子宫内膜异位症神经-内分泌-免疫网络影响其不孕的实验研究
【摘要】 目的 通过检测子宫内膜异位症(简称内异症)模型ET-1、SOD-1、LPO、IL-6、TNF-α水平的改变，探讨其影响不孕的作用机制。方法 手术移植法造SD大白鼠内异症模型，同时设正常对照组，用放免法测定血ET-1、SOD-1、LPO、IL-6、TNF-α的水平变化。结果 两组比较，模型组血IL-6、ET-1、LPO和腹腔液TNF-α显著升高(P<0.05或P<0.01)，SOD-1显著降低(P<0.05)。结论 内异症不孕可能与其血ET-1、SOD-1、LPO、IL-6和腹腔液TNF-α的水平变化及机体神经-内分泌-免疫网络功能失常有关。
关键词 子宫内膜异位症 不孕 神经-内分泌-免疫网络
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)11-0970-02
Study on effects of nerve-endocrine-immunological network
, 百拇医药
disorder on endometriosis with acyesis
Lu Cuiyun，Qi Rongyi，Lu Cuimin
No.254Hospital of PLA，Tianjin300142.
【Abstract】 Objective To examine the level of ET-1，SOD-1，LPO，IL-6，TNF-αin the endometriosis body and to discuss their possible function in acyesis.Methods We use operative implantation to establish the model of endometriosis，and take no operative mice as control group，examining the level of ET-1，SOD-1，LPO，IL-6，TNF-α，in blood by radioimmunoassay method.Resuts The level of ET-1，IL-6，TNF-αand LPO increased obˉviously(P<0.05or P<0.01)in the model endometriosis group，while SOD-1obviously decreased(P<0.05).Conclusion The effect of endometriosis on acyesis maybe related to the change of the level of ET-1，SOD-1，LPO，IL-6，TNF-αand the abnormal function of the body nerve-endocrine-immunological network.
, 百拇医药
Key words endometriosis acyesis nerve-endocrine-immunological network
子宫内膜异位症(内异症)造成不孕的机理，目前还不十分清楚，一些研究表明:患者腹腔内环境的变化，可损害精子的功能、抑制早期胚胎的发育等。本研究通过对内异症动物模型血ET-1、SOD-1、LPO、IL-6和腹腔液TNF-α的水平测定，探讨其影响不孕的作用机制。
1 资料与方法
1.1 研究对象 选健康雌性SD未交配成年鼠35只，体重200～220g，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供(合格证号:医动字第01-3008号)。在二级实验室条件下，适应性饲养1周，随机抽取25只作为造模对象，其余10只作为正常对照组。
1.2 模型制作 连续5天行阴道脱落细胞学检查，择动情期行造模手术。用3%戊巴比妥钠按1mg/100g腹腔麻醉，常规消毒纵向剖腹，挑出左侧子宫角，剥离系膜，结扎切除中段子宫角部分约8mm，断端吻合。分离子宫内膜，取其中约5mm见方的子宫内膜片，以无损伤缝合线与腹壁缝合，注射庆大霉素0.4ml关腹，消炎粉外敷伤口。常规饲养4周后剖示，以移植物局部积液高度≥2mm为成功标准。剔除2只，余23只造模成功。
, http://www.100md.com
1.3 检测方法
1.3.1 血ET-1水平的测定 股静脉取血，按放免试剂盒说明书测定。内皮素放免试剂盒由北京市福瑞生物工程公司提供。
1.3.2 血SOD-1、LPO、IL-6水平的测定 心脏取血，均按试剂说明书进行。SOD-1、LPO放免试剂盒由上海放射免疫分析技术研究所提供。IL-6放免试剂盒由北京东亚生物技术研究所提供。
