前列腺癌转移相关基因CD44的表达及意义
【摘要】 目的 探讨标准型CD44s及变异型CD44v6在前列腺癌mRNA水平的表达与前列腺癌生物学行为的关系。方法 用RT-PCR方法，检测了CD44s及CD44v6在38例前列腺癌组织中mRNA水平的表达。结果 正常与增生前列腺组织均显示了CD44s RT-PCR产物482bp带型，未出现CD44v6带型。C期以内的前列腺癌组织有13例(13/19，68.4%)，D期有6例(6/19，31.5%)，CD44s RT-PCR产物显示了482bp的带型。正常人及增生组织与癌组织CD44s mRNA水平的表达差异有显著性(χ 2 =9.815，P<0.05)。C期以内与D期的前列腺癌组织在CD44s mRNA水平的表达差异有显著性(χ 2 =8.376，P<0.05)，D期的前列腺癌有14例(14/19，73.7%)，C期以内有5例(5/19，26.3%)出现了CD44v6片段。CD44v6的阳性表达在D期与C期以内的前列腺癌之间存在统计学差异性(χ 2 =19.023，P<0.01)。5例C期以内出现CD44v6表达者，有3例在18～24个月相继出现骨转移。结论 转移性前列腺癌组织中CD44s表达的下调及出现CD44v6表达可作为前列腺癌转移的参考指标。
, 百拇医药
关键词 前列腺癌 CD44基因 转移抑制基因 逆转录聚合酶链反应
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2003)10-0868-02
Expression of CD44in mRNA level in prostate carcinoma
Chen Wei，Chen Lingwu，Qiu Shaopeng，et al.
Department of Urology，First Affiliated Hospital of Zhongshan University，Guangzhou 510080.
【Abstract】 Objective To study the expression of CD44in mRNA level in prostate carcinoma.Methods Expession of standard CD44and its variant6were detected in prostate cancer with RT-PCR in38cases.Results All normal prostate and BPH yielded a prominent CD44s RT-PCR product at482bp，but without CD44v6RT-PCR product.Prostate cancer in13(68.4%)cases below stage C presented a CD44s RT-PCR product at482bp.6cases(31.5%)of prostate cancer in stage D showed CD44s RT-PCR product.There was a difference in mRNA level beˉtween prostate cancer and BPH(P<0.05).There was also a difference in mRNA level between stage D and those within stage C prostate cancer(P<0.05).14cases(14/19，73.7%)in stage D，5cases(5/19，26.3%)below stage C presented a CD44v6RT-PCR product.There was a difference in positive expression of CD44v6RT-PCR product between stage D and those below stageC prostate cancer(P<0.05).3out of5cases below stage C who showed posiˉtive expression of CD44v6presented bone metastasis within18～24months.Conclusion Down regulate expression of CD44s and presence of CD44v6expression may indicate metastasis of prostate cancer.
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Key words CD44gene prostate neoplasma reverse transcriptase polymerase chain
reaction
前列腺癌的转移是一个复杂的过程，为探讨前列腺癌的生物学行为，我们对标准型及变异型CD44在前列腺癌中mRNA水平的表达进行了研究，报告如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料 收集前列腺癌标本38例，年龄59～86岁，平均年龄68.3岁。临床分期B期以内3例，C期16例，D期19例;病理分级:低分化腺癌23例，中分化腺癌10例，高分化腺癌5例。全部行睾丸切除去势治疗，3例B期以内者行前列腺癌根治手术。病例随访12～36个月，每3个月复查1次PSA、直肠指检及直肠B超，必要时复查全身骨扫描;随访结果:27例存活，其中9例术后12～18个月出现症状加重，加用辅助治疗或放疗;失访6例，死亡5例。
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1.2 方法
1.2.1 标本收集 标本为经直肠B超引导下的穿刺或手术标本，标本尽快于半小时内置入-80℃低温冰箱内保存，准备行RT-PCR研究。以手术切除的前列腺增生标本20例及10例源于尸检的正常前列腺组织作为对照。
