虎杖中白藜芦醇苷的提取分离及含量测定
【文献标识码】 B 【文章编号】 1726-6424(2003)09-0835-02
白藜芦醇具有抗肿瘤、抗炎、神经保护、治疗休克、对冠心病的防护等作用 [1] 。自1940年首次发现该成分以来，一直受到医药学界的重视。白藜芦醇在中药材虎杖(Rhizoma Polygoni Cuspidati)中多以苷的形式存在，并有少量游离白藜芦醇并存，是虎杖的重要活性成分。为此，本文就虎杖中白藜芦醇苷的提取分离及其含量测定作一概述。
1 提取与分离
白藜芦醇苷为白色针状结晶，难溶于冷水，能溶于热水、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等。目前尚无虎杖中白藜芦醇苷提取分离的成熟有效工艺，一般采用的有以下方法:
1.1 醇提法 多采用乙醇回流提取或索氏提取。张建超等利用正交设计确定了醇提最优条件为:95%乙醇15倍量，回流提取3次，2h/次 [2] 。也有用50%乙醇或甲醇提取的 [3，4] 。
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1.2 水提法 取虎杖粗粉水煎，过滤，浓缩。95%乙醇溶解过滤，除杂，回收乙醇。用乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液。减压回收乙酸乙酯至浸膏状，用稀乙醇溶解，放置，过滤，析出物即为白藜芦醇苷 [5] 。
1.3 胶囊薄层色谱法 采用此法可将白藜芦醇苷与虎杖中其他蒽醌类成分有效分离。薄层条件:法动相:3%十六烷三甲基溴化铵水溶液(CTAB)-乙酰丙酮(8:1.4)的微碱性溶液;固定相:聚酰胺铺板。取虎杖药粉置锥形瓶中，加入95%乙醇适量，浸渍数小时，取乙醇液点于聚酰胺板上，以上述展开剂上行展开，即可分离出白藜芦醇苷 [6] 。
2 含量测定
目前，有关虎杖中白藜芦醇苷含量测定方法的研究报道尚不多见，主要的有以下几种方法。
2.1 RP-HPLC法 [3] 色谱条件:色谱柱:C 18 柱;流动相:乙腈-水(20:80);流速1ml/min，检测波长303nm;灵敏度0.1AUFS;柱温为室温。白藜芦醇苷乙醇溶液浓度对峰面积在0.0066～0.0792μg/L浓度范围内线性关系良好(r=0.9999)，其精密度，重现性均良好(RSD1.1%)，为白藜芦醇苷含量常用的测定方法，加样回收率达到98.5%，RSD2.5%。
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2.2 薄层层析-紫外分光光度法 [4] 先将所测样品溶液(甲醇索氏回流提取6h，回收甲醇至小体积，再用甲醇稀释定容)于硅胶GF 254 薄层板上用氯仿-丙酮-甲酸-水(4:4:0.5:0.2)展开分离出白藜芦醇苷，刮取白藜芦醇苷Rf值所在位置的硅胶，置于小层析柱中(0.8cm×8cm)，收集甲醇洗脱液，然后再用紫外分光光度计在303nm波长处测定吸光度，按紫外分光光度法测得含量。其薄层回收率可达97.36%。
2.3 薄层扫描法 [4] 与2.2同样方法制得样品溶液，并按2.2同样层析条件展开后，将薄层板于薄层扫描仪中按下述条件:λ S =303nm，λ R =400nm，狭缝1.25cm×1.25mm，背景补偿，线性校正，CH=1，SX=3进行反射法锯齿扫描，扫描速度20mm/min，测定面积积分值，计算含量。该方法精密度RSD1.0%良好，回收率为96.90%，RSD1.61%。
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2.4 电化学发光法 白藜芦醇苷在磷酸盐中性介质中，在0.6V(vs Ag/AgCl)左右，对Lum inol在铂电极上的电化学发光有强烈的抑制作用，利用此性质建立了测定白藜芦醇苷电化学发光新方法 [7] 。
2.4.1 标准曲线的绘制 准确移取一定量白藜芦醇苷溶液于25ml的量瓶中，分别加入0.5ml0.3%H 2 O 2 和1.5ml5.0×10 -5 mol/L的Lum inol，用0.10mol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.4)定容;同法配制空白溶液。取所配溶液6ml于专用电解池中，再将该电解池置于超微弱化学发光测量仪暗室中;用多功能电化学分析仪，控制扫描速度为20mv/s，在0.3～0.8V(vs Ag/AgCl)电位范围内进行阳极化扫描，用超微弱化学发光测量仪记录电化学发光信号，同时多功能电化学分析仪记录电化学信号。以Lum inol-H 2 O 2 体系电化学发光信号的峰高与Luminol-H 2 O 2 体系中加入白藜芦醇苷后的电化学发光信号的峰高的差值ΔI进行白藜芦醇苷的定量分析。以白藜芦醇苷浓度对发光减少值进行线性回归，白藜芦醇苷浓度在0.05～12.6mg/L范围内线性关系良好。
