浓缩成两种浓度的射心通胶囊悬液，分别含生药量1.6g/ml(高剂量)和0.8g/ml(低剂量)。阳性对照药消心痛片(由江苏方强药厂生产，批号010716)研末，以生理盐水调成0.2g/ml浓度的悬液。盐酸异丙肾上腺素注射液(0.5mg/ml)为上海禾丰药厂生产(批号010801，市购)。
, 百拇医药
1.1.3 实验试剂 乳酸试剂盒及ATP酶测试盒，均购自南京建成生物工程研究院。
1.1.4 实验仪器 德国产HELLIGE八导生理记录仪、冰箱、离心机、分光光度计、手术器械及动物实验室均由湖北中医学院实验中心提供。
1.2 方法
1.2.1 分组 分组前取大鼠分别用德国HELLIGE八导生理记录仪Ⅱ导联测心电图(ECG)，筛选出ECG ST段正常的SD大鼠50只，按体重随机分为正常组、模型组、对照组、射心通低剂量组及高剂量组，每组10只SD大鼠。皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)10mg/kg，正常组则注射等容量生理盐水。
1.2.2 模型制备 正常组和模型组用等容量生理盐水10ml/kg体重，对照组用消心痛悬液2mg·10ml -1 ·kg -1 体重，射心通低剂量组及高剂量组分别用射心通悬液8g·10ml -1·kg -1 体重和16g·10ml -1 ·kg -1 体重，每天分别灌胃一次，连续7天。各组大鼠分别于第5、6、7天灌胃给药30min后，皮下多点注射ISO10mg/kg，正常组则注射等容量生理盐水。
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1.2.3 心电图ST段标测 于末次注射ISO24h后，再以八导生理记录仪Ⅱ导联分别检测受试大白鼠ECG，观察其ST段的变化，以给药+造模前后的ST段偏移总毫伏数(∑ST)，作为心肌缺血程度的指标和评价药物疗效的指标。
1.2.4 心肌组织乳酸含量测定 最后一次ECG检测后处死大鼠，摘取心脏在预冷的生理盐水中漂洗后，滤纸拭干，用电子分析天秤称取0.5g心肌组织，加生理盐水至5ml，眼科剪快速剪碎组织块，用内切式组织匀浆器制成10%组织匀浆(时间10s/次，间隙30s，连续3～5次，在冰水中进行)。匀浆以3000～4000r/min，离心15min，取上清液按试剂盒说明书检测心肌组织乳酸的含量。样品在上海科学仪器设备厂生产的721分光光度计530nm处，测吸光度，用试剂盒说明书提供的公式计算心肌组织中乳酸含量。
1.2.5 心肌细胞ATP酶活性的测定 心肌组织匀浆制备同前，按ATP酶测定盒说明书检测心肌细胞Na + -K + -ATP酶、Ca 2+ -ATP酶、Mg 2+ -ATP酶和Ca 2+ -Mg 2+ -ATP酶的活性。样品在45℃水浴20min，冷却至室温，然后在721分光光度计660nm处，测定吸光度，按说明书提供公式计算心肌细胞ATP酶活性。
, 百拇医药
1.2.6 统计学处理 数值用平均数±标准差(ˉx±s)表示，组间比较用t检验。
2 结果
2.1 对心电图∑ST段的影响 造模后模型组大鼠∑ST段明显升高(P<0.01)，两对照组和射心通组则同时显示出明显抵抗ST段升高的作用，两组间差异无显著性(P>0.05)，但射心通组∑ST的变化与其浓度有明显的相关性。结果见表1。
2.2 对心肌组织乳酸含量的影响 模型组大鼠心肌组织乳酸含量明显高于正常组(P<0.01)，射心通组和对照组则能明显降低乳酸含量(P<0.01)，几乎接近正常组(P>0.05)。射心通组与对照组的降低量差异无显著性(P>0.05)，且降低量与射心通浓度无相关性(P>0.05)，结果见表2。
2.3 对心肌细胞ATP酶活性的影响 模型组心肌细胞ATP酶活性明显低于正常组(P<0.01)，射心通组和对照组则有显著提高ATP酶活性的作用，与模型组比较差异有显 著性(P<0.05，0.01)，与正常组比较差异无显著性(P>0.05)，射心通组与对照组之间提升ATP酶活性的作用也差异无显著性(P>0.05)，同时与射心通的浓度未显示出明显的相关性。结果见表3。
, 百拇医药
表1 射心通对实验性心肌缺血大鼠ECG∑ST段的影响 (略)
表2 射心通对实验性心肌缺血大鼠心肌组织乳酸含量的影响 (略)
表3 射心通对实验性心肌缺血大鼠心肌细胞ATP酶活性的影响 ()
3 讨论
现已证明，大剂量异丙肾上腺素(ISO，10mg·kg -1 ·d -1 )可引起大鼠心肌收缩增快，心肌能量供应发生障碍，产生心肌损伤及坏死，出现心电图ST段T波的异常改变，连续3天用药可出现异常Q波，组织切片心肌坏死 [1] ，而且，心肌缺血ST段的变化幅度可基本反映心肌缺血的严重程度，因此∑ST段可作为缺血程度的定量指标 [2] 。
越来越多的临床和实验研究表明，优化心脏能量代谢 是减轻心肌缺血所致症状的一种有效方法 [3] 。心肌缺血，心肌细胞内cAMP和乳酸(LD)浓度增高;而细胞内能量代谢障碍可使ATP生成下降，致使细胞膜ATP酶活力降低，则细胞内外K + 、Na + 、Mg 2+ 、Ca 2+ 等离子转运失调，细胞通透性增加，导致细胞水肿、变性、坏死，心脏功能发生异常改变。以致晚近的观点认为，能量代谢障碍可造成心肌细胞基因表达障碍及细胞凋亡。所以，观察ATP酶活性能较客观地反映缺血性损伤心肌能量代谢的状况 [4] 。
, 百拇医药
