达肺冲剂抗结核作用机制方面的实验研究
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-077X(2003)11-0986-02
肺结核是呼吸系统的一种常见病，其病原体被发现后的百余年内，疫情明显改善，但令人不安的是，自20世纪80年代中后期以来，由于多种耐药结核菌的增加及糖尿病、艾滋病的蔓延，结构病的发病率再次呈现上升趋势 [1] 。在世界范围内，结核病成为由传染病而亡故的首位死因。据1996年世界卫生组织有关资料报道，全球约9亿人已感染结核杆菌(MTB)，每秒钟有一人受染 [2] 。目前，结核病的治疗以化疗为主，但耐药性广泛存在及化疗药物的毒副作用较大均是困惑医疗界的难题，而中医药在这方面积累了大量宝贵经验，有其独到之处，故挖掘祖国医学宝库，寻找疗效理想的中药治疗药物已成为当务之急。本研究对达肺冲剂治疗结核病的机制进行探讨。
1 材料与方法
1.1 动物及分组 选择100只健康小白鼠，雌雄各半，按随机化原则分为5组，即模型组、达肺高剂量治疗组、达肺低剂量治疗组、乙胺丁醇治疗组、正常对照组。
, 百拇医药
1.2 感染方法 局部消毒后由小鼠尾静脉注射0.1ml菌悬液，正常对照组尾静脉注射等量生理盐水。
1.3 用药与检测方法 感染后第3日开始每日灌胃给药1次，0.5ml/次，模型组死亡半数后停止治疗，末次给药后次日脱臼处死小鼠，测定以下指标 [3，4] :(1)肺脏涂片检查结核菌:无菌术下统一取右肺下叶直接涂片，进行齐—尼氏染色，参照1982年全国结核病细菌学检验方法规程分级。(2)肺脏病理组织切片检查:无菌术下统一取左肺下叶组织，福尔马林固定，常规石蜡切片，HE染色与齐—尼氏染色配合做病理观察。(3)T淋巴细胞及其亚群检测:采用微量补体依赖性细胞毒实验法，无菌取出小鼠脾脏，制成脾细胞悬液，将细胞浓度调为2×10 6 /ml，以50μl加入40孔塑料培养板中，分别加入抗Thy-1、1抗L 3 T4 的抗Lyt 2 单克隆抗体50μl，37℃孵育30min后加入1:5豚鼠血清补体50μl，37℃继续孵育1h后上述各孔内加入1%伊红Y和0.8%戊二醛15μl，混匀后滴片计数200个细胞，计数死细胞的百分数(实验同时设脾细胞加补体，脾细胞加单克隆抗体对照孔)。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 计数资料采用t检验，计量资料采用秩和检验，实验数据以均值标准差(略)表示。
2 实验结果
2.1 肺脏涂片细菌学检查 结果见表1。
表1 小鼠肺脏涂片酸菌检查结果(略)
2.2 达肺冲剂对实验性肺结核小鼠T淋巴细胞及其亚群的影响 结果见表2。
表2 各组小鼠T淋巴细胞及其亚群测定结果 (略)
由表2可以看出，各治疗组Thy-1 + L3 T 4 /Lyt +2 三项指标显著高于模型组(P<0.05)，值得注意的是，达肺高、低剂量组此三项指标均显著高于乙胺丁醇组(P<0.05)，且达肺低剂量组与正常组各项指标比较均无显著性(P>0.05)，从数值上看，各治疗组Lyt 2+ 均高于模型组，但经统计学处理，仅达肺低剂量组与模型组差异无显著性(P<0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
近年来，在化疗的同时，机体的免疫功能提高问题日益受到人们的关注，大量研究表明，结核菌在机体内是否持续感染与机体的免疫状态，特别是细胞免疫功能密切相关，当机体的细胞免疫功能处于低下紊乱状态时可显著影响化疗的效果 [5，6] 。在临床上，辅助性T细胞与抑制性T细胞的比值(相当于L3 T 4 /Lyt 2+ )已成为估计结核患者病情转归及预后的一项重要指标 [7，8] 。本实验从细菌学和免疫学角度对达肺冲剂的作用机制进行了探讨，肺脏涂片镜检结果表明，单独应用达肺冲剂或乙胺丁醇，对体内结核菌生长均有一定的抑制作用，但二者抑菌作用接近，差异无显著性(P>0.05);而T淋巴细胞及其亚群检测结果显示，模型组小鼠TLC总数(Thy-1 + )下降显著，L3 T 4 /Lyt 2+ 明显降低，这表明模型组小鼠细胞免疫功能紊乱低下，与文献报道一致 [9] 。与模型组比较，各治疗组小鼠细胞免疫功能均有明显恢复，其中达肺高、低剂量组Thy-1 + 、L 3 T 4 /Lyt 2+ 各项指标显著高于乙胺丁醇组，且达肺低剂量治疗组各项数值基本接近 正常，与正常组比较差异无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
本研究结果表明，达肺冲剂可能通过抑制结核菌在体内生长及调节细胞免疫功能的机制来达到治疗效果，其对细胞免疫功能调节作用优于乙胺丁醇，此外是否存在其它作用机制有待于今后深入探讨。
参考文献
1 严碧涯.防治结核病和艾滋病.中华结核和呼吸杂志，1996，19(3):131.
