nm23-H 1 基因在鼻咽癌中的表达研究
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中华现代临床医学杂志 2003年11月 第1卷第9期
【摘要】 目的 探讨nm23-H 1 基因在鼻咽癌的表达与肿瘤浸润及颈淋巴结转移和临床分期的关系。方法 应用免疫组化SP法检测127例鼻咽癌组织中nm23-H 1 基因表达。结果 原发病灶局限者nm23-H 1 表达(92.0%)显著高于病灶有周围组织浸润者(42.9%)(P<0.01)，无颈淋巴结转移者表达(69.7%)显著高于有颈淋巴结转移者(33.3%)(P<0.01)，Ⅰ、Ⅱ期表达显著高于Ⅲ、Ⅳ期表达(P<0.01)。结论 nm23-H 1 基因在抑制肿瘤转移与病变发展上起着极其重要的作用，是临床判断转移、复发及估计预后极其重要的客观指标。
关键词 nm23-H 1 基因 鼻咽癌 表达
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2003)09-0778-02
The expression of nm23-H 1 gene in the patients with
, 百拇医药
nasopharyngeal carcinoma
Jiang Wuzhong，Zhang Jing，Lu Jingchen，et al.
Xiang Ya Hospital，Central South University，Changsha410008.
【Abstract】 Objective To study the relationship among the expression of nm23-H 1 gene in human NPC with the infiltration，neck lymph node metastasis and clinical stage.Methods The expression of nm23-H 1 gene in127cases human NPC was studied with SP immunohistochemical technique.Results The positive expression rate of nm23-H 1 in only local primary tumor is much more high than primary infiltrating tumor(P<0.01).The positive expresˉsion rate of nm23-H 1 in cases without neck lymph node metastasis is much more high than with neck lymph node metastasis(P<0.01).Conclusion nm23-H 1 play important role in confining neck lymph node metastasis and priˉmary tumor infiltration of NPC.Nm23-H 1 expression may serve as criterions of metastasis and prognosis of NPC.
, 百拇医药
Key words nm23-H 1 gene NPCexpression
我们对1998～2000年间我科收治的鼻咽癌患者，经病理证实的放射治疗前活检标本，用免疫组化方法(SP法)检测其组织中肿瘤转移抑制基因nm23-H 1 表达水平，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料 127例患者均经病理证实为低分化鳞癌，男83例，女44例，年龄16～72岁，平均46.8岁，其中有颈淋巴结转移者81例，无颈淋巴结转移者46例;46例无颈淋巴结转移的鼻咽癌患者中，21例经影像学证实有破裂孔、咽旁间隙、副鼻窦等侵犯，即有周围组织侵犯者。按1992年鼻咽癌全国会议推荐分期，Ⅰ期5例，Ⅱ期43例，Ⅲ期54例，Ⅳ期25例。
1.2 免疫组化染色
, 百拇医药
1.2.1 试剂 nm23-H 1 及染色试剂盒(S-P kit)为美国zymed公司产品。
1.2.2 染色方法 免疫组织化学染色采用SP法，具体过程严格按说明书进行。即(1)切片常规脱蜡、水化;(2)滴加第一抗体nm23-H 1 ，室温孵育1h;(3)滴加第二抗体(生物素化羊抗兔IgG)室温孵育20min;(4)滴加过氧化物酶标记的链霉卵白素试剂，室温孵育10min。以上步骤均经0.01 mol PBS液洗涤3次，每次5min;(5)DAB显色5～7min，苏木素衬染、脱水、透明封片。用PBS代替一抗作阴性对照。
1.2.3 结果判断 nm23-H 1 染色阳性细胞为浆内或细胞膜染成棕黄色，每张切片观测10个高倍视野，根据阳性细胞数和显色强弱分为(1)阴性(-):nm23阳性细胞<10%;(2)阳性(+):nm23阳性细胞数≥10%。
