乳头抽吸液中碱性成纤维细胞生长因子检测在乳腺癌早期诊断中的价值
【摘要】 目的 探讨乳头抽吸液中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的检测在乳腺癌早期诊断中的价值。方法 收集正常人和乳腺癌患者乳头抽吸液，BCA法测定总蛋白质浓度，ELISA法测定bFGF浓度，以总蛋白浓度标化bFGF浓度，并作统计学分析。结果 乳腺癌患者乳头抽吸液中bFGF浓度较正常对照组显著增高(16.7ng/g vs2.3ng/g，P<0.001)。结论 乳头抽吸液bFGF检测可作为一种新的方法和可靠指标在乳腺癌早期诊断中应用。
关键词 乳头抽吸液(NAF) 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 检测 乳腺癌
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)04-0289-02
Early diagnostic value of bFGF assay in nipple aspirate fluid(NAF)in breast cancer patients
, 百拇医药
Du Zhiqiang，Zeng Bohang
Department of Oncology，the Second Affiliated Hospital of Guangzhou MedicalCollege，Guangzhou510260.
【Abstract】 Objective To explore the early diagnostic value of bFGF assay in nipple aspirate fluid in breast cancer patients.Methods To collect the NAF from breast cancer patients and non-malignant breast women，detect the total protein concentration with BCA method and bFGF concentration with ELISA method，standardize the bFGF concentration and give statistical analysis.Results The bFGF concentration of NAF in breast cancer patients is sigˉnificantly higher than that of control(16.7ng/g vs2.3ng/g，P<0.001).Conclusion The bFGF assay in NAF may beused as a novel method and a valuable marker in the early diagnosis of breast cancer.
, 百拇医药
Key words nipple aspirate fluid(NAF) basic fibroblast growth factor(bFGF)assay breast cancer
早期诊断和治疗是降低乳腺癌死亡率的最主要原因。乳头抽吸液是由乳腺导管上皮和腺泡上皮细胞代谢分泌的一种物质。其在乳腺癌早期诊断中的价值目前正引起人们的注意 [1] 。bFGF是一种促进细胞分裂和血管生长的多肽因子，其与肿瘤发生和发展密切相关 [2，3] 。本文欲从NAF中检测bFGF的含量，以寻找一种新的乳腺癌早期诊断方法。
1 材料与方法
1.1 病例选择 单侧和(或)双侧收集120例乳头抽吸液(NAF)标本。其中乳腺癌患者70例，正常健康者50例，年龄30～76岁，平均年龄46岁。所有患者均有明确的病理诊断。收集的NAF置-70℃冰箱保存。
, 百拇医药
1.2 NAF中蛋白浓度测定(BCA法) 蛋白浓度的检测试剂盒购自美国Pierce Chemical公司。操作按说明书进行。取25μl标本NAF或标准蛋白液于96孔培养板上，加200μl工作液，置37℃室温下30min。置562nm波长的分光光度计下测OD值，计算标本蛋白浓度。
1.3 NAF中bFGF检测 检测试剂盒购自美国R&D Sysˉtem。ELISA法具体操作步骤按说明书进行，主要步骤:取100μl PBS稀释鼠抗人bFGF抗体于96孔培养板上过夜。次日用wash buffer清洗3次，之后加block buffer室温下静置1h，wash buffer清洗2次，加标本NAF或标准蛋白试剂100μl，室温下静置2h，wash buffer清洗2次，加100μl二抗，室温下2h后加100μlstreptavidan-HRP20min，wash buffer洗2次加底物100μl，室温下20min，加50μl终止液，置波长为450nm分光光度仪下测OD值，并计算标本bFGF含量。
, 百拇医药
1.4 统计学分析 以NAF中总蛋白浓度标化bFGF浓度，组间标化的bFGF比较用t检验。
2 结果 70例乳腺癌患者NAF中平均标化bFGF浓度为16.7±4.6ng/g，正常健康对照组NAF中平均标化bFGF浓度为1.7±0.6ng/g。NAF中bFGF在乳腺癌患者组较正常对照组显著性增高(P<0.001)。