2 杨东亮.感染免疫学，武汉:湖北科学技术出版社，1998，12:68-75.
3 Grange JM.The mystery of the mycobacterial“persistor”，Tuber lung Dis，1992，73:249.
4 Nair J，Rouse DA，Bai GH，et al.The rpsl gene and streptomycin of reˉsistance Mycobacterium tuberculosis.Mol Micrlbiol，1993，10:521.
, http://www.100md.com
5 Gllins FM.The immunology of tuberculosis.Am Rev Respir Dis，1982，125:42.
6 罗永艾.结构病免疫研究进展.国外医学·内科分册，1982，(4):180.
7 樊兴豪，高航.用单克隆抗体花环试验检测肺结核患者的T细胞亚群.中华结核和呼吸杂志，1990，13:277.
8 Syriala H，Surcel HM，Ilonel J.Low CD 4 /CD 8 lymphocyte ratio acute myocardial infarction.Clin Exp Immunol，1991，83:326.
9 孙吉节译.结核病的免疫.国外医学·呼吸分册，1983，(2):58.
作者单位:1 150040黑龙江中医药大学附属一院
2 150086哈尔滨医科大学附属第二医院
3 157000黑龙江牡丹江医学院附属第一医院
(收稿日期:2003-08-14)
(编辑黄 杰), http://www.100md.com(刘丽)
肺结核是呼吸系统的一种常见病，其病原体被发现后的百余年内，疫情明显改善，但令人不安的是，自20世纪80年代中后期以来，由于多种耐药结核菌的增加及糖尿病、艾滋病的蔓延，结构病的发病率再次呈现上升趋势 [1] 。在世界范围内，结核病成为由传染病而亡故的首位死因。据1996年世界卫生组织有关资料报道，全球约9亿人已感染结核杆菌(MTB)，每秒钟有一人受染 [2] 。目前，结核病的治疗以化疗为主，但耐药性广泛存在及化疗药物的毒副作用较大均是困惑医疗界的难题，而中医药在这方面积累了大量宝贵经验，有其独到之处，故挖掘祖国医学宝库，寻找疗效理想的中药治疗药物已成为当务之急。本研究对达肺冲剂治疗结核病的机制进行探讨。
1 材料与方法
1.1 动物及分组 选择100只健康小白鼠，雌雄各半，按随机化原则分为5组，即模型组、达肺高剂量治疗组、达肺低剂量治疗组、乙胺丁醇治疗组、正常对照组。
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1.2 感染方法 局部消毒后由小鼠尾静脉注射0.1ml菌悬液，正常对照组尾静脉注射等量生理盐水。
1.3 用药与检测方法 感染后第3日开始每日灌胃给药1次，0.5ml/次，模型组死亡半数后停止治疗，末次给药后次日脱臼处死小鼠，测定以下指标 [3，4] :(1)肺脏涂片检查结核菌:无菌术下统一取右肺下叶直接涂片，进行齐—尼氏染色，参照1982年全国结核病细菌学检验方法规程分级。(2)肺脏病理组织切片检查:无菌术下统一取左肺下叶组织，福尔马林固定，常规石蜡切片，HE染色与齐—尼氏染色配合做病理观察。(3)T淋巴细胞及其亚群检测:采用微量补体依赖性细胞毒实验法，无菌取出小鼠脾脏，制成脾细胞悬液，将细胞浓度调为2×10 6 /ml，以50μl加入40孔塑料培养板中，分别加入抗Thy-1、1抗L 3 T4 的抗Lyt 2 单克隆抗体50μl，37℃孵育30min后加入1:5豚鼠血清补体50μl，37℃继续孵育1h后上述各孔内加入1%伊红Y和0.8%戊二醛15μl，混匀后滴片计数200个细胞，计数死细胞的百分数(实验同时设脾细胞加补体，脾细胞加单克隆抗体对照孔)。
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1.4 统计学处理 计数资料采用t检验，计量资料采用秩和检验，实验数据以均值标准差(略)表示。