, 百拇医药
2 结果
2.1 nm23-H 1 表达与淋巴结转移 有颈部淋巴结转移者nm23-H 1 表达阳性率为33.3%(27/81)，无颈淋巴结转移者阳性率为69.6%(32/46)，两组比较差异有非常显著性，P<0.01(χ 2 =13.8)。
2.2 nm23-H 1 表达与肿瘤浸润 在46例无颈淋巴结转移的病例中，影像学证实原发灶局限在鼻咽部，周围无肿瘤组织侵犯者，nm23-H 1 表达阳性率为92.0%(23/25)，有组织浸润者阳性表达率为42.9%(9/21)，两组比较差异有非常显著性，P<0.01(χ 2 =12.9)。在有颈淋巴结转移的病例中，无组织浸润者与有组织浸润者，两组比较nm23-H 1 表达阳性率差异无显著性，P>0.05(χ 2 =3.12)。
, 百拇医药
2.3 nm23-H 1 表达与临床分期 临床Ⅰ期与Ⅱ期比较nm23-H 1 表达阳性率差异无显著性，P>0.05(χ 2 =0.07)。Ⅲ期与Ⅳ期比较差异无显著性，P>0.05(χ 2 =0.03)。Ⅰ+Ⅱ期病例nm23-H 1 表达阳性率为75%(36/48)，Ⅲ+Ⅳ期阳性率为29.11%(23/78)，两组比较差异有非常显著性，P<0.01(χ 2 =25.2)。
3 讨论
肿瘤是一个非常复杂的病理现象，由于高转移性癌细胞大分子DNA可将转移类型传递给非转移性细胞，并非转移细胞内均有激活的癌基因表达，推测可能有特定基因与转移有关。当前人们最感兴趣的是nm23基因 [1] 。nm23基因由美国国立癌症研究所的Steeg等 [2] 于1988年首次发现，由于是检测到的第23个克隆基因，并发现其具有非转移性(nonmetastasis)，故称为nm23基因，目前，已知人类有6种nm23基因，nm23基因的肿瘤转移抑制作用主要由nm23-H 1 发挥的。
, 百拇医药
通过对nm23-H 1 基因组克隆分析，nm23-H 1 是位于染色体17q21.3，长约10kb，含有5个外显子和4个内含子，其蛋白产物有152个氨基酸，分子量为17ku，nm23-H 1 基因的5′末端含有598个核苷酸的序列为一个启动子元件，在这段序列内-572位点处有转录因子TF11D的结合基因序列，于-402位点和-286位点各有蛋白AP-1的结合基因序列，TF11D是一个与RNA多聚酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ识别有关的转录因子，两个AP-1和CTF/NF 1 序列的存在意味着同族的DNA结合蛋白能够与此序列结构结合并激活转录 [3，4] 。
nm23基因具有多种生物学功能，并且其确切作用机制还不十分清楚，但是，nm23参与了细胞信号传递、细胞增殖与分化和肿瘤转移。nm23基因产物NDPK是一类广泛存在的酶，它被认为至少参与两个在肿瘤和发育上起重要作用的功能，即微管的聚合/解聚和G蛋白介导的信号转导。微管的聚合/解聚需要由NDPK介导的转磷酸作用所提供的GTP。因此，nm23蛋白的改变，一方面可使微管聚合异常，而引起减数分裂时纺锤体的异常，从而导致癌细胞染色体非整倍体的形成，进而促进肿瘤的发展;另一方面可通过影响细胞骨架而引起细胞运动，从而参与浸润转移过程和发育过程。NDPK的第二个功能是在信号传递过程中使 GDP磷酸化为GTP，从而使G蛋白激活，nm23基因可能以这种方式调节大量的G蛋白介导的信号转导反应，进而参与肿瘤的进展与转移 [5～7] 。
, 百拇医药
本实验结果显示nm23-H 1 基因在有颈淋巴结转移的鼻咽癌患者中，阳性表达显著降低(P<0.01)，原发灶有周围组织浸润的患者中阳性表达也显著降低(P<0.01)，Ⅲ、Ⅳ期病人与Ⅰ、Ⅱ期病人比较阳性表达显著下降(P<0.01)，表明nm23-H 1 的表达与肿瘤的发生、发展、浸润及转移密切相关，具有抗浸润与转移作用，是临床判断转移、复发及估计预后的极其重要的技术指标。
参考文献
1 姜武忠，文继航.nm23基因与肿瘤关系研究进展.中国现代医学杂志，2003，13(13):39-42.
2 Steeg PS，Bevilacqua G，Kopperal，et al.Evidence for a novel gene assoˉciated with cow humor metastatic potential.J Natal Cancer Inst，1988，80:200-204.
, 百拇医药
3 Leone A，McBride OW，Weston A，et al.Somatic allelic deletion of nm23in human cancer.Cancer Kes，1991，51(9):2490.
4 Chen HC，Wang LM，Banerge S.Isolation and characterization of the promoter
region of human nm23-H 1 ，a metastasis suppressor gene.Oncogene，1994，9(10):2905-2912.
