p27蛋白和p16蛋白在胆囊癌中的表达及意义
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中华中西医杂志 2003年5月 第4卷 第9期
【摘要】 目的 探讨胆囊癌组织中p27基因蛋白和p16基因蛋白表达的意义。方法 应用免疫组织化学方法检测43例胆囊癌组织中p27蛋白和p16蛋白的表达，并与14例胆囊良性病变组织进行对比研究。结果 43例胆囊癌组织中p27蛋白和p16蛋白的阳性表达率分别为53.5%和48.8%，均明显低于胆囊良性病变组织，且其表达水平与临床分期、淋巴结转移及预后相关，p27蛋白表达水平还与组织学分级相关;p27蛋白和p16蛋白表达阳性者其生存期显著长于阴性表达者。结论 p27蛋白和p16蛋白表达水平可以作为判断胆囊癌预后的指标。
关键词 胆囊肿瘤 细胞周期 p27蛋白 p16蛋白 预后
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)09-1301-02
Expression of p27and p16proteins and their significance
, 百拇医药
in gallbladder carcinoma
Peng Shaohua，Jiang Bonian，Li Cheng，et al.
Department of Pathology，Medical College，Hunan Normal University，Changsha410006.
【Abstract】 Objective To investigate the significance of expression of p27gene and p16gene in gallbladder carcinoma.Methods The immunohistochemistry was used to detect the expressions of p27and p16protein in43casˉes of gallbladder carcinoma and14cases of benign gallbladder disease.Results The positive expressionrates of p27and p16were53.5%and48.8%in the gallbladder carcinoma，which was markedly lower than those in benign gallˉbladder diseases and were related to clinical stage，metastasis of lymph nodes and prognosis，and the positive rate of p27was related to histological classification of gallbladder carcinoma.The survival of patients with positive of p27and p16proteins was longer than that of patients with negative of p27and p16proteins.Conclusion The detection of the expression of p27and p16protein may be used as a prognostic parameter of gallbladder carcinoma.
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Key words gallbladder neoplasms cell-cycle protein p27 protein p16 prognosis
肿瘤是一类细胞周期性疾病，p27蛋白和p16蛋白分别是分子量为27kDa和16kDa的热稳定蛋白，作为细胞周期负性调控因子，通过抑制细胞周期依赖性蛋白激酶而抑制细胞周期，从而抑制肿瘤的形成。研究表明p27蛋白和p16蛋白在乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、前列腺癌及卵巢癌等的表达水平与其临床特征相关 [1～4] 。我们应用免疫组化方法检测了43例胆囊癌、14例胆囊良性病变的p27蛋白和p16蛋白表达情形，并分析了其与临床病理学特征的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 收集湖南省肿瘤医院和湘雅医院1997～2001年收治的经病理证实，且有完整随访资料的胆囊癌病例43例，其中男18例，女25例，年龄30～77岁，平均年龄56.3岁;组织学分级按WHO标准:G 1 14例，G 2 16例，G 3 13例;病例中已有淋巴结转移者24例，无淋巴结转移者19例;临床分期按Nevin分期:Ⅰ期5例，Ⅱ期9例，Ⅲ期11例，Ⅳ～Ⅴ期18例。胆囊良性病变包括慢性胆囊炎8例、胆囊腺瘤6例。所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，5μm连续切片。
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1.2 试剂 p27蛋白鼠抗人单克隆抗体，p16蛋白鼠抗人单克隆抗体，S-P免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。