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2.4.2 虎杖中白藜芦醇苷的含量测定 取适量中药材虎杖，经前处理后，用甲醇煮沸提取，处理后的样品采用标准曲线法测定其中的白藜芦醇苷含量。
白藜芦醇苷具有广泛的药理作用，其临床应用前景广阔，而我国虎杖资源十分丰富，因此不断探索从虎杖中提取白藜芦醇苷的成熟工艺方法显得尤为重要。另一方面，有效的白藜芦醇苷含量测定方法可作为药材或成品制剂的质量控制手段。
参考文献
1 赵克森.白藜芦醇的一般生物学作用.国外医学·卫生学分册，2002，29(6):374.
2 张建超，高新周，易德亮.虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究.时珍国医国药，2003，(4):22.
3 王磊，黄澜，张勉，等.虎杖商品药材中白藜芦醇苷的含量测定.中国中药杂志，2002，27(5):344.
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4 王丹，唐盈.中药虎杖中白藜芦醇苷含量测定的研究.中草药，1987，18(11):16.
5 舒任瑜.白藜芦醇苷生物活性及药理作用.儿科药学，2002，8(1):9.
6 郭玫，余晓辉，叶建青，等.应用胶囊薄层色谱分离鉴定虎杖中的成分.甘肃中医学院学报，1999，16(3):51.
7 唐玉海，靳菊情，刘芸，等.电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇苷含量的研究.西北药学杂志，2002，17(1):6.
作者单位:610031四川省成都市第三人民医院
(收稿日期:2003-09-22)
(编辑 梅子), 百拇医药(付昆)
白藜芦醇具有抗肿瘤、抗炎、神经保护、治疗休克、对冠心病的防护等作用 [1] 。自1940年首次发现该成分以来，一直受到医药学界的重视。白藜芦醇在中药材虎杖(Rhizoma Polygoni Cuspidati)中多以苷的形式存在，并有少量游离白藜芦醇并存，是虎杖的重要活性成分。为此，本文就虎杖中白藜芦醇苷的提取分离及其含量测定作一概述。
1 提取与分离
白藜芦醇苷为白色针状结晶，难溶于冷水，能溶于热水、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等。目前尚无虎杖中白藜芦醇苷提取分离的成熟有效工艺，一般采用的有以下方法:
1.1 醇提法 多采用乙醇回流提取或索氏提取。张建超等利用正交设计确定了醇提最优条件为:95%乙醇15倍量，回流提取3次，2h/次 [2] 。也有用50%乙醇或甲醇提取的 [3，4] 。
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1.2 水提法 取虎杖粗粉水煎，过滤，浓缩。95%乙醇溶解过滤，除杂，回收乙醇。用乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液。减压回收乙酸乙酯至浸膏状，用稀乙醇溶解，放置，过滤，析出物即为白藜芦醇苷 [5] 。
1.3 胶囊薄层色谱法 采用此法可将白藜芦醇苷与虎杖中其他蒽醌类成分有效分离。薄层条件:法动相:3%十六烷三甲基溴化铵水溶液(CTAB)-乙酰丙酮(8:1.4)的微碱性溶液;固定相:聚酰胺铺板。取虎杖药粉置锥形瓶中，加入95%乙醇适量，浸渍数小时，取乙醇液点于聚酰胺板上，以上述展开剂上行展开，即可分离出白藜芦醇苷 [6] 。
2 含量测定
目前，有关虎杖中白藜芦醇苷含量测定方法的研究报道尚不多见，主要的有以下几种方法。
2.1 RP-HPLC法 [3] 色谱条件:色谱柱:C 18 柱;流动相:乙腈-水(20:80);流速1ml/min，检测波长303nm;灵敏度0.1AUFS;柱温为室温。白藜芦醇苷乙醇溶液浓度对峰面积在0.0066～0.0792μg/L浓度范围内线性关系良好(r=0.9999)，其精密度，重现性均良好(RSD1.1%)，为白藜芦醇苷含量常用的测定方法，加样回收率达到98.5%，RSD2.5%。
