子宫腺肌病组织中细胞凋亡与增殖的研究
【摘要】 目的 探讨子宫腺肌病组织中细胞凋亡和增殖活性的改变。方法 手术切除子宫标本共52例，其中子宫腺肌病30例，正常子宫18例。免疫组化方法检测bcl-2和PCNA在正常子宫内膜、子宫肌层和异位内膜中的表达，采用MPIAS-500图像处理系统进行图像分析。结果 腺肌病组及对照组子宫内膜腺上皮细胞中的bcl-2、PCNA组织学评分均呈现周期性变化，增殖期与分泌期相比差异有显著性(P<0.05)。腺肌病组异位内膜腺上皮和间质细胞bcl-2、PCNA组织学评分增殖期与分泌期无差异(P>0.05)。bcl-2、PCNA组织学评分在腺肌病组在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜腺上皮细胞三者间差异有显著性(P<0.05)，三者间质细胞bcl-2、PCNA组织学评分差异无显著性(P>0.05)。腺肌病组与对照组子宫平滑肌细胞bcl-2、PCNA组织学评分差异无显著性(P>0.05)。结论 腺肌病子宫内膜细胞凋亡减弱的同时增殖能力明显增强，为子宫内膜侵入子宫肌层、异位种植和继续生长创造有利条件，子宫内膜细胞凋亡、增殖失衡可能是子宫腺肌病的发病机理之一。
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关键词 子宫腺肌病 子宫内膜异位症 B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白 增殖细胞核抗原
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)12-1062-03
Study on the apoptosis and proliferation in the
patients with adenomyosis of the uterus
Han Yanhua，Su Yuanyuan
Zhongshan City People’s Hospital，Zhongshan，Guangdong528403.
【Abstract】 Objective To explore the change of apoptosis and proliferative activity in the adenomyosis of the uterus.Methods The study included30patients with histologically proven adenomyosis of the uterus and18patients with normal uterus as control.Immunohistochemical staining was used to detect bcl-2and PCNA expression in differˉent parts of the uterus.A computerized morphometric study on the PCNA expression was performed.Results bcl-2and PCNA expression in ectopic endometrium of adenomyosis showed no cyclic variation(P>0.05).bcl-2and PCˉNA expression of glandular cells in normal endometrium of both groups showed asignificant cyclic variation(P<0.05).bcl-2and PCNA expression of glandular cells in endometrium of adenomyosis was stronger than that in normal endometrium of control group，while bcl-2and PCNA expression in ectopic endometriumwas stronger than that in cuˉtopic endometrium(P<0.05).bcl-2and PCNA expression of stroma cells showed no significant difference between normal endometrium，cutopic endometrium and ectopic endometrium(P>0.05).There was no significant difference in bcl-2andPCNA expression of smooth muscle cells between adenomyosis and control group(P>0.05).Concluˉsion The balancc between apoptosis and proliferation of the endometrium in the adenomyosis uterus was destroyed，the apoptosis was inhibited while proliferation was clearly improved，that provided well conditions for the ectopic enˉdometrium to invasion，plant and grow.