1.2.2 RT-PCR RNA抽提:用GIBCOBRL公司的TRIZOL试剂盒进行RNA抽提。按试剂盒说明进行RNA抽提，总RNA经紫外线分光光度计定量，分光光度计测量A 260 /A 280 比值<1.6，琼脂糖凝胶电泳出现18s及28s带。cDNA合成:取5μl总RNA，逆转录反应体系为20μl，按操作说明合成cDNA。PCR反应:取cDNA5μl加入PCR反应体系，上游引物Primer1:5′-TCC AGG CAA CTC CTA GTA GTA CAA0.2μl;下游引物Primer2∶5′-CAA CTG TCC CTG TTG TCG AA0.2μl，反应体积为26μl，循环参数为94℃1min，55℃1min，72℃1min，共35个循环。所得产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭荧光染色，测算各条带的分子量。
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1.2.3 结果分析 PCR扩增产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭荧光染色，CD44s mRNA阳性者可见482bp条带。1.2.4 统计学方法 采用χ 2 检验及四格表精确概率法(Fisher’s exact test)进行显著检验，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
RT-PCR结果:10例正常及20例增生组织抽提的RNA均显示了18s及28s带;38例癌组织也出现了明显的18s及28s带，说明RNA抽提较满意。正常及增生组织均显示了CD44s RT-PCR产物482bp带型。C期以内的癌组织有13例(13/19，68.4%)CD44s RT-PCR产物显示了482bp的带型。D期有6例(6/19，31.5%)CD44s RT-PCR产物显示了482bp的带型。正常及增生组织与癌组织CD44s mRˉNA水平的表达差异有显著性(χ 2 =9.815，P<0.05)。C期以内的与D期的前列腺癌组织在CD44s mRNA水平的表达差异也有显著性(χ 2 =8.376，P<0.05)。D期有14例(14/19，73.7%)CD44v6RT-PCR产物显示了550bp的带型;C期以内的有5例(5/19，26.3%)出现了CD44v6片段。CD44v6的阳性表达在D期与C期以内的前列腺癌之间存在统计学差异性(χ 2 =19.023，P<0.01)。临床随访过程中5例C期以内出现CD44v6表达者，有3例在18～24个月相继出现骨转移，提示CD44v6的表达与转移可能有关。正常及增生组织均未出现RT-PCR CD44v6带型。
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3 讨论
CD44在前列腺癌中的表达还没有较详细的资料。有报道 [1～3] 报告了CD44在人类雄激素依赖性前列腺癌中的表达减少，而在雄激素依赖性的前列腺癌中的表达增多;其中有学者发现在正常前列腺组织中CD44的表达水平较低，而在前列腺癌中则有CD44mRNA水平的表达;相反另有学者却报道不管在蛋白水平还是mRNA水平，前列腺癌均无CD44表达。本组资料显示:前列腺增生组织，正常前列腺组织RT-PCR产物均显示CD44s的带型;C期以内的前列腺癌组织有13例(13/19，68.4%)，D期有6例(31.5%)RT-PCR产物出了CD44s带型;CD44s的表达在前列腺癌组织中呈下调趋势(P<0.05)。而D期的前列腺癌有14例(14/19，73.7%)C期以内有5例(26.3%)RT-PCR产物显示了CD44v6带型，两者比较也有统计学意义(P<0.05);而且在随访过程中5例C期以内前列腺癌出现CD44v6表达者，有3例在18～24个月相继出现骨转移，提示CD44v6的表达与转移可能有关。
, 百拇医药
Gao [4] 等通过微细胞介导染色体转移技术来定位前列腺癌转移抑制基因，发现在11号染色体短臂11、12、13区域存在有转移抑制基因，随后通过位置克隆技术证实其位于11.2，并命名为AAI1 [5～7] ，其转染诱导表达能抑制AT6.1鼠前列腺癌细胞的转移，但不能抑制AT3.1鼠前列腺癌细胞的转移能力，提示在11号染色体短臂11.2-13区还存在其它肿瘤抑制基因，随后证实CD44基因位于11号染色体短臂13区，CD44表达的下调与鼠前列腺癌转移潜能密切相关，转染诱导CD44s的表达可抑制AT3.1鼠前列腺癌细胞向肺的转移，提示CD44就是一个前列腺癌转移抑制基因，如果CD44表达降低或缺失，意味着前列腺癌已发生转移。这与本组结果是相吻合的。
参考文献
1 Lokeshwar BL，Lokeshwar VB，Block NL.Expression of CD44in prostate cancer
, 百拇医药
cells:association with cell proliferation and invasive potential.Anticancer Res，1995，15:1191-1198.
2 Welsh CF，Zhu D，Bourguignon LYW.Interaction of CD44variant isoˉforms with hyaluronic acid and the cytoskeleton in human prostate cancer cells.J Cell physiol，1995，164:605-612.
3 Liu AY.Expression of CD44in prostate cancer cells.Cancer Lett，1994，76:63-69.
4 Gao AC，Lou W，Dong JT，et al.CD44is a metastasis suppressor gene for prostatic cancer located on human chromosome11p13.Cancer Res，1997，57:846-849.
, 百拇医药
5 Dong JT，Lamb PW，Rinker-schaeffer CW，et al.KAI1a metastasis suppression gene for prostatic cancer on human chromosome11p11.2.Science，1995，268:884-886.