5 Ma D，Niederkorn JY.Role of epidermal growth factor in the metastasis of intraocular melanomas.Invest Ophthamol Vissci，1998，39:1067.
, 百拇医药
6 Postal E H.Nm23-NDP kinase.Int J Biothem cell Biol，1998，30:1291.
7 Ura H，Denno R，Uiratak.The significance of nm23protein expression in human carcinomas.Surg Today，1996，26(12):957-965.
作者单位:410008长沙中南大学湘雅医院放疗科
(收稿日期:2003-09-08)
(编辑 刘娜), http://www.100md.com
关键词 nm23-H 1 基因 鼻咽癌 表达
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2003)09-0778-02
The expression of nm23-H 1 gene in the patients with
, 百拇医药
nasopharyngeal carcinoma
Jiang Wuzhong，Zhang Jing，Lu Jingchen，et al.
Xiang Ya Hospital，Central South University，Changsha410008.
【Abstract】 Objective To study the relationship among the expression of nm23-H 1 gene in human NPC with the infiltration，neck lymph node metastasis and clinical stage.Methods The expression of nm23-H 1 gene in127cases human NPC was studied with SP immunohistochemical technique.Results The positive expression rate of nm23-H 1 in only local primary tumor is much more high than primary infiltrating tumor(P<0.01).The positive expresˉsion rate of nm23-H 1 in cases without neck lymph node metastasis is much more high than with neck lymph node metastasis(P<0.01).Conclusion nm23-H 1 play important role in confining neck lymph node metastasis and priˉmary tumor infiltration of NPC.Nm23-H 1 expression may serve as criterions of metastasis and prognosis of NPC.
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Key words nm23-H 1 gene NPCexpression
我们对1998～2000年间我科收治的鼻咽癌患者，经病理证实的放射治疗前活检标本，用免疫组化方法(SP法)检测其组织中肿瘤转移抑制基因nm23-H 1 表达水平，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料 127例患者均经病理证实为低分化鳞癌，男83例，女44例，年龄16～72岁，平均46.8岁，其中有颈淋巴结转移者81例，无颈淋巴结转移者46例;46例无颈淋巴结转移的鼻咽癌患者中，21例经影像学证实有破裂孔、咽旁间隙、副鼻窦等侵犯，即有周围组织侵犯者。按1992年鼻咽癌全国会议推荐分期，Ⅰ期5例，Ⅱ期43例，Ⅲ期54例，Ⅳ期25例。
1.2 免疫组化染色
, 百拇医药
1.2.1 试剂 nm23-H 1 及染色试剂盒(S-P kit)为美国zymed公司产品。
1.2.2 染色方法 免疫组织化学染色采用SP法，具体过程严格按说明书进行。即(1)切片常规脱蜡、水化;(2)滴加第一抗体nm23-H 1 ，室温孵育1h;(3)滴加第二抗体(生物素化羊抗兔IgG)室温孵育20min;(4)滴加过氧化物酶标记的链霉卵白素试剂，室温孵育10min。以上步骤均经0.01 mol PBS液洗涤3次，每次5min;(5)DAB显色5～7min，苏木素衬染、脱水、透明封片。用PBS代替一抗作阴性对照。
1.2.3 结果判断 nm23-H 1 染色阳性细胞为浆内或细胞膜染成棕黄色，每张切片观测10个高倍视野，根据阳性细胞数和显色强弱分为(1)阴性(-):nm23阳性细胞<10%;(2)阳性(+):nm23阳性细胞数≥10%。
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2 结果
2.1 nm23-H 1 表达与淋巴结转移 有颈部淋巴结转移者nm23-H 1 表达阳性率为33.3%(27/81)，无颈淋巴结转移者阳性率为69.6%(32/46)，两组比较差异有非常显著性，P<0.01(χ 2 =13.8)。