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2.2 薄层层析-紫外分光光度法 [4] 先将所测样品溶液(甲醇索氏回流提取6h，回收甲醇至小体积，再用甲醇稀释定容)于硅胶GF 254 薄层板上用氯仿-丙酮-甲酸-水(4:4:0.5:0.2)展开分离出白藜芦醇苷，刮取白藜芦醇苷Rf值所在位置的硅胶，置于小层析柱中(0.8cm×8cm)，收集甲醇洗脱液，然后再用紫外分光光度计在303nm波长处测定吸光度，按紫外分光光度法测得含量。其薄层回收率可达97.36%。
2.3 薄层扫描法 [4] 与2.2同样方法制得样品溶液，并按2.2同样层析条件展开后，将薄层板于薄层扫描仪中按下述条件:λ S =303nm，λ R =400nm，狭缝1.25cm×1.25mm，背景补偿，线性校正，CH=1，SX=3进行反射法锯齿扫描，扫描速度20mm/min，测定面积积分值，计算含量。该方法精密度RSD1.0%良好，回收率为96.90%，RSD1.61%。
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2.4 电化学发光法 白藜芦醇苷在磷酸盐中性介质中，在0.6V(vs Ag/AgCl)左右，对Lum inol在铂电极上的电化学发光有强烈的抑制作用，利用此性质建立了测定白藜芦醇苷电化学发光新方法 [7] 。
2.4.1 标准曲线的绘制 准确移取一定量白藜芦醇苷溶液于25ml的量瓶中，分别加入0.5ml0.3%H 2 O 2 和1.5ml5.0×10 -5 mol/L的Lum inol，用0.10mol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.4)定容;同法配制空白溶液。取所配溶液6ml于专用电解池中，再将该电解池置于超微弱化学发光测量仪暗室中;用多功能电化学分析仪，控制扫描速度为20mv/s，在0.3～0.8V(vs Ag/AgCl)电位范围内进行阳极化扫描，用超微弱化学发光测量仪记录电化学发光信号，同时多功能电化学分析仪记录电化学信号。以Lum inol-H 2 O 2 体系电化学发光信号的峰高与Luminol-H 2 O 2 体系中加入白藜芦醇苷后的电化学发光信号的峰高的差值ΔI进行白藜芦醇苷的定量分析。以白藜芦醇苷浓度对发光减少值进行线性回归，白藜芦醇苷浓度在0.05～12.6mg/L范围内线性关系良好。
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2.4.2 虎杖中白藜芦醇苷的含量测定 取适量中药材虎杖，经前处理后，用甲醇煮沸提取，处理后的样品采用标准曲线法测定其中的白藜芦醇苷含量。
白藜芦醇苷具有广泛的药理作用，其临床应用前景广阔，而我国虎杖资源十分丰富，因此不断探索从虎杖中提取白藜芦醇苷的成熟工艺方法显得尤为重要。另一方面，有效的白藜芦醇苷含量测定方法可作为药材或成品制剂的质量控制手段。
参考文献
1 赵克森.白藜芦醇的一般生物学作用.国外医学·卫生学分册，2002，29(6):374.
2 张建超，高新周，易德亮.虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究.时珍国医国药，2003，(4):22.
3 王磊，黄澜，张勉，等.虎杖商品药材中白藜芦醇苷的含量测定.中国中药杂志，2002，27(5):344.
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4 王丹，唐盈.中药虎杖中白藜芦醇苷含量测定的研究.中草药，1987，18(11):16.
5 舒任瑜.白藜芦醇苷生物活性及药理作用.儿科药学，2002，8(1):9.
6 郭玫，余晓辉，叶建青，等.应用胶囊薄层色谱分离鉴定虎杖中的成分.甘肃中医学院学报，1999，16(3):51.
7 唐玉海，靳菊情，刘芸，等.电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇苷含量的研究.西北药学杂志，2002，17(1):6.
作者单位:610031四川省成都市第三人民医院
(收稿日期:2003-09-22)
(编辑 梅子), 百拇医药(付昆)