1.3 免疫组化检测 免疫组化检测按说明书进行，抗原修复采用高压修复，用PBS液分别代替一抗作阴性对照。
1.4 结果判断 p27蛋白表达主要位于胞核，胞核内出现明显的棕色颗粒为阳性;p16蛋白阳性表达以细胞核和细胞浆内出现明显的棕色颗粒为标准。
1.5 统计学处理 采用χ 2 检验。
2 结果
2.1 p27和p16蛋白在胆囊癌组织中的表达 p27蛋白的阳性信号位于细胞核(图1)，胆囊癌中其阳性表达率为53.5%(23/43)，而胆囊良性病变的阳性表达率为85.7%(12/14)，前者明显低于后者(P<0.05);p16蛋白的阳性信号主要位于细胞核和细胞浆(图2)，在胆囊癌和胆囊良性病变中，p16蛋白的阳性表达率分别为48.8%(21/43)和92.9%(13/14)，差异有非常显著性(P<0.01)。
, 百拇医药
2.2 p27和p16蛋白的表达与胆囊癌临床病理学特征的关系 胆囊癌患者中有淋巴结转移和远处转移者p27蛋白和p16蛋白表达率明显低于无淋巴结转移和远处转移者(P<0.05)(表1);随临床分期的增加，p27蛋白和p16蛋白的表达率逐渐降低，越近晚期，表达越低，见表2;p27蛋白表达随组织学分级的增加而下降，p16蛋白表达与组织学分级无关，见表3。
表1 p27和p16蛋白的表达与淋巴结转移的关系(略)
表2 p27和p16蛋白的表达与胆囊癌临床分期的关系(略)
表3 p27和p16蛋白的表达与胆囊癌组织分级的关系(略)
2.3 p27蛋白和p16蛋白表达与预后的关系 分别比较p27蛋白和p16蛋白表达阳性的胆囊癌患者与表达阴性的胆囊癌患者的生存率发现，p27蛋白和p16蛋白表达阳性者其一年生存率显著高于阴性表达者。p27蛋白、p16蛋白共同表达阳性者13例，其生存期中位数为14.8个月，而共同表达阴性者7例，其生存期中位数为4.9个月，两组患者生存期差异有显著性(P<0.05)。
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3 讨论
细胞周期受细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)及其抑制剂(CKDIs)的共同调控，这些调控因子活性的改变直接影响细胞周期进程，进而影响细胞的增殖，与肿瘤的发生密切相关。在这些调控因子中，CDKIs的作用尤为重要，p27作为CDKIs家族成员之一，为一种广谱的CDKs抑制蛋白，其基因定位于人染色体12p12-12p13.1，包含两个有编码功能的外显子和一个无功能的外显子及一个内含子 [5～6] 。p27作为细胞周期负性调控因子，广泛抑制各种细胞周期蛋白和激酶的活性，但主要抑制cyclin E-CDK2和cyclin D-CDK4等激酶复合物活性，而cyclin E-CDK2是细胞通过G 1 /S限制点的关键。p27蛋白在恶性肿瘤组织中的表达下降，抑制细胞增生的能力下降，肿瘤细胞得以生长。p27蛋白的表达与肿瘤预后的关系，Loda首次报道了p27在结肠癌中独立的预后意义 [7] ;Tan等研究了202例乳腺癌标本，在多变量分析中表明p27是一个独立的预后因素 [8] 。p16作为CDKIs中的一种，与p27不同，是一种针对CDK4、CDK6的特异性抑制蛋白，其p16基 因定位于人染色体9p21，有三个外显子，编码的蛋白对细胞的分裂增殖起负性调节作用。p16蛋白可与Cyclin1竞争结合CDK4，阻止细胞由G 1 期进入S期。p16基因失活可导致p16蛋白表达缺如，抑制肿瘤增生的能力降低。
, 百拇医药
Hui等研究了胆囊癌、癌前病变及正常胆囊上皮的p27蛋白的表达，结果显示癌前病变及正常胆囊上皮p27蛋白均阳性，而胆囊癌组织的阳性率明显降低，并与细胞的分化程度、淋巴结转移及临床分期显著相关 [9] 。本研究发现，胆囊癌组织中p27蛋白和p16蛋白的表达率均低于胆囊良性病变组织，且随临床分期的增加，p27蛋白和p16蛋白的表达率逐渐降低，越近晚期，表达越低:胆囊癌患者中有淋巴结转移和远处转移者p27蛋白和p16蛋白表达明显低于无淋巴结转移和远处转移者。这表明p27基因和p16基因及其蛋白表达与肿瘤的临床分期及其预后有密切关系，在胆囊癌的发生、发展中起重要作用。研究还发现，胆囊癌患者p27蛋白和p16蛋白表达阳性者其生存率显著高于表达阴性者，p27蛋白和p16蛋白表达阴性者其生存期较阳性者短，这与p27蛋白和p16蛋白表达阴性的胆囊癌患者大多为临床晚期、已有淋巴结转移相吻合。此外，我们发现，p27蛋白表达随胆囊癌组织学分级的增加而下降，而p16蛋白表达与组织学分级无关，这是否与p27是一种广谱的CDKs抑制蛋白有关，或p27较p16相比更能反映胆囊癌的临床病理特征。我们认为，对胆囊癌患者行切除术后，常规检查其p27蛋白和p16蛋白表达水平，对判断其预后及决定其进一步的治疗方案均有一定意义。(本文图片略)
, 百拇医药
参考文献
1 Van de Putte G，Holm R，Lie AK.Expression of p27，p21，and p16proˉtein in early squamous cervical cancer and its relation to prognosis.Gyˉnecol Oncol，2003，89(1):140-147.