6 Dong JT，Suzki H，Pinss，et al.Down-regulation of the KAI1metastasis suppression gene during the progression of human prostatic cancer infreˉquently involves gene mutation or allelic loss.Cancer Res，1996，56:4387-4390.
7 Ueda T，Lchikawa T，Tamaru J，et al.Expression of the KAI1protein in benign prostatic hyperplasia and prostate cancer.Am J Pathol，1996，149:1435-1440.
作者单位:510080中山大学附属第一医院泌尿外科
(收稿日期:2003-09-27)
(编辑 刘娜), http://www.100md.com(陈炜)
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关键词 前列腺癌 CD44基因 转移抑制基因 逆转录聚合酶链反应
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2003)10-0868-02
Expression of CD44in mRNA level in prostate carcinoma
Chen Wei，Chen Lingwu，Qiu Shaopeng，et al.
Department of Urology，First Affiliated Hospital of Zhongshan University，Guangzhou 510080.
【Abstract】 Objective To study the expression of CD44in mRNA level in prostate carcinoma.Methods Expession of standard CD44and its variant6were detected in prostate cancer with RT-PCR in38cases.Results All normal prostate and BPH yielded a prominent CD44s RT-PCR product at482bp，but without CD44v6RT-PCR product.Prostate cancer in13(68.4%)cases below stage C presented a CD44s RT-PCR product at482bp.6cases(31.5%)of prostate cancer in stage D showed CD44s RT-PCR product.There was a difference in mRNA level beˉtween prostate cancer and BPH(P<0.05).There was also a difference in mRNA level between stage D and those within stage C prostate cancer(P<0.05).14cases(14/19，73.7%)in stage D，5cases(5/19，26.3%)below stage C presented a CD44v6RT-PCR product.There was a difference in positive expression of CD44v6RT-PCR product between stage D and those below stageC prostate cancer(P<0.05).3out of5cases below stage C who showed posiˉtive expression of CD44v6presented bone metastasis within18～24months.Conclusion Down regulate expression of CD44s and presence of CD44v6expression may indicate metastasis of prostate cancer.
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Key words CD44gene prostate neoplasma reverse transcriptase polymerase chain
reaction
前列腺癌的转移是一个复杂的过程，为探讨前列腺癌的生物学行为，我们对标准型及变异型CD44在前列腺癌中mRNA水平的表达进行了研究，报告如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料 收集前列腺癌标本38例，年龄59～86岁，平均年龄68.3岁。临床分期B期以内3例，C期16例，D期19例;病理分级:低分化腺癌23例，中分化腺癌10例，高分化腺癌5例。全部行睾丸切除去势治疗，3例B期以内者行前列腺癌根治手术。病例随访12～36个月，每3个月复查1次PSA、直肠指检及直肠B超，必要时复查全身骨扫描;随访结果:27例存活，其中9例术后12～18个月出现症状加重，加用辅助治疗或放疗;失访6例，死亡5例。
, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 标本收集 标本为经直肠B超引导下的穿刺或手术标本，标本尽快于半小时内置入-80℃低温冰箱内保存，准备行RT-PCR研究。以手术切除的前列腺增生标本20例及10例源于尸检的正常前列腺组织作为对照。
1.2.2 RT-PCR RNA抽提:用GIBCOBRL公司的TRIZOL试剂盒进行RNA抽提。按试剂盒说明进行RNA抽提，总RNA经紫外线分光光度计定量，分光光度计测量A 260 /A 280 比值<1.6，琼脂糖凝胶电泳出现18s及28s带。cDNA合成:取5μl总RNA，逆转录反应体系为20μl，按操作说明合成cDNA。PCR反应:取cDNA5μl加入PCR反应体系，上游引物Primer1:5′-TCC AGG CAA CTC CTA GTA GTA CAA0.2μl;下游引物Primer2∶5′-CAA CTG TCC CTG TTG TCG AA0.2μl，反应体积为26μl，循环参数为94℃1min，55℃1min，72℃1min，共35个循环。所得产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭荧光染色，测算各条带的分子量。
