血管内皮生长因子水平与2型糖尿病肾病的关系探讨
【摘要】 目的 探讨2型糖尿病(NIDDM)患者血液及尿中血管内皮生长因子(VEGF)水平及其与肾脏微血管病变的关系。方法 检测了241例NIDDM患者和56例正常人的血清、尿液中的VEGF含量，按尿微量白蛋白(MA)水平分组比较评价。结果 尿VEGF水平在正常对照组、正常白蛋白尿、微量白蛋白尿、临床蛋白尿等组别中逐渐升高，且后两组比前两组比较有显著性增高(P<0.01);而血VEGF仅在临床蛋白尿组明显增高。尿VEGF与MA、α 1 MG正相关显著，而与血VEGF、Cr等无相关性。结论 VEGF在糖尿病肾脏中的过度表达可能在肾病的发展中起一定的作用;尿VEGF测定是早期诊断肾病的一个良好指标。
关键词 糖尿病肾病 血管内皮生长因子 尿微量白蛋白
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2003)12-1070-02
Measurement of vascular endothelial factor in
, 百拇医药
type 2 diabetic mellitus with nephropathy
He Xiaohui，Zhang Songzhao，Shen Hanchao
Department of Clinical Laboratory，the Second Affiliated Hopspital of
University of Zhejiang School of Medicine，Hangzhou 310009.
【Abstract】 Objective To investigate the level of vascular endothelial factor(VEGF)in type2diabetic melliˉtus with and without nephropathy.Methods Measurement of VEGFwas demonstrated in serum and urine sample from56control subjects and from241individuals with type2diabetic mellitus with various albuminuric levels.Results Urinary VEGF concentration was significantly increased with the degree of albuminuria:normoalbuminuric，microalbuˉminuric and proteinuric patients(P<0.01)，but serum VEGF only in proteinuric patients.Urinary VEGF level was correlated positivelywith the concentration of urinary microalbumin andα 1 -microglobulin and there was no correlation between urinary VEGF and serumVEGF of creatinine.Conclusion The increased expression of VEGF in kidney with diabetic mellitus maybe promote the progression of diabetic nephropathy.Urinary VEGF would be used as favorable markers of early diabetic nephropathy.
, 百拇医药
Key words diabetic nephropathy vascular endothelial factor urinary microalbumin
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一种多功能的细胞因子，具有增加血管通透性、促内皮细胞分裂增殖和转移、血管维持生成等作用。除了与肿瘤的侵袭与转移密切相关外，近年来研究发现VEGF表达与糖尿病微血管病变的关系也令人瞩目 [1] 。目前普遍认为，VEGF是参与糖尿病视网膜病变的主要致病因子 [2] 。但VEGF在同样属于糖尿病微血管病变的肾病(DN)中的作用如何，国内外尚少见有报道。本文就此检测了2型糖尿病(NIDDM)患者血、尿VEGF和尿微量白蛋白等一些指标，探讨患者体内VEGF水平与肾脏微血管病变的相关性，以探讨尿VEGF检测的临床意义。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 对象 患者来自本院门诊和住院的NIDDM，共241例，男107例，女134例，28～75岁，平均年龄48.6岁，病程为2周～35年，均由我院内分泌科按美国糖尿病协会(ADA)1997年新的诊断标准 [3] 确诊，无其它任何全身性疾病。按尿微量白蛋白(MA)水平分为三组:正常白蛋白尿(NA)组63例(MA<30mg/g·cr)，微量白蛋白尿(MA)组107例(30mg/g·cr≤MA≤300mg/g·cr)，临床蛋白尿(CA)组71例(MA>300mg/g·cr)。正常对照都是为自本院单位体验者56例，均经尿常规等实验和临床体诊全部正常。
1.2 方法 (1)血、尿标本:收取待检查空腹静脉血3ml，低温离心分离血清，置-20℃冻存待检，并采集其清晨第二次尿液标本5ml，离心取上清液，置-20℃冻存，批量测定。血清标本测定VEGF和肌酐(Cr)，尿液标本测定VEGF、尿微量白蛋白(MA)和α 1 微球蛋白(α1 MG)、Cr等。肌酐在AU2700全自动生化仪上检测，采用苦味酸法;尿微量蛋白在ARRAY360仪上测定，采用速率散射比浊法;VEGF试剂盒来自CHEMICON公司，用ELISA手工测定，采用双抗体夹心法。所有操作均按仪器、试剂要求严格进行。