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Key words adenomyosis endometriosis bcl-2 PCNA
为探讨细胞凋亡和增殖在子宫腺肌病(简称腺肌病)发病中的作用，我们用免疫组织化学方法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2，bcl-2)蛋白和增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen，PCNA)在子宫腺肌病组织中的表达，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 研究对象 腺肌病组:2001年11月～2002年4月在我院妇科病房行子宫切除术，经病理检查证实为子宫腺肌病的患者共30例(合并盆腔内异症、异位囊肿者除外)。年龄(43.9±1.2)岁。子宫内膜增殖期16例，分泌期14例。对照组:因子宫脱垂(5例)或附件良性肿物(畸胎瘤5例，囊 腺瘤5例，单纯囊肿3例)与腺肌病组同期住院行子宫切除术，病理证实子宫正常者18例;年龄(44.1±1.0)岁，与腺肌病组相似(P>0.05)。子宫内膜增殖期10例，分泌期8例。两组患者术前半年内都未服用过激素类药物或放置宫内节育器。
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1.2 实验方法
1.2.1 取材 两组子宫切除后，标本立即置4%中性甲醛中固定，常规石蜡包埋，做5μm厚连续切片。
1.2.2 bcl-2、PCNA免疫组织化学测定 按辣根过氧化物酶标记生物素—卵白素(ABC)法常规程序操作。bcl-2、PCNA单克隆抗体及ABC试剂盒均购自武汉博士德公司。
1.2.3 结果判定 bcl-2及PCNA的阳性产物分别位于细胞浆及细胞核，表达强度用组织学评分表示。具体如下:组织学评分=∑pi，其中i代表染色强度，i=0，1，2，3分别表示阴性(无着色细胞)，弱阳性(浅棕黄色)，阳性(棕黄色)，强阳性(深棕黄色)。P代表同一染色强度细胞所占计数细胞百分比，1，2，3，4，5分别表示染色细胞占计数总数的<15%，15%～50%，50%～85%，>85%，100%。在MPIAS-500彩色图像分析系统(同济医科大学清平影像工程公司产品)下进行图像分析。子宫内膜的腺上皮细胞与间质细胞分别计算。每张切片随机选取5个视野(×200)，取组织学评分平均值作为结果。
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1.3 统计学方法 用SAS软件进行统计分析，采用Wilcoxˉon检验、相关分析等方法。
2 结果
2.1 bcl-2免疫组织化学染色结果 腺肌病组及对照组子宫内膜腺上皮和间质细胞中的bcl-2组织学评分均呈现周期性变化，增殖期与分泌期相比差异有显著性(P<0.05)，而腺肌病组异位内膜腺上皮和间质细胞bcl-2组织学评分增殖期与分泌期无差异(P>0.05)。bcl-2组织学评分在腺肌病组在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜腺上皮细胞三者间差异有显著性(P<0.05)，三者间质细胞bcl-2组织学评分差异无显著性(P>0.05)。腺肌病组与对照组子宫平滑肌细胞bcl-2组织学评分差异无显著性，并无周期性变化(P>0.05)。见表1。
表1 腺肌病及对照组子宫内膜腺上皮、间质、平滑肌细胞bcl-2组织学评分 (略)
, 百拇医药 2.2 PCNA免疫组织化学染色结果 腺肌病组及对照组子宫内膜腺上皮中的PCNA组织学评分均呈现周期性变化，增殖期与分泌期相比差异有显著性(P<0.05)，间质细胞的PCNA组织学评分增殖期与分泌期无差异(P>0.05)，而腺肌病组异位内膜腺上皮和间质细胞PCNA组织学评分增殖期与分泌期无差异(P>0.05)。PCNA组织学评分在腺 肌病组在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜腺上皮细胞三者间差异有显著性(P<0.05)，三者间质细胞PCNA组织学评分差异无显著性(P>0.05)。腺肌病组与对照组子宫平滑肌细胞PCNA组织学评分差异无显著性，并无周期性变化(P>0.05)。见表2。
表2 腺肌病及对照组子宫内膜腺上皮、间质、平滑肌细胞PCNA组织学评分 (略)