1.3.3 腹腔液TNF-α的测定 L929细胞生长至对数生长期，将细胞调整为5×10 4 /ml加入96孔细胞培养板，每孔加细胞悬液100μl，分别加入待测样品及TNF-α标准品各100μl，37℃、5%CO 2 孵育箱培养48h后加入MTT(0.5mg/ml)50μl/孔，培养4h，加入盐酸异丙醇(1∶300)，振荡，酶标仪测其OD值，波长为570nm，绘出标准曲线，求出样品TNF-α的含量。
, 百拇医药
1.4 统计学方法 实验结果用ˉx±s表示，统计学方法为方差分析、t检验。
2 结果
见表1。
表1 血ET-1、SOD-1、LPO、IL-6和腹腔液TNF-α水平的测定结果 (略)
3 讨论
3.1 ET-1、SOD-1、LPO、IL-6、TNF-α水平变化与内异症不孕 内皮素(ET-1)是由21个氨基酸组成的生物活性多肽，是目前已知最强的收缩血管物质。研究表明:内皮素可能是一种神经递质，可影响儿茶酚胺、P物质等的释放 [1] ;其浓度与多系统疾病的发生发展均有密切联系;其受体广泛存在于许多器官中，其中也包括女性生殖器。ET-1与受体结合、激活后，使Ca 2+ 内流及动员细胞内Ca 2+ ，Ca 2+ 增加引起平滑肌收缩，最终引起血管收缩，而且这种收缩作用不易被消除和消退 [2] 。本实验结果显示:模型组ET-1水平明显高于正常组，推测:高水平的ET-1长时间影响子宫收缩而阻止精子上行、增强子宫动脉阻力，使子宫供血不足而致妊娠率下降。同时，影响卵巢的血液供应，使卵泡发育不良、黄体功能不足而致流产或不孕。
, 百拇医药
超氧化物歧化酶(SOD-1)与机体多种疾病有密切关系。内异症患者体内巨噬细胞数量和活性明显增强，在其活化过程中，产生大量高度活性和细胞毒性的氧自由基(OFR)，如不能被抗氧化物完全清除，则使组织细胞破坏，发生脂质过氧化反应，产生大量的脂质过氧化物(LPO)，造成细胞膜的破裂或通透性增加或累及细胞器释放出各种水解酶 [3] 。推测:这一系列非细菌性炎性反应，使腹腔内环境发生物理及生化改变，对卵子的生长、发育成熟、排卵，精子的活动力、精卵结合能力等产生不良影响而致不孕。
研究证实，IL-6和TNF-α可阻止小鼠Ⅰ期胚的发育;促进卵泡闭锁，抑制未成熟卵泡的发育和优势卵泡的选择;损害精子功能、影响精子穿卵能力，干扰精卵结合而导致不孕或流产[4～6] 。而我们的实验结果显示:模型组IL-6、TNF-α的水平明显高于正常组。推测:内异症不孕的原因之一，与其体内高水平的IL-6和TNF-α有直接相关性。
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3.2 机体神经-内分泌-免疫网络与内异症不孕 我们的实验显示:内异症模型体内存在高水平的IL-6、TNF-α、ET-1、LPO和低水平的SOD-1。而细胞因子IL-6、TNF-α等能刺激动脉内皮增加ET-1的分泌，高水平的ET-1可显著抑制孕酮(P)的基础分泌和LH诱导的分泌，使黄体 功能不足，同时，通过影响卵巢和子宫的血液供应而不利于卵泡发育和孕卵着床。IL-6、TNF-α等细胞因子又可使体内巨噬细胞的数量和活性增加，通过一系列的生化、免疫和非细菌性炎性反应，使体内产生大量的LPO，并且使SOD-1水平进一步降低。破坏了体内细胞因子、神经递质、内分泌激素各自和相互间的平衡关系，导致机体神经-内分泌-免疫网络功能失常，进一步加重病情发展，造成恶性循环。推测:内异症患者神经、内分泌、免疫等任何一个系统发生异常，都可导致机体神经-内分泌-免疫网络功能失常，影响到精子、卵子、精卵结合、孕卵着床等任何一个环节，都会降低其妊娠的成功率。神经-内分泌-免疫网络功能失常影响其不孕的作用机制，大致有如下几个方面:(1)因盆腔粘连使输卵管与卵巢的正常解剖关系发生改变，影响输卵管的蠕动与排卵。(2)体内物理、生化、免疫等内环境的改变，对卵子、精子及精卵结合、着床等有杀伤和抑制作用。(3)抑制胚胎基因转录和滋养细胞增殖。(4)黄体水平不足。
, 百拇医药
参考文献
1 黄勇华.内皮素与中枢神经系统疾病.北京医学，2000，22(1):43.
2 Yashida M，Suzuki A，Itoh T.et al.Immunoreactive endothelin-1conˉcentrations in follicular fluid of women with and without endometriosis undergoing in vitro fertilization-embryo transfer.J Physil，1994，477:253.
3 祝育得.轻度子宫内膜异位症腹腔液及血清中LPO、SOD、V-E水平的研究.实用妇产科杂志，1996，12(1):35-36.
4 魏莎莉，刘菊莲，杨戎，等.轻度子宫内膜异位症患者腹腔液对精子功能的影响.中国实用妇科与产科杂志，1999，15(10):613-614.
, 百拇医药
5 刘义，罗丽兰，赵海波.子宫内膜异位症腹腔液TNF-α和IL-6的测定及其人精子活动力和鼠胚胎的影响.中华妇产科杂志，2000，35(6):332-334.