2.2 nm23-H 1 表达与肿瘤浸润 在46例无颈淋巴结转移的病例中，影像学证实原发灶局限在鼻咽部，周围无肿瘤组织侵犯者，nm23-H 1 表达阳性率为92.0%(23/25)，有组织浸润者阳性表达率为42.9%(9/21)，两组比较差异有非常显著性，P<0.01(χ 2 =12.9)。在有颈淋巴结转移的病例中，无组织浸润者与有组织浸润者，两组比较nm23-H 1 表达阳性率差异无显著性，P>0.05(χ 2 =3.12)。
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2.3 nm23-H 1 表达与临床分期 临床Ⅰ期与Ⅱ期比较nm23-H 1 表达阳性率差异无显著性，P>0.05(χ 2 =0.07)。Ⅲ期与Ⅳ期比较差异无显著性，P>0.05(χ 2 =0.03)。Ⅰ+Ⅱ期病例nm23-H 1 表达阳性率为75%(36/48)，Ⅲ+Ⅳ期阳性率为29.11%(23/78)，两组比较差异有非常显著性，P<0.01(χ 2 =25.2)。
3 讨论
肿瘤是一个非常复杂的病理现象，由于高转移性癌细胞大分子DNA可将转移类型传递给非转移性细胞，并非转移细胞内均有激活的癌基因表达，推测可能有特定基因与转移有关。当前人们最感兴趣的是nm23基因 [1] 。nm23基因由美国国立癌症研究所的Steeg等 [2] 于1988年首次发现，由于是检测到的第23个克隆基因，并发现其具有非转移性(nonmetastasis)，故称为nm23基因，目前，已知人类有6种nm23基因，nm23基因的肿瘤转移抑制作用主要由nm23-H 1 发挥的。
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通过对nm23-H 1 基因组克隆分析，nm23-H 1 是位于染色体17q21.3，长约10kb，含有5个外显子和4个内含子，其蛋白产物有152个氨基酸，分子量为17ku，nm23-H 1 基因的5′末端含有598个核苷酸的序列为一个启动子元件，在这段序列内-572位点处有转录因子TF11D的结合基因序列，于-402位点和-286位点各有蛋白AP-1的结合基因序列，TF11D是一个与RNA多聚酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ识别有关的转录因子，两个AP-1和CTF/NF 1 序列的存在意味着同族的DNA结合蛋白能够与此序列结构结合并激活转录 [3，4] 。
nm23基因具有多种生物学功能，并且其确切作用机制还不十分清楚，但是，nm23参与了细胞信号传递、细胞增殖与分化和肿瘤转移。nm23基因产物NDPK是一类广泛存在的酶，它被认为至少参与两个在肿瘤和发育上起重要作用的功能，即微管的聚合/解聚和G蛋白介导的信号转导。微管的聚合/解聚需要由NDPK介导的转磷酸作用所提供的GTP。因此，nm23蛋白的改变，一方面可使微管聚合异常，而引起减数分裂时纺锤体的异常，从而导致癌细胞染色体非整倍体的形成，进而促进肿瘤的发展;另一方面可通过影响细胞骨架而引起细胞运动，从而参与浸润转移过程和发育过程。NDPK的第二个功能是在信号传递过程中使 GDP磷酸化为GTP，从而使G蛋白激活，nm23基因可能以这种方式调节大量的G蛋白介导的信号转导反应，进而参与肿瘤的进展与转移 [5～7] 。
, 百拇医药
本实验结果显示nm23-H 1 基因在有颈淋巴结转移的鼻咽癌患者中，阳性表达显著降低(P<0.01)，原发灶有周围组织浸润的患者中阳性表达也显著降低(P<0.01)，Ⅲ、Ⅳ期病人与Ⅰ、Ⅱ期病人比较阳性表达显著下降(P<0.01)，表明nm23-H 1 的表达与肿瘤的发生、发展、浸润及转移密切相关，具有抗浸润与转移作用，是临床判断转移、复发及估计预后的极其重要的技术指标。
参考文献
1 姜武忠，文继航.nm23基因与肿瘤关系研究进展.中国现代医学杂志，2003，13(13):39-42.
2 Steeg PS，Bevilacqua G，Kopperal，et al.Evidence for a novel gene assoˉciated with cow humor metastatic potential.J Natal Cancer Inst，1988，80:200-204.
, 百拇医药
3 Leone A，McBride OW，Weston A，et al.Somatic allelic deletion of nm23in human cancer.Cancer Kes，1991，51(9):2490.
4 Chen HC，Wang LM，Banerge S.Isolation and characterization of the promoter
region of human nm23-H 1 ，a metastasis suppressor gene.Oncogene，1994，9(10):2905-2912.
5 Ma D，Niederkorn JY.Role of epidermal growth factor in the metastasis of intraocular melanomas.Invest Ophthamol Vissci，1998，39:1067.
, 百拇医药
6 Postal E H.Nm23-NDP kinase.Int J Biothem cell Biol，1998，30:1291.
7 Ura H，Denno R，Uiratak.The significance of nm23protein expression in human carcinomas.Surg Today，1996，26(12):957-965.
作者单位:410008长沙中南大学湘雅医院放疗科
(收稿日期:2003-09-08)
(编辑 刘娜), http://www.100md.com