2 Porter PL，Malone KE，Heagerty PJ，et al.Expression of cell-cycle regˉulators p27Kipl and cyclin E，alone and in combination，correlate with survival in young breast cancer patients.Nat Med，1997，3:222-225.
3 Tsihlias J，Kapusta LR，DeBore G，et al.Loss of cyclin-dependent kiˉnase inhibitor p27Kipl is a novel prognostic factor in localized human prostate adenocarcinoma.Cancer Res，1998，58:542-548.
, 百拇医药
4 Masciullo V，Sgambato A，Pacilio C，et al.Frequent loss of expression of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27in epithelial ovarian cancer.Cancer Res，1999，57:3790-3794.
5 Ponce Castaneda MV，Lee M-H，Latres E，et al.p27Kipl:chromosomal mapping to12p12-12p13.1and absence of mutations in human tumors.Cancer Res，1995，55:1211-1214.
6 Serrano M，Hannon GJ，Beach D.A new regulatory motif in cell-cycle controlcausing specific inhibition of cyclin D/CDK4.Nature，1993，366(6456):704-707.
, http://www.100md.com
7 Loda M，Cukor B，Tam SW，et al.Increased proteasome-dependent degradation of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27in aggressive colorectal carcinomas.Nat Med，1997，3:231-234.
8 Tan P，Cady B，Wanner M.The cell cycle inhibitor p27is an indepenˉdent prognostic marker in small invasive breast carcinomas.Cancer Res，1997，57(7):1259-1263.
9 Hui AM，Li X，Shi YZ.p27(Kipl)expression in normal epithelia，preˉcancerous lesions，and carcinomas of the gallbladder:association with cancer progression and prognosis.Hepatology，2000，31(5):1068-1072.
作者单位:1 410006长沙湖南师范大学医学院病理学教研室
2 湖南省肿瘤医院
3 中南大学湘雅医学院
(编辑 小川), http://www.100md.com(彭绍华)
关键词 胆囊肿瘤 细胞周期 p27蛋白 p16蛋白 预后
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)09-1301-02
Expression of p27and p16proteins and their significance
, 百拇医药
in gallbladder carcinoma
Peng Shaohua，Jiang Bonian，Li Cheng，et al.
Department of Pathology，Medical College，Hunan Normal University，Changsha410006.
【Abstract】 Objective To investigate the significance of expression of p27gene and p16gene in gallbladder carcinoma.Methods The immunohistochemistry was used to detect the expressions of p27and p16protein in43casˉes of gallbladder carcinoma and14cases of benign gallbladder disease.Results The positive expressionrates of p27and p16were53.5%and48.8%in the gallbladder carcinoma，which was markedly lower than those in benign gallˉbladder diseases and were related to clinical stage，metastasis of lymph nodes and prognosis，and the positive rate of p27was related to histological classification of gallbladder carcinoma.The survival of patients with positive of p27and p16proteins was longer than that of patients with negative of p27and p16proteins.Conclusion The detection of the expression of p27and p16protein may be used as a prognostic parameter of gallbladder carcinoma.
