琥珀酸脱氢酶和乙酰胆碱酯酶混合染色显示骨骼肌运动终板的探讨
【摘要】 目的 显示不同型骨骼肌纤维和运动终板的结构。方法 用琥珀酸脱氢酶和乙酰胆碱酯酶共同染色，显示各型骨骼肌纤维及其支配骨骼肌纤维的运动终板。结果 肌组织呈现蓝色沉淀，而神经纤维和运动终板为棕黑色。结论琥珀酸脱氢酶和乙酰胆碱酯酶共同染色可以清晰显示各型骨骼肌纤维的运动神经末梢的各种结构。
关键词 琥珀酸脱氢酶 乙酰胆碱酯酶 骨骼肌 运动终板 鼠科
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-077X(2003)11-0976-02
Staining with succinate dehydrogenase and acetylcholinase to show skeletalmotor unit
Zhou Zhen
Department of Surgery，Qingdao University Medical College，Qingdao266021.
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To show motor unit of different type skeletals.Methods Stain the skeletal muscles with succinate dehydrogenase(SDH)and acetylcholinase(ACH)to show motor unit of different type skeletals.Reˉsults There are blue sedimentations in cytoplasms of muscles;and brownish black sedimentations in nerve fiber and motor end plate.Conclusion Synstaining with succinate dehydrogenase and acetycholinase can display the clear structures of somatic motor nerve ending.
, 百拇医药
Key words succinate dehydrogenase acetylcholinase skeletal muscle motor nerve ending rat farmily
骨骼肌是维持身体姿势和实现各种运动的主要器官，运动终板是神经的兴奋传递到骨骼肌的结构，调节肌肉的收缩和舒张。在神经系统的教学及科研工作中，为了清楚地显示躯体运动神经末梢与骨骼肌的结构特点，我们根据文献资料 [1，2] 及反复实验，获得了比较满意的显示骨骼肌及运动终板的染色方法。现叙述如下。
1 材料与方法
1.1 实验对象与组织取材 取健康大白鼠12只，体重250～300g，分别取其股四头肌，8%多聚甲醛固定，切片。
1.2 染色步骤
, 百拇医药 1.2.1 琥珀酸脱氢酶染色 (1)切片入孵育液37℃60min。(2)蒸馏水洗3次。(3)再依次快速进体积分数为0.30，0.60的丙酮液各5min。(4)蒸馏水洗3次。(5)依次入体积分数为0.75，0.85，0.95，1.00的乙醇溶液各5min，用二甲苯溶洗，封片。
1.2.2 乙酰胆碱酯酶染色 (1)切片入孵育液37℃20min。(2)蒸留水洗3次，中性树胶封片。
1.2.3 琥珀酸脱氢酶和乙酰胆碱酯酶共同染色 (1)切片放入硝基四氮唑蓝(0.1%)10ml，0.2M琥珀酸钠5ml，0.2M磷酸缓冲液5ml(pH值7.6)组成的混合液中，在37℃孵育20min。(2)入10%甲醛溶液固定15min。(3)蒸馏水洗。(4)用醋酸缓冲液50ml，(pH值5)，3.75%甘氨酸2ml，乙酰硫胆碱碘化钠10.5ml，4000转离心10min，取上清液，将切片入该液中37℃30min。(5)蒸馏水洗。(6)1%～2%硫化铵1min。(7)水洗，封片。
, 百拇医药
2 结果
2.1 琥珀酸脱氢酶染色 股四头肌红肌纤维颗粒多，深蓝色;白肌纤维颗粒少，浅蓝色;中间肌纤维介于两者之间。
2.2 乙酰胆碱酯酶染色 股四头肌肌纤维显示不清，神经纤维亦轮廓不清，但运动终板呈现不同程度棕色阳性反应颗粒。
2.3 两种酶共同染色 股四头肌红肌纤维运动终板小，多呈圆形;白肌纤维运动终板大，多呈椭圆形;中间型肌纤维的运动终板多呈椭圆型。骨骼肌纤维与运动终板的位置关系非常清楚。
3 讨论
运动终板是神经肌肉传递兴奋的重要结构，不同类型的肌纤维运动终板的形态也不同。以前教学切片最常用氯化金或硝酸银压片法 [1，2] ，制作方法复杂，特别是组织切片的制作困难，而且不能显示各型肌纤维与神经末梢的关系。陈笑梅等用琥珀酸脱氢酶染色，可非常清楚的显示肌纤维的种类，但不能看清楚肌组织与运动终板的位置关系，Cislˉlik改良的Kolle和Friedenwald法 [3] 可显示运动终板中呈现不同程度棕黑色阳性反应颗粒，但肌纤维显示不清。本法尝试用两种酶共同染色，不但可清楚显示红肌纤维、白肌纤维和中间肌纤维，而且同时显示支配各型肌肉的运动终板的结构。用本法不但可以制作出优秀的教学切片，更重要的是可以广泛应用于科研工作中，为临床研究各种肌肉疾病及其神经末梢病变提供了一种良好的实验方法。
, 百拇医药
参考文献
1 熊绪先.组织学标本制作技术，武汉:湖北出版社，1979，242-243;354.
2 杜卓民.实用组织学技术，北京:人民卫生出版社，1998，150-151;327-329.