3 讨论 乳腺癌是女性一种常见恶性肿瘤。早期诊断和治疗是降低残死亡率的关键。目前临床上早期诊断主要手段依赖于X线检查，但有15%～20%患者因不能发现肿块而漏诊。血清中肿瘤标志物由于缺乏特异性和灵敏性低等缺点限制了它的临床应用 [4] 。病理学分析乳腺癌是由乳腺导管上皮细胞发生的恶性肿瘤。乳头抽吸液(NAF)是由乳腺导管上皮细胞代谢分泌产生的一种液体，其分泌数量及成分改变能及时反映上皮细胞生化代谢改变和功能状态[5] 。因此推测NAF在乳腺癌早期诊断中将是一种极有价值的材料。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是由上皮细胞、肿瘤细胞及浸润肿块组织的淋巴细胞分泌的一种分子量为18KD的多肽，具有强大的促进细胞分裂活性和促进血管形成的功能 [4] ，bFGF在乳腺癌等多种组织中表达 [6] 。Pichon等对166例临床各期乳腺癌患者血清bFGF检测和追踪，在99例治疗前患者中bFGF阳性率为39.4%。继续观察治疗前和治疗后无病生存及复发患者血清bFGF变化，发现治疗前和术后复发患者血清bFGF明显升高。Nguyen [7]等发现多种实体瘤患者尿中bFGF升高，提示bFGF与肿瘤发生和发展密切相关。
, 百拇医药
本文通过检测乳腺癌与正常人NAF中bFGF变化，发现乳腺癌患者其bFGF明显升高。推测原因可能是肿瘤细胞及相关组织自分泌或旁分泌bFGF之故，而NAF本身又能早期反映细胞功能改变。因此NAF中bFGF检测可作为在乳腺癌早期诊断中一种新的方法和指标在临床中加以应用。
参考文献
1 Liu Y，Wang JL，Chang H，et al.Breast cancer diagnosis with nipple fluˉid bFGF.Lancet，2000，356(9229):567.
2 Okada Ban M，Thiery JP，Jouanneau J.Fibroblast growth factor-2.Int JBiochem，2000，32(3):263-267. 3 Takanami I，Tanaka F，Hashizume T，et al.Tumor angiogenesis in pulˉmonary adenocarcinomas:relationship with basic fibroblast growth factor，its receptor，and survival.Neoplasm，1997，44(5):295-298.
, 百拇医药
4 Delrieu I.The high molecular weight isforms of basic fibroblast growth factor(FGF-2):an insight into an intracrine mechanism.FEBS Lett，2000，468(1):6-10.
5 Gana PA，Dooley W，Haffty B，et al.Identification of premalignant and malignant breast cells in mammogram and physical-negative women by ductal lavage:results from a multicentr trial.Pro Am Soc Clin Oncol，2000，19:76a.
6 Noda M，Hattori T，Kimura T，et al.Expression of fibroblast growth factor-2mRNA in early and advanced gastric cancer.Acta Oncol，1997，36(7):695-700.
7 Nguyen M.Angiogenic factors as tumor markers.Invest New Drugs，1997，15(1):29-37.
(收稿日期:2003-01-19) (编辑 晓亮), 百拇医药(杜志强)
关键词 乳头抽吸液(NAF) 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 检测 乳腺癌
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)04-0289-02
Early diagnostic value of bFGF assay in nipple aspirate fluid(NAF)in breast cancer patients
, 百拇医药
Du Zhiqiang，Zeng Bohang
Department of Oncology，the Second Affiliated Hospital of Guangzhou MedicalCollege，Guangzhou510260.
【Abstract】 Objective To explore the early diagnostic value of bFGF assay in nipple aspirate fluid in breast cancer patients.Methods To collect the NAF from breast cancer patients and non-malignant breast women，detect the total protein concentration with BCA method and bFGF concentration with ELISA method，standardize the bFGF concentration and give statistical analysis.Results The bFGF concentration of NAF in breast cancer patients is sigˉnificantly higher than that of control(16.7ng/g vs2.3ng/g，P<0.001).Conclusion The bFGF assay in NAF may beused as a novel method and a valuable marker in the early diagnosis of breast cancer.