2 实验结果
2.1 肺脏涂片细菌学检查 结果见表1。
表1 小鼠肺脏涂片酸菌检查结果(略)
2.2 达肺冲剂对实验性肺结核小鼠T淋巴细胞及其亚群的影响 结果见表2。
表2 各组小鼠T淋巴细胞及其亚群测定结果 (略)
由表2可以看出，各治疗组Thy-1 + L3 T 4 /Lyt +2 三项指标显著高于模型组(P<0.05)，值得注意的是，达肺高、低剂量组此三项指标均显著高于乙胺丁醇组(P<0.05)，且达肺低剂量组与正常组各项指标比较均无显著性(P>0.05)，从数值上看，各治疗组Lyt 2+ 均高于模型组，但经统计学处理，仅达肺低剂量组与模型组差异无显著性(P<0.05)。
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3 讨论
近年来，在化疗的同时，机体的免疫功能提高问题日益受到人们的关注，大量研究表明，结核菌在机体内是否持续感染与机体的免疫状态，特别是细胞免疫功能密切相关，当机体的细胞免疫功能处于低下紊乱状态时可显著影响化疗的效果 [5，6] 。在临床上，辅助性T细胞与抑制性T细胞的比值(相当于L3 T 4 /Lyt 2+ )已成为估计结核患者病情转归及预后的一项重要指标 [7，8] 。本实验从细菌学和免疫学角度对达肺冲剂的作用机制进行了探讨，肺脏涂片镜检结果表明，单独应用达肺冲剂或乙胺丁醇，对体内结核菌生长均有一定的抑制作用，但二者抑菌作用接近，差异无显著性(P>0.05);而T淋巴细胞及其亚群检测结果显示，模型组小鼠TLC总数(Thy-1 + )下降显著，L3 T 4 /Lyt 2+ 明显降低，这表明模型组小鼠细胞免疫功能紊乱低下，与文献报道一致 [9] 。与模型组比较，各治疗组小鼠细胞免疫功能均有明显恢复，其中达肺高、低剂量组Thy-1 + 、L 3 T 4 /Lyt 2+ 各项指标显著高于乙胺丁醇组，且达肺低剂量治疗组各项数值基本接近 正常，与正常组比较差异无显著性(P>0.05)。
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本研究结果表明，达肺冲剂可能通过抑制结核菌在体内生长及调节细胞免疫功能的机制来达到治疗效果，其对细胞免疫功能调节作用优于乙胺丁醇，此外是否存在其它作用机制有待于今后深入探讨。
参考文献
1 严碧涯.防治结核病和艾滋病.中华结核和呼吸杂志，1996，19(3):131.
2 杨东亮.感染免疫学，武汉:湖北科学技术出版社，1998，12:68-75.
3 Grange JM.The mystery of the mycobacterial“persistor”，Tuber lung Dis，1992，73:249.
4 Nair J，Rouse DA，Bai GH，et al.The rpsl gene and streptomycin of reˉsistance Mycobacterium tuberculosis.Mol Micrlbiol，1993，10:521.
, http://www.100md.com
5 Gllins FM.The immunology of tuberculosis.Am Rev Respir Dis，1982，125:42.
6 罗永艾.结构病免疫研究进展.国外医学·内科分册，1982，(4):180.
7 樊兴豪，高航.用单克隆抗体花环试验检测肺结核患者的T细胞亚群.中华结核和呼吸杂志，1990，13:277.
8 Syriala H，Surcel HM，Ilonel J.Low CD 4 /CD 8 lymphocyte ratio acute myocardial infarction.Clin Exp Immunol，1991，83:326.
9 孙吉节译.结核病的免疫.国外医学·呼吸分册，1983，(2):58.
作者单位:1 150040黑龙江中医药大学附属一院
2 150086哈尔滨医科大学附属第二医院
3 157000黑龙江牡丹江医学院附属第一医院
(收稿日期:2003-08-14)
(编辑黄 杰), http://www.100md.com(刘丽)