, 百拇医药
1.3 统计学处理 应用SPSS10.0软件分析，经正态性检验，尿VEGF等资料呈对数正态分布，但列表资料仍以(ˉx±s)表示。其组间比较采用Mann-Whitney U test的秩和检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。
2 结果
2.1 不同糖尿病患者组血、尿VEGF含量 见表1。
表1 不同糖尿病患者组血、尿VEGF 含量比较(略)
尿VEGF水平在正常对照组、正常白蛋白尿、微量白蛋白、临床蛋白尿等组中逐渐升高，且后两组比对照组显著增高(P<0.01);而血VEGF仅在临床蛋白尿组明显增高(P<0.05)。
2.2 尿VEGF与血、尿其它多项指标的相关性 尿VEGF水平与MA、α 1 MG显著相关(r分别为0.54、0.86，P<0.01);而与血VEGF、Cr相关程度低(r分别为0.116、0.110，P<0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
VEGF在1983年最初作为血管通透因子被发现，因为它增加血管通透性的能力比组胺强5000倍，也能促进单核细胞、血管平滑肌细胞趋化、移行，因而VEGF在一些增殖性疾病中如肿瘤等过度表达，产生一些生理及病理作用 [4] 。近年来研究发现，VEGF表达与某些肾脏疾病密切相关 [5] 。本文实验显示在糖尿病肾病患者尿VEGF含量随着蛋白尿程度升高而增高，提示了VEGF可能参与了糖尿病肾病的发生和发展。
正常情况下，肾脏的VEGF主要在肾小球足细胞和远端肾小管处有一定的表达，而在肾小球内皮细胞上有Flt-1和Flk-1两种高亲和力受体。VEGF必须通过受体结合而发挥生物学效应，在某种程度上可以恢复肾小球和肾小管的结构和功能。但在肾脏疾病中，VEGF在表达的位置和程度会有所不同，持续的或急剧VEGF表达会导致肾脏的损害 [6] 。本文就糖尿病患者来说，持续的高水平血糖，机体缺血、缺氧等多种因素协同下，引起VEGF在肾小球足细胞和近端肾小管上皮细胞处表达增强，导致血管通透性增加，首先造成微量白蛋白尿的发生。随着糖尿病的进展，VEGF在系膜细胞处也开始表达，内皮细胞、系膜细胞、间质细胞等开始增生，逐渐导致肾小球硬化。在硬化区VEGF表达反而下降，但在近端肾小管处表达增强。本研究在做了少 量的肾组织VEGF免疫组化反映了这些结论，将在以后的累积中作一些报道。从本文的血、尿VEGF检测来看，尿VEGF含最随着糖尿病肾病分期的进展而显著增高(P<0.01)。而血VEGF水平仅在临床蛋白尿组中增高(P<0.05)，在正常和微量白蛋白尿组中无差异，血、尿VEGF水平并无明显相关性(r=0.116)，由于VEGF分子量仅为40kD，这说明在早期肾病，尿中的VEGF不是来源于血中的VEGF，而是来自于高度表达VEGF的肾脏病变区。在临床蛋白尿时，尿VEGF由于肾小球广泛破坏，其含量部分来源于血中VEGF。通过尿VEGF与尿中微量蛋白相关性比较，发现与尿α 1 MG(r=0.86，P<0.01)显著相关，与尿MA(r=0.54，P<0.01)也明显相关，因此尿VEGF水平可以反映糖尿病肾病的进展性、活动性。
, 百拇医药
从本文看出，VEGF可能参与了糖尿病肾病的发生、发展。在2型糖尿病肾微血管病变中的作用是一个长期、持续、渐进的过程。在不同肾脏疾病条件下，VEGF表达与作用的研究将是一个非常有意义的课题。另外，尿VEGF水平升高可以是糖尿病早期肾损害的标志，与其它尿微量蛋白相比 [7] ，还反映了肾病的进展性和活动性。因此，它有可能作为DN的尿液诊断的良好指标。
参考文献
1 Lloyo，Paul，Aielloetal.Role of vascular endothelial growth factor in diaˉbetic vascular complications.Kidney International，2000，58(77):113-119.
2 董白霞，高福禄.血管内皮生长因子与糖尿病性视网膜病变.解剖科学进展，2001，7:44-47.
, 百拇医药
3 The Expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus.Report of the Expert Committee on the Diagnosis and Classifiˉcation of Diabetes Mellitus.Diabetes Care，1997，20:1183-1197.
4 Senger DR，Galli SJ，Dvorak AM，et al.Tumor cell secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid.Science，1983，213:983-985.
5 Shulman K，Rosen S，Tognazzi K，et al.Expression of vascular permeˉability factor(VPF/VEGF)is altered in many glomerular diseases.J Am Sov Nephrol，1996，7:661-666.
, 百拇医药
6 Unemori EN，Ferrara N，Bauer EA et al.Vascular endothelial growth factor induces interstitial collagenase expression in human endothelial cells.J Cell Physiol，1992，153:557-52.