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Key words gallbladder neoplasms cell-cycle protein p27 protein p16 prognosis
肿瘤是一类细胞周期性疾病，p27蛋白和p16蛋白分别是分子量为27kDa和16kDa的热稳定蛋白，作为细胞周期负性调控因子，通过抑制细胞周期依赖性蛋白激酶而抑制细胞周期，从而抑制肿瘤的形成。研究表明p27蛋白和p16蛋白在乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、前列腺癌及卵巢癌等的表达水平与其临床特征相关 [1～4] 。我们应用免疫组化方法检测了43例胆囊癌、14例胆囊良性病变的p27蛋白和p16蛋白表达情形，并分析了其与临床病理学特征的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 收集湖南省肿瘤医院和湘雅医院1997～2001年收治的经病理证实，且有完整随访资料的胆囊癌病例43例，其中男18例，女25例，年龄30～77岁，平均年龄56.3岁;组织学分级按WHO标准:G 1 14例，G 2 16例，G 3 13例;病例中已有淋巴结转移者24例，无淋巴结转移者19例;临床分期按Nevin分期:Ⅰ期5例，Ⅱ期9例，Ⅲ期11例，Ⅳ～Ⅴ期18例。胆囊良性病变包括慢性胆囊炎8例、胆囊腺瘤6例。所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，5μm连续切片。
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1.2 试剂 p27蛋白鼠抗人单克隆抗体，p16蛋白鼠抗人单克隆抗体，S-P免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。
1.3 免疫组化检测 免疫组化检测按说明书进行，抗原修复采用高压修复，用PBS液分别代替一抗作阴性对照。
1.4 结果判断 p27蛋白表达主要位于胞核，胞核内出现明显的棕色颗粒为阳性;p16蛋白阳性表达以细胞核和细胞浆内出现明显的棕色颗粒为标准。
1.5 统计学处理 采用χ 2 检验。
2 结果
2.1 p27和p16蛋白在胆囊癌组织中的表达 p27蛋白的阳性信号位于细胞核(图1)，胆囊癌中其阳性表达率为53.5%(23/43)，而胆囊良性病变的阳性表达率为85.7%(12/14)，前者明显低于后者(P<0.05);p16蛋白的阳性信号主要位于细胞核和细胞浆(图2)，在胆囊癌和胆囊良性病变中，p16蛋白的阳性表达率分别为48.8%(21/43)和92.9%(13/14)，差异有非常显著性(P<0.01)。
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2.2 p27和p16蛋白的表达与胆囊癌临床病理学特征的关系 胆囊癌患者中有淋巴结转移和远处转移者p27蛋白和p16蛋白表达率明显低于无淋巴结转移和远处转移者(P<0.05)(表1);随临床分期的增加，p27蛋白和p16蛋白的表达率逐渐降低，越近晚期，表达越低，见表2;p27蛋白表达随组织学分级的增加而下降，p16蛋白表达与组织学分级无关，见表3。
表1 p27和p16蛋白的表达与淋巴结转移的关系(略)
表2 p27和p16蛋白的表达与胆囊癌临床分期的关系(略)
表3 p27和p16蛋白的表达与胆囊癌组织分级的关系(略)
2.3 p27蛋白和p16蛋白表达与预后的关系 分别比较p27蛋白和p16蛋白表达阳性的胆囊癌患者与表达阴性的胆囊癌患者的生存率发现，p27蛋白和p16蛋白表达阳性者其一年生存率显著高于阴性表达者。p27蛋白、p16蛋白共同表达阳性者13例，其生存期中位数为14.8个月，而共同表达阴性者7例，其生存期中位数为4.9个月，两组患者生存期差异有显著性(P<0.05)。
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3 讨论
细胞周期受细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)及其抑制剂(CKDIs)的共同调控，这些调控因子活性的改变直接影响细胞周期进程，进而影响细胞的增殖，与肿瘤的发生密切相关。在这些调控因子中，CDKIs的作用尤为重要，p27作为CDKIs家族成员之一，为一种广谱的CDKs抑制蛋白，其基因定位于人染色体12p12-12p13.1，包含两个有编码功能的外显子和一个无功能的外显子及一个内含子 [5～6] 。p27作为细胞周期负性调控因子，广泛抑制各种细胞周期蛋白和激酶的活性，但主要抑制cyclin E-CDK2和cyclin D-CDK4等激酶复合物活性，而cyclin E-CDK2是细胞通过G 1 /S限制点的关键。p27蛋白在恶性肿瘤组织中的表达下降，抑制细胞增生的能力下降，肿瘤细胞得以生长。p27蛋白的表达与肿瘤预后的关系，Loda首次报道了p27在结肠癌中独立的预后意义 [7] ;Tan等研究了202例乳腺癌标本，在多变量分析中表明p27是一个独立的预后因素 [8] 。p16作为CDKIs中的一种，与p27不同，是一种针对CDK4、CDK6的特异性抑制蛋白，其p16基 因定位于人染色体9p21，有三个外显子，编码的蛋白对细胞的分裂增殖起负性调节作用。p16蛋白可与Cyclin1竞争结合CDK4，阻止细胞由G 1 期进入S期。p16基因失活可导致p16蛋白表达缺如，抑制肿瘤增生的能力降低。
, 百拇医药