, 百拇医药
1.2.3 结果分析 PCR扩增产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭荧光染色，CD44s mRNA阳性者可见482bp条带。1.2.4 统计学方法 采用χ 2 检验及四格表精确概率法(Fisher’s exact test)进行显著检验，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
RT-PCR结果:10例正常及20例增生组织抽提的RNA均显示了18s及28s带;38例癌组织也出现了明显的18s及28s带，说明RNA抽提较满意。正常及增生组织均显示了CD44s RT-PCR产物482bp带型。C期以内的癌组织有13例(13/19，68.4%)CD44s RT-PCR产物显示了482bp的带型。D期有6例(6/19，31.5%)CD44s RT-PCR产物显示了482bp的带型。正常及增生组织与癌组织CD44s mRˉNA水平的表达差异有显著性(χ 2 =9.815，P<0.05)。C期以内的与D期的前列腺癌组织在CD44s mRNA水平的表达差异也有显著性(χ 2 =8.376，P<0.05)。D期有14例(14/19，73.7%)CD44v6RT-PCR产物显示了550bp的带型;C期以内的有5例(5/19，26.3%)出现了CD44v6片段。CD44v6的阳性表达在D期与C期以内的前列腺癌之间存在统计学差异性(χ 2 =19.023，P<0.01)。临床随访过程中5例C期以内出现CD44v6表达者，有3例在18～24个月相继出现骨转移，提示CD44v6的表达与转移可能有关。正常及增生组织均未出现RT-PCR CD44v6带型。
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3 讨论
CD44在前列腺癌中的表达还没有较详细的资料。有报道 [1～3] 报告了CD44在人类雄激素依赖性前列腺癌中的表达减少，而在雄激素依赖性的前列腺癌中的表达增多;其中有学者发现在正常前列腺组织中CD44的表达水平较低，而在前列腺癌中则有CD44mRNA水平的表达;相反另有学者却报道不管在蛋白水平还是mRNA水平，前列腺癌均无CD44表达。本组资料显示:前列腺增生组织，正常前列腺组织RT-PCR产物均显示CD44s的带型;C期以内的前列腺癌组织有13例(13/19，68.4%)，D期有6例(31.5%)RT-PCR产物出了CD44s带型;CD44s的表达在前列腺癌组织中呈下调趋势(P<0.05)。而D期的前列腺癌有14例(14/19，73.7%)C期以内有5例(26.3%)RT-PCR产物显示了CD44v6带型，两者比较也有统计学意义(P<0.05);而且在随访过程中5例C期以内前列腺癌出现CD44v6表达者，有3例在18～24个月相继出现骨转移，提示CD44v6的表达与转移可能有关。
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Gao [4] 等通过微细胞介导染色体转移技术来定位前列腺癌转移抑制基因，发现在11号染色体短臂11、12、13区域存在有转移抑制基因，随后通过位置克隆技术证实其位于11.2，并命名为AAI1 [5～7] ，其转染诱导表达能抑制AT6.1鼠前列腺癌细胞的转移，但不能抑制AT3.1鼠前列腺癌细胞的转移能力，提示在11号染色体短臂11.2-13区还存在其它肿瘤抑制基因，随后证实CD44基因位于11号染色体短臂13区，CD44表达的下调与鼠前列腺癌转移潜能密切相关，转染诱导CD44s的表达可抑制AT3.1鼠前列腺癌细胞向肺的转移，提示CD44就是一个前列腺癌转移抑制基因，如果CD44表达降低或缺失，意味着前列腺癌已发生转移。这与本组结果是相吻合的。
参考文献
1 Lokeshwar BL，Lokeshwar VB，Block NL.Expression of CD44in prostate cancer
, 百拇医药
cells:association with cell proliferation and invasive potential.Anticancer Res，1995，15:1191-1198.
2 Welsh CF，Zhu D，Bourguignon LYW.Interaction of CD44variant isoˉforms with hyaluronic acid and the cytoskeleton in human prostate cancer cells.J Cell physiol，1995，164:605-612.
3 Liu AY.Expression of CD44in prostate cancer cells.Cancer Lett，1994，76:63-69.
4 Gao AC，Lou W，Dong JT，et al.CD44is a metastasis suppressor gene for prostatic cancer located on human chromosome11p13.Cancer Res，1997，57:846-849.
, 百拇医药
5 Dong JT，Lamb PW，Rinker-schaeffer CW，et al.KAI1a metastasis suppression gene for prostatic cancer on human chromosome11p11.2.Science，1995，268:884-886.
6 Dong JT，Suzki H，Pinss，et al.Down-regulation of the KAI1metastasis suppression gene during the progression of human prostatic cancer infreˉquently involves gene mutation or allelic loss.Cancer Res，1996，56:4387-4390.
7 Ueda T，Lchikawa T，Tamaru J，et al.Expression of the KAI1protein in benign prostatic hyperplasia and prostate cancer.Am J Pathol，1996，149:1435-1440.
作者单位:510080中山大学附属第一医院泌尿外科
(收稿日期:2003-09-27)
(编辑 刘娜), http://www.100md.com(陈炜)