本实验以ISO(10mg·kg-1 ·d -1 )连续3天大鼠皮下多点注射，结果显示模型组大鼠ECG∑ST段明显升高，而对照组和射心通胶囊组均显示出明显对抗ST升高的作用(P<0.01)，提示射心通胶囊具有与消心痛相同的抗心肌缺血作用，两组间差异无显著性(P>0.05)。但射心通胶囊组的疗效与其浓度存在明显的量效关系(P<0.05)。此外，心肌细胞ATP酶活性检测结果显示，模型组大鼠Na + -K + -ATP酶、Ca 2+ -ATP酶、Mg 2+ -ATP酶、Ca 2+ -Mg 2+ -ATP酶活性均明显低于正常组、对照组和射心通胶囊组(P<0.01和P<0.05)。提示射心通胶囊和对照组同时有提高缺血心肌细胞ATP酶活性的作用(P<0.05和P<0.01)，且组间差异无显著性(P>0.05)，与射心通胶囊浓度也无明显的相关性。同时结合心肌组织LD含量的测定结果，模型组显著高于正常组(P<0.01)，而对照组和射心通胶 囊组LD含量与正常组相似，且组间差异无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
由此可见，射心通胶囊对缺血损伤造成的心肌损害有保护作用，其作用机制可能与促进细胞能量代谢、阻止细胞内钙超载、扩张血管、改善血循环有关。
参考文献
1 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社，1993，495.
2 宋晓亮，高广猷，叶丽红.山麦冬总皂甙对实验性心肌缺血的影响.中国药理学通报，1996，12(4):331.
3 周国鹏，赵志杰.三甲氧苄嗪和缺血性心脏病.心血管病学进展，2001，22(1):25.
4 张昱，王绵之，黄启福，等.保心丸对结扎冠脉所致大鼠心肌缺血的保护作用.北京中医药大学学报，1997，20(1):32.
基金项目:武汉市卫生局立项资助(编号:武卫[2000]148号)
作者单位:430022湖北省武汉市中西医结合医院
(编辑 张璇), 百拇医药(郑琼莉 张介眉 喻荣辉 柯于鹤 潘克英 孙江桥)
关键词 射心通胶囊 心肌缺血损伤保护作用
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)08-1144-03
, 百拇医药 Protective effects of capsule shexintong in treating
experimental myocardial ischemia and damage of rats
Zheng Qiongli，Zhang Jiemei，Yu Ronghui，et al.
Wuhan Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine，Wuhan430022.
【Abstract】 Objective To investigate the mechanism of capsule shexintong intreating coronary heart disease.Methods The animal model of experimental myocardial ischemia and damage was induced by isoprenal.To use capˉsule shexintong in high dosage，low dosage and isosorbide dinitrate to treat animal model，at the same time set up norˉmal group and model group.To study the alteration of∑ST segment，cardiac tissue lactic acid(LD)and cardiac musˉcle cells ATPase before and after giving drugs+making model in each group.Results After making model the∑ST segment of model group was higher than that of normal group，cardiac tissue LD was significantly higher than that of normal group(P<0.01)，cardiac muscle cell ATPase was significantly lower than that of normal group(P<0.01)，the improvement of∑ST segment and LD in control group and capsule shexintong group displayed significant intervenˉing effect(P<0.01).Cardiac muscle cell ATP ase was improved(P<0.05，0.01).Conclusion Capsule shexintong protected ischemic myocardium through optimizing the energy metabolism of cardiac muscle cells.
