HPLC法测定炎可宁片中黄芩苷的含量
【摘要】 目的 建立炎可宁片中黄芩苷的质量标准。方法 采用HPLC法对炎可宁片中黄芩苷进行含量测定，以C 18 化学键合硅胶为固定相，以甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相。结果 平均加样回收率为98.94%，RSD为0.88%。结论 该方法可靠，操作简便，重现性良好，可用于该制剂的质量控制。
关键词 炎可宁片 含量测定 黄芩苷 HPLC
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)13-1184-02
HPLC determination of baicalin in YanKeNing Tablets
Yuan Jianjun
Institute for Drug Control of YanCheng，Jiangsu224002.
, 百拇医药
【Abstract】 Objective To establish quality standard for baicalin in YanKeNing Tablets.Methods Baicalin in YanKeNing Tablets was determination by HPLC with C 18 column and methol-H 2 O-H 3 PO 4 (47∶53∶0.2)as the mobile phase.Results The average recovery rate and RSD were98.94%and0.88%，respectively.Conclusion The results are simple with good reproduction，and the method can be used for quality control of the YanKeNing Tablet.
Key words YanKeNing Tablet determinaion baicalin HPLC
, 百拇医药
炎可宁片是由黄芩、大黄、板蓝根等多种药材配伍而成，具有清热泻火、消炎止痢等功效，而黄芩则具有清热燥湿、泻火解毒等功效，对该制剂的功效具较大的支持作用，而现在所执行的标准 [1] 仅有简单的定性检查，无法真正控制其内在质量，本文中我们选择该制剂君药之一黄芩苷，作为内控指标，采用高效液相色谱法对其所含黄芩苷进行含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-10A高效液相色谱仪;SPD-10A紫外线检测器;CR-6A数据处理机;超声波处理仪(SB3200上海);电子天平(BP211D德国);C 18 硅胶烷基键合柱(日本岛津5U×150mm×4.6)。
1.2 试药 甲醇为色谱纯;水为重蒸馏水;其余试剂均为分析纯;黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:10715—200212);炎可宁片(长春春城制药公司，批号:20021101、20021206、20030215)。
, http://www.100md.com
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱(日本岛津5U×150mm×4.6)。流动相:甲醇-水-磷酸;柱温:室温;流速:0.8ml/min;检测波长:280nm;理论板数不低于2500 [2] 。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml中约含60μg的溶液，精密吸取5ml，加甲醇至10ml，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取本品20片，除去糖衣，研细，精密称取适量(约相当于黄芩0.3g)，置锥形瓶中，加70%乙醇40ml，附回流冷凝管加热回流3h，取出，放冷，滤过，精密吸取续滤液2ml，置10ml量瓶中，用超声后的甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备 取不含黄芩的阴性对照样品 适量，依2.3项下方法制备即得。
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2.5 干扰试验 吸取对照品溶液、供试品溶液以及阴性对照溶液各10μl，分别注入色谱仪，同法测定，结果在黄芩苷相应的位置上或保留时间上，阴性对照样品无干扰，见图1。
图1 黄芩苷对照组、炎可宁片供试品及缺黄芩阴性对照品HPLC色谱图(1)黄芩苷对照品(2)炎可宁片供试品(3)缺黄芩阴性对照品略
2.6 线性关系 精密吸取对照浓溶液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml加甲醇分别稀释至10ml，依次进样，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为A=51612+232783x+20.08，r=0.9996，线性范围为0.12～0.96μg。
2.7 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，按上述色谱条件测定，以外标一点法计算样品中黄芩苷的含量。结果见表1。
, 百拇医药
表1 3批样品的含量测定略
2.8 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，重复进样5次，测定峰面积值，其RSD为0.42%(n=5)。数据见表2。
表2 精密度试验结果略
2.9 稳定性试验 精密吸取供试品溶液20μl，每间隔1h进样1次，共测定了5次，其测得峰面积分别为74786、73483、72552、73668、74271，结果黄芩苷峰面积值基本稳定，RSD为1.15%。
2.10 重复性试验 取同一批号样品5份，精密称定，同法进行含量测定，含量分别为7.80、7.73、7.66、7.87、7.90(mg/片)，结果RSD为1.27%。
2.11 加样回收试验 精密称取已知含量的同一批号样品，取5份供试品各约0.05g，精密称定，置100ml量瓶中，分别精密加入3.30mg/ml的黄芩苷对照品溶液5ml，按供试品溶液的制备法测定，测得平均回收率为98.94%，RSD为0.88%，数据见表3。
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表3 加样回收率试验结果略
3 讨论
本法以甲醇-水-磷酸为流动相，对黄芩苷分离效果好，色谱峰无干扰。黄芩苷在水、乙醇或甲醇中的溶解性均不理想，而易溶于稀醇溶液中，以70%乙醇做提取溶媒为佳。
根据上述试验结果，可拟定炎可宁片每片含黄芩以黄芩苷(C 21 H 18 O 11 )计算，不得少于7.0mg。本法具有操作简单，快速，结果准确，重现性好的特点。
参考文献
1 中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准·中药成方制剂(第8册)，1993，104.