7 林表，阮诗玮，许少峰，等.尿微量蛋白联合尿酶诊断肾脏早期损伤.中华检验医学杂志，1999，22:30-32.
作者单位:310009杭州浙江大学医学院附属第二医院检验科
(收稿日期:2003-10-13)
(编辑 刘娜), 百拇医药(何晓晖 张松照 沈汉超)
关键词 糖尿病肾病 血管内皮生长因子 尿微量白蛋白
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2003)12-1070-02
Measurement of vascular endothelial factor in
, 百拇医药
type 2 diabetic mellitus with nephropathy
He Xiaohui，Zhang Songzhao，Shen Hanchao
Department of Clinical Laboratory，the Second Affiliated Hopspital of
University of Zhejiang School of Medicine，Hangzhou 310009.
【Abstract】 Objective To investigate the level of vascular endothelial factor(VEGF)in type2diabetic melliˉtus with and without nephropathy.Methods Measurement of VEGFwas demonstrated in serum and urine sample from56control subjects and from241individuals with type2diabetic mellitus with various albuminuric levels.Results Urinary VEGF concentration was significantly increased with the degree of albuminuria:normoalbuminuric，microalbuˉminuric and proteinuric patients(P<0.01)，but serum VEGF only in proteinuric patients.Urinary VEGF level was correlated positivelywith the concentration of urinary microalbumin andα 1 -microglobulin and there was no correlation between urinary VEGF and serumVEGF of creatinine.Conclusion The increased expression of VEGF in kidney with diabetic mellitus maybe promote the progression of diabetic nephropathy.Urinary VEGF would be used as favorable markers of early diabetic nephropathy.
, 百拇医药
Key words diabetic nephropathy vascular endothelial factor urinary microalbumin
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一种多功能的细胞因子，具有增加血管通透性、促内皮细胞分裂增殖和转移、血管维持生成等作用。除了与肿瘤的侵袭与转移密切相关外，近年来研究发现VEGF表达与糖尿病微血管病变的关系也令人瞩目 [1] 。目前普遍认为，VEGF是参与糖尿病视网膜病变的主要致病因子 [2] 。但VEGF在同样属于糖尿病微血管病变的肾病(DN)中的作用如何，国内外尚少见有报道。本文就此检测了2型糖尿病(NIDDM)患者血、尿VEGF和尿微量白蛋白等一些指标，探讨患者体内VEGF水平与肾脏微血管病变的相关性，以探讨尿VEGF检测的临床意义。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 对象 患者来自本院门诊和住院的NIDDM，共241例，男107例，女134例，28～75岁，平均年龄48.6岁，病程为2周～35年，均由我院内分泌科按美国糖尿病协会(ADA)1997年新的诊断标准 [3] 确诊，无其它任何全身性疾病。按尿微量白蛋白(MA)水平分为三组:正常白蛋白尿(NA)组63例(MA<30mg/g·cr)，微量白蛋白尿(MA)组107例(30mg/g·cr≤MA≤300mg/g·cr)，临床蛋白尿(CA)组71例(MA>300mg/g·cr)。正常对照都是为自本院单位体验者56例，均经尿常规等实验和临床体诊全部正常。
1.2 方法 (1)血、尿标本:收取待检查空腹静脉血3ml，低温离心分离血清，置-20℃冻存待检，并采集其清晨第二次尿液标本5ml，离心取上清液，置-20℃冻存，批量测定。血清标本测定VEGF和肌酐(Cr)，尿液标本测定VEGF、尿微量白蛋白(MA)和α 1 微球蛋白(α1 MG)、Cr等。肌酐在AU2700全自动生化仪上检测，采用苦味酸法;尿微量蛋白在ARRAY360仪上测定，采用速率散射比浊法;VEGF试剂盒来自CHEMICON公司，用ELISA手工测定，采用双抗体夹心法。所有操作均按仪器、试剂要求严格进行。
, 百拇医药