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Key words nipple aspirate fluid(NAF) basic fibroblast growth factor(bFGF)assay breast cancer
早期诊断和治疗是降低乳腺癌死亡率的最主要原因。乳头抽吸液是由乳腺导管上皮和腺泡上皮细胞代谢分泌的一种物质。其在乳腺癌早期诊断中的价值目前正引起人们的注意 [1] 。bFGF是一种促进细胞分裂和血管生长的多肽因子，其与肿瘤发生和发展密切相关 [2，3] 。本文欲从NAF中检测bFGF的含量，以寻找一种新的乳腺癌早期诊断方法。
1 材料与方法
1.1 病例选择 单侧和(或)双侧收集120例乳头抽吸液(NAF)标本。其中乳腺癌患者70例，正常健康者50例，年龄30～76岁，平均年龄46岁。所有患者均有明确的病理诊断。收集的NAF置-70℃冰箱保存。
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1.2 NAF中蛋白浓度测定(BCA法) 蛋白浓度的检测试剂盒购自美国Pierce Chemical公司。操作按说明书进行。取25μl标本NAF或标准蛋白液于96孔培养板上，加200μl工作液，置37℃室温下30min。置562nm波长的分光光度计下测OD值，计算标本蛋白浓度。
1.3 NAF中bFGF检测 检测试剂盒购自美国R&D Sysˉtem。ELISA法具体操作步骤按说明书进行，主要步骤:取100μl PBS稀释鼠抗人bFGF抗体于96孔培养板上过夜。次日用wash buffer清洗3次，之后加block buffer室温下静置1h，wash buffer清洗2次，加标本NAF或标准蛋白试剂100μl，室温下静置2h，wash buffer清洗2次，加100μl二抗，室温下2h后加100μlstreptavidan-HRP20min，wash buffer洗2次加底物100μl，室温下20min，加50μl终止液，置波长为450nm分光光度仪下测OD值，并计算标本bFGF含量。
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1.4 统计学分析 以NAF中总蛋白浓度标化bFGF浓度，组间标化的bFGF比较用t检验。
2 结果 70例乳腺癌患者NAF中平均标化bFGF浓度为16.7±4.6ng/g，正常健康对照组NAF中平均标化bFGF浓度为1.7±0.6ng/g。NAF中bFGF在乳腺癌患者组较正常对照组显著性增高(P<0.001)。
3 讨论 乳腺癌是女性一种常见恶性肿瘤。早期诊断和治疗是降低残死亡率的关键。目前临床上早期诊断主要手段依赖于X线检查，但有15%～20%患者因不能发现肿块而漏诊。血清中肿瘤标志物由于缺乏特异性和灵敏性低等缺点限制了它的临床应用 [4] 。病理学分析乳腺癌是由乳腺导管上皮细胞发生的恶性肿瘤。乳头抽吸液(NAF)是由乳腺导管上皮细胞代谢分泌产生的一种液体，其分泌数量及成分改变能及时反映上皮细胞生化代谢改变和功能状态[5] 。因此推测NAF在乳腺癌早期诊断中将是一种极有价值的材料。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是由上皮细胞、肿瘤细胞及浸润肿块组织的淋巴细胞分泌的一种分子量为18KD的多肽，具有强大的促进细胞分裂活性和促进血管形成的功能 [4] ，bFGF在乳腺癌等多种组织中表达 [6] 。Pichon等对166例临床各期乳腺癌患者血清bFGF检测和追踪，在99例治疗前患者中bFGF阳性率为39.4%。继续观察治疗前和治疗后无病生存及复发患者血清bFGF变化，发现治疗前和术后复发患者血清bFGF明显升高。Nguyen [7]等发现多种实体瘤患者尿中bFGF升高，提示bFGF与肿瘤发生和发展密切相关。
, 百拇医药
本文通过检测乳腺癌与正常人NAF中bFGF变化，发现乳腺癌患者其bFGF明显升高。推测原因可能是肿瘤细胞及相关组织自分泌或旁分泌bFGF之故，而NAF本身又能早期反映细胞功能改变。因此NAF中bFGF检测可作为在乳腺癌早期诊断中一种新的方法和指标在临床中加以应用。
参考文献
1 Liu Y，Wang JL，Chang H，et al.Breast cancer diagnosis with nipple fluˉid bFGF.Lancet，2000，356(9229):567.
2 Okada Ban M，Thiery JP，Jouanneau J.Fibroblast growth factor-2.Int JBiochem，2000，32(3):263-267. 3 Takanami I，Tanaka F，Hashizume T，et al.Tumor angiogenesis in pulˉmonary adenocarcinomas:relationship with basic fibroblast growth factor，its receptor，and survival.Neoplasm，1997，44(5):295-298.
, 百拇医药
4 Delrieu I.The high molecular weight isforms of basic fibroblast growth factor(FGF-2):an insight into an intracrine mechanism.FEBS Lett，2000，468(1):6-10.
5 Gana PA，Dooley W，Haffty B，et al.Identification of premalignant and malignant breast cells in mammogram and physical-negative women by ductal lavage:results from a multicentr trial.Pro Am Soc Clin Oncol，2000，19:76a.
6 Noda M，Hattori T，Kimura T，et al.Expression of fibroblast growth factor-2mRNA in early and advanced gastric cancer.Acta Oncol，1997，36(7):695-700.
7 Nguyen M.Angiogenic factors as tumor markers.Invest New Drugs，1997，15(1):29-37.
(收稿日期:2003-01-19) (编辑 晓亮), 百拇医药(杜志强)