2.3 bcl-2与PCNA的关系 bcl-2与PCNA在腺肌病组在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜腺上皮细胞的表达有相同的变化趋势，bcl-2组织学评分增加的同时PCNA组织学评分也升高，但相关分析显示两者并无显著相关性(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 bcl-2与子宫腺肌病的关系 bcl-2基因是一种原癌基因，通过阻断凋亡信号传递系统中的最后共同通道而抑制细胞凋亡，bcl-2过度表达可引起增殖性病变或肿瘤发生。Gompel等 [1] 应用免疫组化方法观察到正常子宫内膜中 bcl-2的表达呈周期性变化，Goumenou等 [2] 的研究发现腺肌病子宫内膜bcl-2表达也呈周期性变化，本研究bcl-2在正常子宫内膜中表达的周期性变化与上述结果基本一致，即增殖期表达强于分泌期。说明bcl-2表达与卵巢激素间存在着直接或间接的关系。对照组子宫内膜、腺肌病在位内膜和异位内膜腺上皮细胞的bcl-2组织学评分依次递增，说明腺肌病中bcl-2对子宫内膜腺上皮细胞凋亡的抑制增强，从而导致细胞凋亡减弱和增生异常。Yaˉmamoto [3] 发现，子宫腺肌病异位组织可合成雌激素并升调bcl-2的表达，这与本研究结果一致，反映出局部产生的雌激素对bcl-2表达有影响，也说明bcl-2的表达同时受卵巢激素和局部内环境等多种因素的影响与调节。
, 百拇医药
3.2 PCNA与子宫腺肌病的关系 PCNA是一种36kD的核蛋白，系DNA多聚酶δ的辅助蛋白，是细胞合成期必不可少的调节因子，PCNA在细胞中的表达情况能敏感地反映肿瘤细胞的增殖活性。
PCNA在子宫内膜的表达受卵巢激素调控，本研究两组患者子宫内膜腺上皮和间质细胞中都有PCNA表达，腺上皮增殖期水平高于分泌期，与Li等 [4] 的研究结果相似，说明PCNA在子宫内膜的表达受卵巢激素调节，而且增殖期子宫内膜细胞处于高度增生状态，有利于子宫内膜的修复、增厚。Wingfield等 [5] 报道异位症患者子宫内膜PCNA表达显著高于正常人，本研究结果显示腺肌病患者子宫内膜PCNA组织学评分显著高于对照组，说明腺肌病患者子宫内膜的增殖能力增强，更适于异位生长。已有研究报道PCNA在异位内膜有阳性表达，但无周期性变化 [5，6] ，本研究结果显示腺肌病异位内膜也有PCNA表达，腺上皮细胞组织学评分高于在位内膜，可能子宫内膜异位种植后受局部激素调节，增殖活性又进一步升高。
, 百拇医药
3.3 细胞凋亡与增殖在子宫腺肌病发病中的作用 子宫腺肌病的发病机理尚不明确，很多学者支持子宫内膜侵入学说:子宫内膜缺乏粘膜下层，在正常情况下，基底层具有一定的抵制内膜向肌层方向生长的作用，由于某种因素破坏了这种作用而使内膜向肌层内生长，但对这些破坏因素的研究结果尚不十分明了。细胞凋亡是一种由基因控制的细胞自主性死亡过程，是维持机体内环境稳定的重要机理之一。本研究发现，bcl-2及PCNA在腺肌病子宫内膜腺上皮细胞中组织学评分均高于对照组子宫内膜，说明腺肌 病子宫内膜在生长和分化机理上与正常子宫内膜有所不同，腺肌病子宫内膜的细胞凋亡减弱导致子宫内膜组织内环境稳定的破坏，削弱了子宫内膜基底层的防御功能，而腺肌病子宫内膜细胞凋亡减弱的同时增殖能力明显增强，致使过度增殖的子宫内膜组织突破薄弱的子宫内膜基底层向子宫肌层侵入并继续生长。
综上所述，子宫内膜细胞凋亡、增殖失衡可能是子宫腺肌病的发病机理之一。
参考文献
, 百拇医药
1 Gomple A，Sabourin JC，Martin A，et al.bcl-2expression in normal endometrium during the menstrual cycle.Am J Pathol，1994，144:1195-1202.
2 Goumenou A，Panayiotides I，Matalliotakis I，et al.Bcl-2and Bax exˉpression in human endometriotic and adenomyotic tissues.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2001，99:256-260.
3 Yamamoto TY.Evidence for estrogen synthesis in adenomyotic tissues.Am J Obstet Gynecol，1993，169:734-737.
, 百拇医药
4 Li SF，Nakayama K，Masuzawa H，et al.The number of proliferating cell nuclear antigen positive cells in endometrioc leisions differ from that in the endometrium.Analysis of PCNA positive cells during the menstrual cycle and in post-menopause.Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol，1993，423:257-263.