1.3 统计学处理 应用SPSS10.0软件分析，经正态性检验，尿VEGF等资料呈对数正态分布，但列表资料仍以(ˉx±s)表示。其组间比较采用Mann-Whitney U test的秩和检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。
2 结果
2.1 不同糖尿病患者组血、尿VEGF含量 见表1。
表1 不同糖尿病患者组血、尿VEGF 含量比较(略)
尿VEGF水平在正常对照组、正常白蛋白尿、微量白蛋白、临床蛋白尿等组中逐渐升高，且后两组比对照组显著增高(P<0.01);而血VEGF仅在临床蛋白尿组明显增高(P<0.05)。
2.2 尿VEGF与血、尿其它多项指标的相关性 尿VEGF水平与MA、α 1 MG显著相关(r分别为0.54、0.86，P<0.01);而与血VEGF、Cr相关程度低(r分别为0.116、0.110，P<0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
VEGF在1983年最初作为血管通透因子被发现，因为它增加血管通透性的能力比组胺强5000倍，也能促进单核细胞、血管平滑肌细胞趋化、移行，因而VEGF在一些增殖性疾病中如肿瘤等过度表达，产生一些生理及病理作用 [4] 。近年来研究发现，VEGF表达与某些肾脏疾病密切相关 [5] 。本文实验显示在糖尿病肾病患者尿VEGF含量随着蛋白尿程度升高而增高，提示了VEGF可能参与了糖尿病肾病的发生和发展。
正常情况下，肾脏的VEGF主要在肾小球足细胞和远端肾小管处有一定的表达，而在肾小球内皮细胞上有Flt-1和Flk-1两种高亲和力受体。VEGF必须通过受体结合而发挥生物学效应，在某种程度上可以恢复肾小球和肾小管的结构和功能。但在肾脏疾病中，VEGF在表达的位置和程度会有所不同，持续的或急剧VEGF表达会导致肾脏的损害 [6] 。本文就糖尿病患者来说，持续的高水平血糖，机体缺血、缺氧等多种因素协同下，引起VEGF在肾小球足细胞和近端肾小管上皮细胞处表达增强，导致血管通透性增加，首先造成微量白蛋白尿的发生。随着糖尿病的进展，VEGF在系膜细胞处也开始表达，内皮细胞、系膜细胞、间质细胞等开始增生，逐渐导致肾小球硬化。在硬化区VEGF表达反而下降，但在近端肾小管处表达增强。本研究在做了少 量的肾组织VEGF免疫组化反映了这些结论，将在以后的累积中作一些报道。从本文的血、尿VEGF检测来看，尿VEGF含最随着糖尿病肾病分期的进展而显著增高(P<0.01)。而血VEGF水平仅在临床蛋白尿组中增高(P<0.05)，在正常和微量白蛋白尿组中无差异，血、尿VEGF水平并无明显相关性(r=0.116)，由于VEGF分子量仅为40kD，这说明在早期肾病，尿中的VEGF不是来源于血中的VEGF，而是来自于高度表达VEGF的肾脏病变区。在临床蛋白尿时，尿VEGF由于肾小球广泛破坏，其含量部分来源于血中VEGF。通过尿VEGF与尿中微量蛋白相关性比较，发现与尿α 1 MG(r=0.86，P<0.01)显著相关，与尿MA(r=0.54，P<0.01)也明显相关，因此尿VEGF水平可以反映糖尿病肾病的进展性、活动性。
, 百拇医药
从本文看出，VEGF可能参与了糖尿病肾病的发生、发展。在2型糖尿病肾微血管病变中的作用是一个长期、持续、渐进的过程。在不同肾脏疾病条件下，VEGF表达与作用的研究将是一个非常有意义的课题。另外，尿VEGF水平升高可以是糖尿病早期肾损害的标志，与其它尿微量蛋白相比 [7] ，还反映了肾病的进展性和活动性。因此，它有可能作为DN的尿液诊断的良好指标。
参考文献
1 Lloyo，Paul，Aielloetal.Role of vascular endothelial growth factor in diaˉbetic vascular complications.Kidney International，2000，58(77):113-119.
2 董白霞，高福禄.血管内皮生长因子与糖尿病性视网膜病变.解剖科学进展，2001，7:44-47.
, 百拇医药
3 The Expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus.Report of the Expert Committee on the Diagnosis and Classifiˉcation of Diabetes Mellitus.Diabetes Care，1997，20:1183-1197.
4 Senger DR，Galli SJ，Dvorak AM，et al.Tumor cell secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid.Science，1983，213:983-985.
5 Shulman K，Rosen S，Tognazzi K，et al.Expression of vascular permeˉability factor(VPF/VEGF)is altered in many glomerular diseases.J Am Sov Nephrol，1996，7:661-666.
, 百拇医药
6 Unemori EN，Ferrara N，Bauer EA et al.Vascular endothelial growth factor induces interstitial collagenase expression in human endothelial cells.J Cell Physiol，1992，153:557-52.
7 林表，阮诗玮，许少峰，等.尿微量蛋白联合尿酶诊断肾脏早期损伤.中华检验医学杂志，1999，22:30-32.
作者单位:310009杭州浙江大学医学院附属第二医院检验科
(收稿日期:2003-10-13)
(编辑 刘娜), 百拇医药(何晓晖 张松照 沈汉超)