6 高颖，刘义，罗丽兰.子宫内膜异位症病灶分泌的细胞因子与腹腔液微环境关系的研究.中华妇产科杂志，2001，36(12):723-726.
作者单位:1 300142天津解放军第254医院妇产科
2 100700北京军区总医院妇产科
(收稿日期:2003-06-28)
(编辑 张璇), http://www.100md.com(卢翠云)
关键词 子宫内膜异位症 不孕 神经-内分泌-免疫网络
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)11-0970-02
Study on effects of nerve-endocrine-immunological network
, 百拇医药
disorder on endometriosis with acyesis
Lu Cuiyun，Qi Rongyi，Lu Cuimin
No.254Hospital of PLA，Tianjin300142.
【Abstract】 Objective To examine the level of ET-1，SOD-1，LPO，IL-6，TNF-αin the endometriosis body and to discuss their possible function in acyesis.Methods We use operative implantation to establish the model of endometriosis，and take no operative mice as control group，examining the level of ET-1，SOD-1，LPO，IL-6，TNF-α，in blood by radioimmunoassay method.Resuts The level of ET-1，IL-6，TNF-αand LPO increased obˉviously(P<0.05or P<0.01)in the model endometriosis group，while SOD-1obviously decreased(P<0.05).Conclusion The effect of endometriosis on acyesis maybe related to the change of the level of ET-1，SOD-1，LPO，IL-6，TNF-αand the abnormal function of the body nerve-endocrine-immunological network.
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Key words endometriosis acyesis nerve-endocrine-immunological network
子宫内膜异位症(内异症)造成不孕的机理，目前还不十分清楚，一些研究表明:患者腹腔内环境的变化，可损害精子的功能、抑制早期胚胎的发育等。本研究通过对内异症动物模型血ET-1、SOD-1、LPO、IL-6和腹腔液TNF-α的水平测定，探讨其影响不孕的作用机制。
1 资料与方法
1.1 研究对象 选健康雌性SD未交配成年鼠35只，体重200～220g，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供(合格证号:医动字第01-3008号)。在二级实验室条件下，适应性饲养1周，随机抽取25只作为造模对象，其余10只作为正常对照组。
1.2 模型制作 连续5天行阴道脱落细胞学检查，择动情期行造模手术。用3%戊巴比妥钠按1mg/100g腹腔麻醉，常规消毒纵向剖腹，挑出左侧子宫角，剥离系膜，结扎切除中段子宫角部分约8mm，断端吻合。分离子宫内膜，取其中约5mm见方的子宫内膜片，以无损伤缝合线与腹壁缝合，注射庆大霉素0.4ml关腹，消炎粉外敷伤口。常规饲养4周后剖示，以移植物局部积液高度≥2mm为成功标准。剔除2只，余23只造模成功。
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1.3 检测方法
1.3.1 血ET-1水平的测定 股静脉取血，按放免试剂盒说明书测定。内皮素放免试剂盒由北京市福瑞生物工程公司提供。
1.3.2 血SOD-1、LPO、IL-6水平的测定 心脏取血，均按试剂说明书进行。SOD-1、LPO放免试剂盒由上海放射免疫分析技术研究所提供。IL-6放免试剂盒由北京东亚生物技术研究所提供。
1.3.3 腹腔液TNF-α的测定 L929细胞生长至对数生长期，将细胞调整为5×10 4 /ml加入96孔细胞培养板，每孔加细胞悬液100μl，分别加入待测样品及TNF-α标准品各100μl，37℃、5%CO 2 孵育箱培养48h后加入MTT(0.5mg/ml)50μl/孔，培养4h，加入盐酸异丙醇(1∶300)，振荡，酶标仪测其OD值，波长为570nm，绘出标准曲线，求出样品TNF-α的含量。
, 百拇医药
1.4 统计学方法 实验结果用ˉx±s表示，统计学方法为方差分析、t检验。
2 结果
见表1。