5 Wingfield M，Macphersion A，Healy DL，et al.Cell proliferation is inˉcreased in the endometrium of women with endometriosis.Fertil Steril，1995，64:340-346.
6 Fujishita A，Hasuo A，Khan KN，et al.Immunohistochemical study of anˉgiogenic factors in endometrium and endometriosis.Gynecol Obstet Inˉvest，1999，48:36-44.
作者单位:528403广东省中山市人民医院妇产科
(收稿日期:2003-08-24)
(编辑 秋实), http://www.100md.com(韩燕华)
, http://www.100md.com
关键词 子宫腺肌病 子宫内膜异位症 B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白 增殖细胞核抗原
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)12-1062-03
Study on the apoptosis and proliferation in the
patients with adenomyosis of the uterus
Han Yanhua，Su Yuanyuan
Zhongshan City People’s Hospital，Zhongshan，Guangdong528403.
【Abstract】 Objective To explore the change of apoptosis and proliferative activity in the adenomyosis of the uterus.Methods The study included30patients with histologically proven adenomyosis of the uterus and18patients with normal uterus as control.Immunohistochemical staining was used to detect bcl-2and PCNA expression in differˉent parts of the uterus.A computerized morphometric study on the PCNA expression was performed.Results bcl-2and PCNA expression in ectopic endometrium of adenomyosis showed no cyclic variation(P>0.05).bcl-2and PCˉNA expression of glandular cells in normal endometrium of both groups showed asignificant cyclic variation(P<0.05).bcl-2and PCNA expression of glandular cells in endometrium of adenomyosis was stronger than that in normal endometrium of control group，while bcl-2and PCNA expression in ectopic endometriumwas stronger than that in cuˉtopic endometrium(P<0.05).bcl-2and PCNA expression of stroma cells showed no significant difference between normal endometrium，cutopic endometrium and ectopic endometrium(P>0.05).There was no significant difference in bcl-2andPCNA expression of smooth muscle cells between adenomyosis and control group(P>0.05).Concluˉsion The balancc between apoptosis and proliferation of the endometrium in the adenomyosis uterus was destroyed，the apoptosis was inhibited while proliferation was clearly improved，that provided well conditions for the ectopic enˉdometrium to invasion，plant and grow.
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Key words adenomyosis endometriosis bcl-2 PCNA