2 卫生部药典委员会.中华人民共和国药典，北京:化学工业出版社，2000，248.
作者单位:224002江苏省盐城药品检验所
(编辑 心怡), http://www.100md.com(袁建军)
关键词 炎可宁片 含量测定 黄芩苷 HPLC
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)13-1184-02
HPLC determination of baicalin in YanKeNing Tablets
Yuan Jianjun
Institute for Drug Control of YanCheng，Jiangsu224002.
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【Abstract】 Objective To establish quality standard for baicalin in YanKeNing Tablets.Methods Baicalin in YanKeNing Tablets was determination by HPLC with C 18 column and methol-H 2 O-H 3 PO 4 (47∶53∶0.2)as the mobile phase.Results The average recovery rate and RSD were98.94%and0.88%，respectively.Conclusion The results are simple with good reproduction，and the method can be used for quality control of the YanKeNing Tablet.
Key words YanKeNing Tablet determinaion baicalin HPLC
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炎可宁片是由黄芩、大黄、板蓝根等多种药材配伍而成，具有清热泻火、消炎止痢等功效，而黄芩则具有清热燥湿、泻火解毒等功效，对该制剂的功效具较大的支持作用，而现在所执行的标准 [1] 仅有简单的定性检查，无法真正控制其内在质量，本文中我们选择该制剂君药之一黄芩苷，作为内控指标，采用高效液相色谱法对其所含黄芩苷进行含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-10A高效液相色谱仪;SPD-10A紫外线检测器;CR-6A数据处理机;超声波处理仪(SB3200上海);电子天平(BP211D德国);C 18 硅胶烷基键合柱(日本岛津5U×150mm×4.6)。
1.2 试药 甲醇为色谱纯;水为重蒸馏水;其余试剂均为分析纯;黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:10715—200212);炎可宁片(长春春城制药公司，批号:20021101、20021206、20030215)。
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2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱(日本岛津5U×150mm×4.6)。流动相:甲醇-水-磷酸;柱温:室温;流速:0.8ml/min;检测波长:280nm;理论板数不低于2500 [2] 。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml中约含60μg的溶液，精密吸取5ml，加甲醇至10ml，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取本品20片，除去糖衣，研细，精密称取适量(约相当于黄芩0.3g)，置锥形瓶中，加70%乙醇40ml，附回流冷凝管加热回流3h，取出，放冷，滤过，精密吸取续滤液2ml，置10ml量瓶中，用超声后的甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备 取不含黄芩的阴性对照样品 适量，依2.3项下方法制备即得。
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2.5 干扰试验 吸取对照品溶液、供试品溶液以及阴性对照溶液各10μl，分别注入色谱仪，同法测定，结果在黄芩苷相应的位置上或保留时间上，阴性对照样品无干扰，见图1。
图1 黄芩苷对照组、炎可宁片供试品及缺黄芩阴性对照品HPLC色谱图(1)黄芩苷对照品(2)炎可宁片供试品(3)缺黄芩阴性对照品略
2.6 线性关系 精密吸取对照浓溶液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml加甲醇分别稀释至10ml，依次进样，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为A=51612+232783x+20.08，r=0.9996，线性范围为0.12～0.96μg。
2.7 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，按上述色谱条件测定，以外标一点法计算样品中黄芩苷的含量。结果见表1。
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表1 3批样品的含量测定略
2.8 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，重复进样5次，测定峰面积值，其RSD为0.42%(n=5)。数据见表2。
表2 精密度试验结果略
2.9 稳定性试验 精密吸取供试品溶液20μl，每间隔1h进样1次，共测定了5次，其测得峰面积分别为74786、73483、72552、73668、74271，结果黄芩苷峰面积值基本稳定，RSD为1.15%。
2.10 重复性试验 取同一批号样品5份，精密称定，同法进行含量测定，含量分别为7.80、7.73、7.66、7.87、7.90(mg/片)，结果RSD为1.27%。
2.11 加样回收试验 精密称取已知含量的同一批号样品，取5份供试品各约0.05g，精密称定，置100ml量瓶中，分别精密加入3.30mg/ml的黄芩苷对照品溶液5ml，按供试品溶液的制备法测定，测得平均回收率为98.94%，RSD为0.88%，数据见表3。
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表3 加样回收率试验结果略
3 讨论
本法以甲醇-水-磷酸为流动相，对黄芩苷分离效果好，色谱峰无干扰。黄芩苷在水、乙醇或甲醇中的溶解性均不理想，而易溶于稀醇溶液中，以70%乙醇做提取溶媒为佳。
根据上述试验结果，可拟定炎可宁片每片含黄芩以黄芩苷(C 21 H 18 O 11 )计算，不得少于7.0mg。本法具有操作简单，快速，结果准确，重现性好的特点。
参考文献
1 中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准·中药成方制剂(第8册)，1993，104.
2 卫生部药典委员会.中华人民共和国药典，北京:化学工业出版社，2000，248.
作者单位:224002江苏省盐城药品检验所
(编辑 心怡), http://www.100md.com(袁建军)