, 百拇医药
Key words capsule shexintong myocardial ischemia and damage protective effect
射心通胶囊在临床治疗中取得了较满意的疗效，为了进一步探明其作用机制，我们对其药效进行了动物实验，方法及要求、参考《中药药理研究方法学》 [1] 。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 SD品系雄性大白鼠50只，体重(310±10)g，购于华中科技大学同济医学院动物实验中心。
1.1.2 实验药物 射心通胶囊悬液，消心痛片悬液由本院制剂中心提供。按处方比例称取适量中药材，并按胶囊制备工艺，以75%乙醇提取回收浓缩成两种浓度的射心通胶囊悬液，分别含生药量1.6g/ml(高剂量)和0.8g/ml(低剂量)。阳性对照药消心痛片(由江苏方强药厂生产，批号010716)研末，以生理盐水调成0.2g/ml浓度的悬液。盐酸异丙肾上腺素注射液(0.5mg/ml)为上海禾丰药厂生产(批号010801，市购)。
, 百拇医药
1.1.3 实验试剂 乳酸试剂盒及ATP酶测试盒，均购自南京建成生物工程研究院。
1.1.4 实验仪器 德国产HELLIGE八导生理记录仪、冰箱、离心机、分光光度计、手术器械及动物实验室均由湖北中医学院实验中心提供。
1.2 方法
1.2.1 分组 分组前取大鼠分别用德国HELLIGE八导生理记录仪Ⅱ导联测心电图(ECG)，筛选出ECG ST段正常的SD大鼠50只，按体重随机分为正常组、模型组、对照组、射心通低剂量组及高剂量组，每组10只SD大鼠。皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)10mg/kg，正常组则注射等容量生理盐水。
1.2.2 模型制备 正常组和模型组用等容量生理盐水10ml/kg体重，对照组用消心痛悬液2mg·10ml -1 ·kg -1 体重，射心通低剂量组及高剂量组分别用射心通悬液8g·10ml -1·kg -1 体重和16g·10ml -1 ·kg -1 体重，每天分别灌胃一次，连续7天。各组大鼠分别于第5、6、7天灌胃给药30min后，皮下多点注射ISO10mg/kg，正常组则注射等容量生理盐水。
, http://www.100md.com
1.2.3 心电图ST段标测 于末次注射ISO24h后，再以八导生理记录仪Ⅱ导联分别检测受试大白鼠ECG，观察其ST段的变化，以给药+造模前后的ST段偏移总毫伏数(∑ST)，作为心肌缺血程度的指标和评价药物疗效的指标。
1.2.4 心肌组织乳酸含量测定 最后一次ECG检测后处死大鼠，摘取心脏在预冷的生理盐水中漂洗后，滤纸拭干，用电子分析天秤称取0.5g心肌组织，加生理盐水至5ml，眼科剪快速剪碎组织块，用内切式组织匀浆器制成10%组织匀浆(时间10s/次，间隙30s，连续3～5次，在冰水中进行)。匀浆以3000～4000r/min，离心15min，取上清液按试剂盒说明书检测心肌组织乳酸的含量。样品在上海科学仪器设备厂生产的721分光光度计530nm处，测吸光度，用试剂盒说明书提供的公式计算心肌组织中乳酸含量。
1.2.5 心肌细胞ATP酶活性的测定 心肌组织匀浆制备同前，按ATP酶测定盒说明书检测心肌细胞Na + -K + -ATP酶、Ca 2+ -ATP酶、Mg 2+ -ATP酶和Ca 2+ -Mg 2+ -ATP酶的活性。样品在45℃水浴20min，冷却至室温，然后在721分光光度计660nm处，测定吸光度，按说明书提供公式计算心肌细胞ATP酶活性。
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1.2.6 统计学处理 数值用平均数±标准差(ˉx±s)表示，组间比较用t检验。
2 结果
2.1 对心电图∑ST段的影响 造模后模型组大鼠∑ST段明显升高(P<0.01)，两对照组和射心通组则同时显示出明显抵抗ST段升高的作用，两组间差异无显著性(P>0.05)，但射心通组∑ST的变化与其浓度有明显的相关性。结果见表1。