为探讨细胞凋亡和增殖在子宫腺肌病(简称腺肌病)发病中的作用，我们用免疫组织化学方法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2，bcl-2)蛋白和增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen，PCNA)在子宫腺肌病组织中的表达，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 研究对象 腺肌病组:2001年11月～2002年4月在我院妇科病房行子宫切除术，经病理检查证实为子宫腺肌病的患者共30例(合并盆腔内异症、异位囊肿者除外)。年龄(43.9±1.2)岁。子宫内膜增殖期16例，分泌期14例。对照组:因子宫脱垂(5例)或附件良性肿物(畸胎瘤5例，囊 腺瘤5例，单纯囊肿3例)与腺肌病组同期住院行子宫切除术，病理证实子宫正常者18例;年龄(44.1±1.0)岁，与腺肌病组相似(P>0.05)。子宫内膜增殖期10例，分泌期8例。两组患者术前半年内都未服用过激素类药物或放置宫内节育器。
, http://www.100md.com
1.2 实验方法
1.2.1 取材 两组子宫切除后，标本立即置4%中性甲醛中固定，常规石蜡包埋，做5μm厚连续切片。
1.2.2 bcl-2、PCNA免疫组织化学测定 按辣根过氧化物酶标记生物素—卵白素(ABC)法常规程序操作。bcl-2、PCNA单克隆抗体及ABC试剂盒均购自武汉博士德公司。
1.2.3 结果判定 bcl-2及PCNA的阳性产物分别位于细胞浆及细胞核，表达强度用组织学评分表示。具体如下:组织学评分=∑pi，其中i代表染色强度，i=0，1，2，3分别表示阴性(无着色细胞)，弱阳性(浅棕黄色)，阳性(棕黄色)，强阳性(深棕黄色)。P代表同一染色强度细胞所占计数细胞百分比，1，2，3，4，5分别表示染色细胞占计数总数的<15%，15%～50%，50%～85%，>85%，100%。在MPIAS-500彩色图像分析系统(同济医科大学清平影像工程公司产品)下进行图像分析。子宫内膜的腺上皮细胞与间质细胞分别计算。每张切片随机选取5个视野(×200)，取组织学评分平均值作为结果。
, http://www.100md.com
1.3 统计学方法 用SAS软件进行统计分析，采用Wilcoxˉon检验、相关分析等方法。
2 结果
2.1 bcl-2免疫组织化学染色结果 腺肌病组及对照组子宫内膜腺上皮和间质细胞中的bcl-2组织学评分均呈现周期性变化，增殖期与分泌期相比差异有显著性(P<0.05)，而腺肌病组异位内膜腺上皮和间质细胞bcl-2组织学评分增殖期与分泌期无差异(P>0.05)。bcl-2组织学评分在腺肌病组在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜腺上皮细胞三者间差异有显著性(P<0.05)，三者间质细胞bcl-2组织学评分差异无显著性(P>0.05)。腺肌病组与对照组子宫平滑肌细胞bcl-2组织学评分差异无显著性，并无周期性变化(P>0.05)。见表1。
表1 腺肌病及对照组子宫内膜腺上皮、间质、平滑肌细胞bcl-2组织学评分 (略)
, 百拇医药 2.2 PCNA免疫组织化学染色结果 腺肌病组及对照组子宫内膜腺上皮中的PCNA组织学评分均呈现周期性变化，增殖期与分泌期相比差异有显著性(P<0.05)，间质细胞的PCNA组织学评分增殖期与分泌期无差异(P>0.05)，而腺肌病组异位内膜腺上皮和间质细胞PCNA组织学评分增殖期与分泌期无差异(P>0.05)。PCNA组织学评分在腺 肌病组在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜腺上皮细胞三者间差异有显著性(P<0.05)，三者间质细胞PCNA组织学评分差异无显著性(P>0.05)。腺肌病组与对照组子宫平滑肌细胞PCNA组织学评分差异无显著性，并无周期性变化(P>0.05)。见表2。
表2 腺肌病及对照组子宫内膜腺上皮、间质、平滑肌细胞PCNA组织学评分 (略)
2.3 bcl-2与PCNA的关系 bcl-2与PCNA在腺肌病组在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜腺上皮细胞的表达有相同的变化趋势，bcl-2组织学评分增加的同时PCNA组织学评分也升高，但相关分析显示两者并无显著相关性(P>0.05)。
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3 讨论
3.1 bcl-2与子宫腺肌病的关系 bcl-2基因是一种原癌基因，通过阻断凋亡信号传递系统中的最后共同通道而抑制细胞凋亡，bcl-2过度表达可引起增殖性病变或肿瘤发生。Gompel等 [1] 应用免疫组化方法观察到正常子宫内膜中 bcl-2的表达呈周期性变化，Goumenou等 [2] 的研究发现腺肌病子宫内膜bcl-2表达也呈周期性变化，本研究bcl-2在正常子宫内膜中表达的周期性变化与上述结果基本一致，即增殖期表达强于分泌期。说明bcl-2表达与卵巢激素间存在着直接或间接的关系。对照组子宫内膜、腺肌病在位内膜和异位内膜腺上皮细胞的bcl-2组织学评分依次递增，说明腺肌病中bcl-2对子宫内膜腺上皮细胞凋亡的抑制增强，从而导致细胞凋亡减弱和增生异常。Yaˉmamoto [3] 发现，子宫腺肌病异位组织可合成雌激素并升调bcl-2的表达，这与本研究结果一致，反映出局部产生的雌激素对bcl-2表达有影响，也说明bcl-2的表达同时受卵巢激素和局部内环境等多种因素的影响与调节。