3 Cisilik.To stain motor unit with Succinate dehydrogenase(SDH)and Acetylcholinase(Ach)Immunohistochemistry，1996，3(5):167.
作者单位:266012青岛大学医学院外科实验室
(收稿日期:2003-06-16)
(编辑晓 勇), 百拇医药(周)
关键词 琥珀酸脱氢酶 乙酰胆碱酯酶 骨骼肌 运动终板 鼠科
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-077X(2003)11-0976-02
Staining with succinate dehydrogenase and acetylcholinase to show skeletalmotor unit
Zhou Zhen
Department of Surgery，Qingdao University Medical College，Qingdao266021.
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To show motor unit of different type skeletals.Methods Stain the skeletal muscles with succinate dehydrogenase(SDH)and acetylcholinase(ACH)to show motor unit of different type skeletals.Reˉsults There are blue sedimentations in cytoplasms of muscles;and brownish black sedimentations in nerve fiber and motor end plate.Conclusion Synstaining with succinate dehydrogenase and acetycholinase can display the clear structures of somatic motor nerve ending.
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Key words succinate dehydrogenase acetylcholinase skeletal muscle motor nerve ending rat farmily
骨骼肌是维持身体姿势和实现各种运动的主要器官，运动终板是神经的兴奋传递到骨骼肌的结构，调节肌肉的收缩和舒张。在神经系统的教学及科研工作中，为了清楚地显示躯体运动神经末梢与骨骼肌的结构特点，我们根据文献资料 [1，2] 及反复实验，获得了比较满意的显示骨骼肌及运动终板的染色方法。现叙述如下。
1 材料与方法
1.1 实验对象与组织取材 取健康大白鼠12只，体重250～300g，分别取其股四头肌，8%多聚甲醛固定，切片。
1.2 染色步骤
, 百拇医药 1.2.1 琥珀酸脱氢酶染色 (1)切片入孵育液37℃60min。(2)蒸馏水洗3次。(3)再依次快速进体积分数为0.30，0.60的丙酮液各5min。(4)蒸馏水洗3次。(5)依次入体积分数为0.75，0.85，0.95，1.00的乙醇溶液各5min，用二甲苯溶洗，封片。
1.2.2 乙酰胆碱酯酶染色 (1)切片入孵育液37℃20min。(2)蒸留水洗3次，中性树胶封片。
1.2.3 琥珀酸脱氢酶和乙酰胆碱酯酶共同染色 (1)切片放入硝基四氮唑蓝(0.1%)10ml，0.2M琥珀酸钠5ml，0.2M磷酸缓冲液5ml(pH值7.6)组成的混合液中，在37℃孵育20min。(2)入10%甲醛溶液固定15min。(3)蒸馏水洗。(4)用醋酸缓冲液50ml，(pH值5)，3.75%甘氨酸2ml，乙酰硫胆碱碘化钠10.5ml，4000转离心10min，取上清液，将切片入该液中37℃30min。(5)蒸馏水洗。(6)1%～2%硫化铵1min。(7)水洗，封片。
, 百拇医药
2 结果
2.1 琥珀酸脱氢酶染色 股四头肌红肌纤维颗粒多，深蓝色;白肌纤维颗粒少，浅蓝色;中间肌纤维介于两者之间。
2.2 乙酰胆碱酯酶染色 股四头肌肌纤维显示不清，神经纤维亦轮廓不清，但运动终板呈现不同程度棕色阳性反应颗粒。
2.3 两种酶共同染色 股四头肌红肌纤维运动终板小，多呈圆形;白肌纤维运动终板大，多呈椭圆形;中间型肌纤维的运动终板多呈椭圆型。骨骼肌纤维与运动终板的位置关系非常清楚。
3 讨论
运动终板是神经肌肉传递兴奋的重要结构，不同类型的肌纤维运动终板的形态也不同。以前教学切片最常用氯化金或硝酸银压片法 [1，2] ，制作方法复杂，特别是组织切片的制作困难，而且不能显示各型肌纤维与神经末梢的关系。陈笑梅等用琥珀酸脱氢酶染色，可非常清楚的显示肌纤维的种类，但不能看清楚肌组织与运动终板的位置关系，Cislˉlik改良的Kolle和Friedenwald法 [3] 可显示运动终板中呈现不同程度棕黑色阳性反应颗粒，但肌纤维显示不清。本法尝试用两种酶共同染色，不但可清楚显示红肌纤维、白肌纤维和中间肌纤维，而且同时显示支配各型肌肉的运动终板的结构。用本法不但可以制作出优秀的教学切片，更重要的是可以广泛应用于科研工作中，为临床研究各种肌肉疾病及其神经末梢病变提供了一种良好的实验方法。
, 百拇医药
参考文献
1 熊绪先.组织学标本制作技术，武汉:湖北出版社，1979，242-243;354.
2 杜卓民.实用组织学技术，北京:人民卫生出版社，1998，150-151;327-329.
3 Cisilik.To stain motor unit with Succinate dehydrogenase(SDH)and Acetylcholinase(Ach)Immunohistochemistry，1996，3(5):167.
作者单位:266012青岛大学医学院外科实验室
(收稿日期:2003-06-16)
(编辑晓 勇), 百拇医药(周)