2.2 对心肌组织乳酸含量的影响 模型组大鼠心肌组织乳酸含量明显高于正常组(P<0.01)，射心通组和对照组则能明显降低乳酸含量(P<0.01)，几乎接近正常组(P>0.05)。射心通组与对照组的降低量差异无显著性(P>0.05)，且降低量与射心通浓度无相关性(P>0.05)，结果见表2。
2.3 对心肌细胞ATP酶活性的影响 模型组心肌细胞ATP酶活性明显低于正常组(P<0.01)，射心通组和对照组则有显著提高ATP酶活性的作用，与模型组比较差异有显 著性(P<0.05，0.01)，与正常组比较差异无显著性(P>0.05)，射心通组与对照组之间提升ATP酶活性的作用也差异无显著性(P>0.05)，同时与射心通的浓度未显示出明显的相关性。结果见表3。
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表1 射心通对实验性心肌缺血大鼠ECG∑ST段的影响 (略)
表2 射心通对实验性心肌缺血大鼠心肌组织乳酸含量的影响 (略)
表3 射心通对实验性心肌缺血大鼠心肌细胞ATP酶活性的影响 ()
3 讨论
现已证明，大剂量异丙肾上腺素(ISO，10mg·kg -1 ·d -1 )可引起大鼠心肌收缩增快，心肌能量供应发生障碍，产生心肌损伤及坏死，出现心电图ST段T波的异常改变，连续3天用药可出现异常Q波，组织切片心肌坏死 [1] ，而且，心肌缺血ST段的变化幅度可基本反映心肌缺血的严重程度，因此∑ST段可作为缺血程度的定量指标 [2] 。
越来越多的临床和实验研究表明，优化心脏能量代谢 是减轻心肌缺血所致症状的一种有效方法 [3] 。心肌缺血，心肌细胞内cAMP和乳酸(LD)浓度增高;而细胞内能量代谢障碍可使ATP生成下降，致使细胞膜ATP酶活力降低，则细胞内外K + 、Na + 、Mg 2+ 、Ca 2+ 等离子转运失调，细胞通透性增加，导致细胞水肿、变性、坏死，心脏功能发生异常改变。以致晚近的观点认为，能量代谢障碍可造成心肌细胞基因表达障碍及细胞凋亡。所以，观察ATP酶活性能较客观地反映缺血性损伤心肌能量代谢的状况 [4] 。
, 百拇医药
本实验以ISO(10mg·kg-1 ·d -1 )连续3天大鼠皮下多点注射，结果显示模型组大鼠ECG∑ST段明显升高，而对照组和射心通胶囊组均显示出明显对抗ST升高的作用(P<0.01)，提示射心通胶囊具有与消心痛相同的抗心肌缺血作用，两组间差异无显著性(P>0.05)。但射心通胶囊组的疗效与其浓度存在明显的量效关系(P<0.05)。此外，心肌细胞ATP酶活性检测结果显示，模型组大鼠Na + -K + -ATP酶、Ca 2+ -ATP酶、Mg 2+ -ATP酶、Ca 2+ -Mg 2+ -ATP酶活性均明显低于正常组、对照组和射心通胶囊组(P<0.01和P<0.05)。提示射心通胶囊和对照组同时有提高缺血心肌细胞ATP酶活性的作用(P<0.05和P<0.01)，且组间差异无显著性(P>0.05)，与射心通胶囊浓度也无明显的相关性。同时结合心肌组织LD含量的测定结果，模型组显著高于正常组(P<0.01)，而对照组和射心通胶 囊组LD含量与正常组相似，且组间差异无显著性(P>0.05)。
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由此可见，射心通胶囊对缺血损伤造成的心肌损害有保护作用，其作用机制可能与促进细胞能量代谢、阻止细胞内钙超载、扩张血管、改善血循环有关。
参考文献
1 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社，1993，495.
2 宋晓亮，高广猷，叶丽红.山麦冬总皂甙对实验性心肌缺血的影响.中国药理学通报，1996，12(4):331.
3 周国鹏，赵志杰.三甲氧苄嗪和缺血性心脏病.心血管病学进展，2001，22(1):25.
4 张昱，王绵之，黄启福，等.保心丸对结扎冠脉所致大鼠心肌缺血的保护作用.北京中医药大学学报，1997，20(1):32.
基金项目:武汉市卫生局立项资助(编号:武卫[2000]148号)
作者单位:430022湖北省武汉市中西医结合医院
(编辑 张璇), 百拇医药(郑琼莉 张介眉 喻荣辉 柯于鹤 潘克英 孙江桥)