表1 血ET-1、SOD-1、LPO、IL-6和腹腔液TNF-α水平的测定结果 (略)
3 讨论
3.1 ET-1、SOD-1、LPO、IL-6、TNF-α水平变化与内异症不孕 内皮素(ET-1)是由21个氨基酸组成的生物活性多肽，是目前已知最强的收缩血管物质。研究表明:内皮素可能是一种神经递质，可影响儿茶酚胺、P物质等的释放 [1] ;其浓度与多系统疾病的发生发展均有密切联系;其受体广泛存在于许多器官中，其中也包括女性生殖器。ET-1与受体结合、激活后，使Ca 2+ 内流及动员细胞内Ca 2+ ，Ca 2+ 增加引起平滑肌收缩，最终引起血管收缩，而且这种收缩作用不易被消除和消退 [2] 。本实验结果显示:模型组ET-1水平明显高于正常组，推测:高水平的ET-1长时间影响子宫收缩而阻止精子上行、增强子宫动脉阻力，使子宫供血不足而致妊娠率下降。同时，影响卵巢的血液供应，使卵泡发育不良、黄体功能不足而致流产或不孕。
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超氧化物歧化酶(SOD-1)与机体多种疾病有密切关系。内异症患者体内巨噬细胞数量和活性明显增强，在其活化过程中，产生大量高度活性和细胞毒性的氧自由基(OFR)，如不能被抗氧化物完全清除，则使组织细胞破坏，发生脂质过氧化反应，产生大量的脂质过氧化物(LPO)，造成细胞膜的破裂或通透性增加或累及细胞器释放出各种水解酶 [3] 。推测:这一系列非细菌性炎性反应，使腹腔内环境发生物理及生化改变，对卵子的生长、发育成熟、排卵，精子的活动力、精卵结合能力等产生不良影响而致不孕。
研究证实，IL-6和TNF-α可阻止小鼠Ⅰ期胚的发育;促进卵泡闭锁，抑制未成熟卵泡的发育和优势卵泡的选择;损害精子功能、影响精子穿卵能力，干扰精卵结合而导致不孕或流产[4～6] 。而我们的实验结果显示:模型组IL-6、TNF-α的水平明显高于正常组。推测:内异症不孕的原因之一，与其体内高水平的IL-6和TNF-α有直接相关性。
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3.2 机体神经-内分泌-免疫网络与内异症不孕 我们的实验显示:内异症模型体内存在高水平的IL-6、TNF-α、ET-1、LPO和低水平的SOD-1。而细胞因子IL-6、TNF-α等能刺激动脉内皮增加ET-1的分泌，高水平的ET-1可显著抑制孕酮(P)的基础分泌和LH诱导的分泌，使黄体 功能不足，同时，通过影响卵巢和子宫的血液供应而不利于卵泡发育和孕卵着床。IL-6、TNF-α等细胞因子又可使体内巨噬细胞的数量和活性增加，通过一系列的生化、免疫和非细菌性炎性反应，使体内产生大量的LPO，并且使SOD-1水平进一步降低。破坏了体内细胞因子、神经递质、内分泌激素各自和相互间的平衡关系，导致机体神经-内分泌-免疫网络功能失常，进一步加重病情发展，造成恶性循环。推测:内异症患者神经、内分泌、免疫等任何一个系统发生异常，都可导致机体神经-内分泌-免疫网络功能失常，影响到精子、卵子、精卵结合、孕卵着床等任何一个环节，都会降低其妊娠的成功率。神经-内分泌-免疫网络功能失常影响其不孕的作用机制，大致有如下几个方面:(1)因盆腔粘连使输卵管与卵巢的正常解剖关系发生改变，影响输卵管的蠕动与排卵。(2)体内物理、生化、免疫等内环境的改变，对卵子、精子及精卵结合、着床等有杀伤和抑制作用。(3)抑制胚胎基因转录和滋养细胞增殖。(4)黄体水平不足。
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参考文献
1 黄勇华.内皮素与中枢神经系统疾病.北京医学，2000，22(1):43.
2 Yashida M，Suzuki A，Itoh T.et al.Immunoreactive endothelin-1conˉcentrations in follicular fluid of women with and without endometriosis undergoing in vitro fertilization-embryo transfer.J Physil，1994，477:253.
3 祝育得.轻度子宫内膜异位症腹腔液及血清中LPO、SOD、V-E水平的研究.实用妇产科杂志，1996，12(1):35-36.
4 魏莎莉，刘菊莲，杨戎，等.轻度子宫内膜异位症患者腹腔液对精子功能的影响.中国实用妇科与产科杂志，1999，15(10):613-614.
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5 刘义，罗丽兰，赵海波.子宫内膜异位症腹腔液TNF-α和IL-6的测定及其人精子活动力和鼠胚胎的影响.中华妇产科杂志，2000，35(6):332-334.
6 高颖，刘义，罗丽兰.子宫内膜异位症病灶分泌的细胞因子与腹腔液微环境关系的研究.中华妇产科杂志，2001，36(12):723-726.
作者单位:1 300142天津解放军第254医院妇产科
2 100700北京军区总医院妇产科
(收稿日期:2003-06-28)
(编辑 张璇), http://www.100md.com(卢翠云)