怎样搞好免疫组化染色
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中华中西医杂志 2003年5月 第4卷 第9期
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2003)09-1392-02
随着分子生物学技术的开展，免疫组化技术的应用有了进一步发展，人们对其在诊断和鉴别诊断中的作用有了新的认识。免疫组织化学染色的成功与否，除决定于试剂 的质量及染色各环节的操作外，在很大程度上还决定于标本取材、固定、切片等染色前准备工作。这些准备工作处理不当，在随后的染色过程中往往无法补救，可导致染色失败。
通过我们近年来的研究发现，不同厂商的试剂其反应的时间、结果均有差异，如迈新、博士德或中山等试剂，免疫组化反应过程都是不同的。工作中我们发现要搞好免疫组化染色，必须注意以下几个方面。
1 取材、固定、切片
对病变的选材应尽量避开出血及坏死部位。常用的固定剂有甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等，一般通过2种途径固定抗原，即交联性固定及蛋白沉淀性固定 [1] 。切片时所用载玻片需涂抹粘片剂，以防脱片。免疫组织化学的切片最常用石蜡切片。切片质量的好坏，直接影响染色的效果。
2 抗体与抗原的匹配
使用的一抗必须和二抗匹配，这一点非常重要。比如一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配;或一抗是小鼠的IgM抗体，二抗必须是山羊/兔抗小鼠的IgM二抗。
3 冲洗液与反应试剂的匹配
冲洗液必须和反应试剂匹配，溶液的pH值十分重要。比如说博士德PBS(冲洗液)要求0.1M，而中、迈新等试剂要求PBS为0.01M。
4 抗原修复
抗原修复分化学法和加热法 [2] ，化学法主要是通过一些酶的作用，使抗原决定簇暴露，如:胰蛋白酶、胃蛋白酶、 尿素等。加热法有水浴加热法、微波法和高压法。一般实 验室都可用水浴加热法修复，将片子放入装有柠檬酸缓冲液(pH值为6.0)的容器中，把容器放入装有水的大烧杯中，置电炉上加热至沸腾，使柠檬酸缓冲液中温度>95℃，并持续10min。此方法操作简单、经济，适用于所有实验室。
5 显色剂、复染剂和封片剂必须匹配
如用DAB显色，苏木素复染，封片时，用中性树胶封片效果要比用水性封片剂效果好的多。而用AEC显色，苏木素复染，封片时水性封片剂比中性树胶效果好。
6 显色时间与一抗的关系
一抗孵育时间越长，显色时间越短。一抗孵育时间越短，显色时间越长。显色时间和一抗呈反比。
随着实验研究的不断开展，免疫组化染色方法已成为实验研究不可缺少的方法之一。免疫组化染色的成败，直接关系到实验研究的成败。在免疫组化染色中每一个环节注意不到，都将影响结果，要做出理想的结果，需要注意各个环节。这方面的研究还需要我们不断总结，才能为临床与科研提出诊断治疗的有力依据。
参考文献
1 丁濂，方福德.现代医学实验技巧全书.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1995，167.
2 纪小龙，施作霖.诊断免疫组织化学.北京:军事医学科学出版社，1997，128.
作者单位:721004陕西宝鸡兰州军区神经外科研究所
(编辑 于少伟), 百拇医药(张有兵 杨喜民 刘建新)
随着分子生物学技术的开展，免疫组化技术的应用有了进一步发展，人们对其在诊断和鉴别诊断中的作用有了新的认识。免疫组织化学染色的成功与否，除决定于试剂 的质量及染色各环节的操作外，在很大程度上还决定于标本取材、固定、切片等染色前准备工作。这些准备工作处理不当，在随后的染色过程中往往无法补救，可导致染色失败。
通过我们近年来的研究发现，不同厂商的试剂其反应的时间、结果均有差异，如迈新、博士德或中山等试剂，免疫组化反应过程都是不同的。工作中我们发现要搞好免疫组化染色，必须注意以下几个方面。
1 取材、固定、切片
对病变的选材应尽量避开出血及坏死部位。常用的固定剂有甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等，一般通过2种途径固定抗原，即交联性固定及蛋白沉淀性固定 [1] 。切片时所用载玻片需涂抹粘片剂，以防脱片。免疫组织化学的切片最常用石蜡切片。切片质量的好坏，直接影响染色的效果。
2 抗体与抗原的匹配
使用的一抗必须和二抗匹配，这一点非常重要。比如一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配;或一抗是小鼠的IgM抗体，二抗必须是山羊/兔抗小鼠的IgM二抗。
3 冲洗液与反应试剂的匹配
冲洗液必须和反应试剂匹配，溶液的pH值十分重要。比如说博士德PBS(冲洗液)要求0.1M，而中、迈新等试剂要求PBS为0.01M。
4 抗原修复
抗原修复分化学法和加热法 [2] ，化学法主要是通过一些酶的作用，使抗原决定簇暴露，如:胰蛋白酶、胃蛋白酶、 尿素等。加热法有水浴加热法、微波法和高压法。一般实 验室都可用水浴加热法修复，将片子放入装有柠檬酸缓冲液(pH值为6.0)的容器中，把容器放入装有水的大烧杯中，置电炉上加热至沸腾，使柠檬酸缓冲液中温度>95℃，并持续10min。此方法操作简单、经济，适用于所有实验室。
5 显色剂、复染剂和封片剂必须匹配
如用DAB显色，苏木素复染，封片时，用中性树胶封片效果要比用水性封片剂效果好的多。而用AEC显色，苏木素复染，封片时水性封片剂比中性树胶效果好。
6 显色时间与一抗的关系
一抗孵育时间越长，显色时间越短。一抗孵育时间越短，显色时间越长。显色时间和一抗呈反比。
随着实验研究的不断开展，免疫组化染色方法已成为实验研究不可缺少的方法之一。免疫组化染色的成败，直接关系到实验研究的成败。在免疫组化染色中每一个环节注意不到，都将影响结果，要做出理想的结果，需要注意各个环节。这方面的研究还需要我们不断总结，才能为临床与科研提出诊断治疗的有力依据。
参考文献
1 丁濂，方福德.现代医学实验技巧全书.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1995，167.
2 纪小龙，施作霖.诊断免疫组织化学.北京:军事医学科学出版社，1997，128.
作者单位:721004陕西宝鸡兰州军区神经外科研究所
(编辑 于少伟), 百拇医药(张有兵 杨喜民 刘建新)