Hui等研究了胆囊癌、癌前病变及正常胆囊上皮的p27蛋白的表达，结果显示癌前病变及正常胆囊上皮p27蛋白均阳性，而胆囊癌组织的阳性率明显降低，并与细胞的分化程度、淋巴结转移及临床分期显著相关 [9] 。本研究发现，胆囊癌组织中p27蛋白和p16蛋白的表达率均低于胆囊良性病变组织，且随临床分期的增加，p27蛋白和p16蛋白的表达率逐渐降低，越近晚期，表达越低:胆囊癌患者中有淋巴结转移和远处转移者p27蛋白和p16蛋白表达明显低于无淋巴结转移和远处转移者。这表明p27基因和p16基因及其蛋白表达与肿瘤的临床分期及其预后有密切关系，在胆囊癌的发生、发展中起重要作用。研究还发现，胆囊癌患者p27蛋白和p16蛋白表达阳性者其生存率显著高于表达阴性者，p27蛋白和p16蛋白表达阴性者其生存期较阳性者短，这与p27蛋白和p16蛋白表达阴性的胆囊癌患者大多为临床晚期、已有淋巴结转移相吻合。此外，我们发现，p27蛋白表达随胆囊癌组织学分级的增加而下降，而p16蛋白表达与组织学分级无关，这是否与p27是一种广谱的CDKs抑制蛋白有关，或p27较p16相比更能反映胆囊癌的临床病理特征。我们认为，对胆囊癌患者行切除术后，常规检查其p27蛋白和p16蛋白表达水平，对判断其预后及决定其进一步的治疗方案均有一定意义。(本文图片略)
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参考文献
1 Van de Putte G，Holm R，Lie AK.Expression of p27，p21，and p16proˉtein in early squamous cervical cancer and its relation to prognosis.Gyˉnecol Oncol，2003，89(1):140-147.
2 Porter PL，Malone KE，Heagerty PJ，et al.Expression of cell-cycle regˉulators p27Kipl and cyclin E，alone and in combination，correlate with survival in young breast cancer patients.Nat Med，1997，3:222-225.
3 Tsihlias J，Kapusta LR，DeBore G，et al.Loss of cyclin-dependent kiˉnase inhibitor p27Kipl is a novel prognostic factor in localized human prostate adenocarcinoma.Cancer Res，1998，58:542-548.
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4 Masciullo V，Sgambato A，Pacilio C，et al.Frequent loss of expression of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27in epithelial ovarian cancer.Cancer Res，1999，57:3790-3794.
5 Ponce Castaneda MV，Lee M-H，Latres E，et al.p27Kipl:chromosomal mapping to12p12-12p13.1and absence of mutations in human tumors.Cancer Res，1995，55:1211-1214.
6 Serrano M，Hannon GJ，Beach D.A new regulatory motif in cell-cycle controlcausing specific inhibition of cyclin D/CDK4.Nature，1993，366(6456):704-707.
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7 Loda M，Cukor B，Tam SW，et al.Increased proteasome-dependent degradation of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27in aggressive colorectal carcinomas.Nat Med，1997，3:231-234.
8 Tan P，Cady B，Wanner M.The cell cycle inhibitor p27is an indepenˉdent prognostic marker in small invasive breast carcinomas.Cancer Res，1997，57(7):1259-1263.
9 Hui AM，Li X，Shi YZ.p27(Kipl)expression in normal epithelia，preˉcancerous lesions，and carcinomas of the gallbladder:association with cancer progression and prognosis.Hepatology，2000，31(5):1068-1072.
作者单位:1 410006长沙湖南师范大学医学院病理学教研室
2 湖南省肿瘤医院
3 中南大学湘雅医学院
(编辑 小川), http://www.100md.com(彭绍华)