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3.2 PCNA与子宫腺肌病的关系 PCNA是一种36kD的核蛋白，系DNA多聚酶δ的辅助蛋白，是细胞合成期必不可少的调节因子，PCNA在细胞中的表达情况能敏感地反映肿瘤细胞的增殖活性。
PCNA在子宫内膜的表达受卵巢激素调控，本研究两组患者子宫内膜腺上皮和间质细胞中都有PCNA表达，腺上皮增殖期水平高于分泌期，与Li等 [4] 的研究结果相似，说明PCNA在子宫内膜的表达受卵巢激素调节，而且增殖期子宫内膜细胞处于高度增生状态，有利于子宫内膜的修复、增厚。Wingfield等 [5] 报道异位症患者子宫内膜PCNA表达显著高于正常人，本研究结果显示腺肌病患者子宫内膜PCNA组织学评分显著高于对照组，说明腺肌病患者子宫内膜的增殖能力增强，更适于异位生长。已有研究报道PCNA在异位内膜有阳性表达，但无周期性变化 [5，6] ，本研究结果显示腺肌病异位内膜也有PCNA表达，腺上皮细胞组织学评分高于在位内膜，可能子宫内膜异位种植后受局部激素调节，增殖活性又进一步升高。
, 百拇医药
3.3 细胞凋亡与增殖在子宫腺肌病发病中的作用 子宫腺肌病的发病机理尚不明确，很多学者支持子宫内膜侵入学说:子宫内膜缺乏粘膜下层，在正常情况下，基底层具有一定的抵制内膜向肌层方向生长的作用，由于某种因素破坏了这种作用而使内膜向肌层内生长，但对这些破坏因素的研究结果尚不十分明了。细胞凋亡是一种由基因控制的细胞自主性死亡过程，是维持机体内环境稳定的重要机理之一。本研究发现，bcl-2及PCNA在腺肌病子宫内膜腺上皮细胞中组织学评分均高于对照组子宫内膜，说明腺肌 病子宫内膜在生长和分化机理上与正常子宫内膜有所不同，腺肌病子宫内膜的细胞凋亡减弱导致子宫内膜组织内环境稳定的破坏，削弱了子宫内膜基底层的防御功能，而腺肌病子宫内膜细胞凋亡减弱的同时增殖能力明显增强，致使过度增殖的子宫内膜组织突破薄弱的子宫内膜基底层向子宫肌层侵入并继续生长。
综上所述，子宫内膜细胞凋亡、增殖失衡可能是子宫腺肌病的发病机理之一。
参考文献
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1 Gomple A，Sabourin JC，Martin A，et al.bcl-2expression in normal endometrium during the menstrual cycle.Am J Pathol，1994，144:1195-1202.
2 Goumenou A，Panayiotides I，Matalliotakis I，et al.Bcl-2and Bax exˉpression in human endometriotic and adenomyotic tissues.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2001，99:256-260.
3 Yamamoto TY.Evidence for estrogen synthesis in adenomyotic tissues.Am J Obstet Gynecol，1993，169:734-737.
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4 Li SF，Nakayama K，Masuzawa H，et al.The number of proliferating cell nuclear antigen positive cells in endometrioc leisions differ from that in the endometrium.Analysis of PCNA positive cells during the menstrual cycle and in post-menopause.Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol，1993，423:257-263.
5 Wingfield M，Macphersion A，Healy DL，et al.Cell proliferation is inˉcreased in the endometrium of women with endometriosis.Fertil Steril，1995，64:340-346.
6 Fujishita A，Hasuo A，Khan KN，et al.Immunohistochemical study of anˉgiogenic factors in endometrium and endometriosis.Gynecol Obstet Inˉvest，1999，48:36-44.
作者单位:528403广东省中山市人民医院妇产科
(收稿日期:2003-08-24)
(编辑 秋实), http://www.100md.com(韩燕华)