儿茶提取物抗过敏反应的实验研究
【摘要】 目的 研究儿茶提取物抗过敏反应的作用。方法 采用大鼠同种被动皮肤过敏反应(PCA)。结果 儿茶提取物50mg/ml和25mg/ml两个剂量组的PCA抑制率分别是41.45%和45.52%;25mg/ml剂量组的PCA模型大鼠血清中IgE抗体水平下降。同时观察了抗原攻击前不同时间给予儿茶提取物的PCA抑制率变化，结果显示在抗原攻击前2h给予儿茶提取物PCA抑制率最大(46.2%)。结论 研究表明中药儿茶提取物对过敏反应有一定的抑制作用。
关键词 儿茶提取物 过敏反应 PCA IgE抗体
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)12-1791-02
Experimental study on the anti-allergic reaction of catechu extract
Ping Guoling，Zheng Qun，Zhao Wenming
, 百拇医药
Department of Microbiology，Capital University of Medical Sciences，Beijing
100054.
【Abstract】 Objective To investigate the inhibitory effect of catechu extract on the typeⅠhypersensitivity reaction.Methods We studied by passive cutaneous anaphyaxis(PCA)of Wistar rats.Results It showed the inˉhibitory rates of 25mg/ml and50mg/ml of catechu extract on PCA are41.45%and45.52%respectively.There
was decreased IgE level in serum of rat with PCA primed by25mg/ml of catechu extract.In the meantime，The inhibition of catechu extract on PCA at different periods had been investigated before the rats are challenged with antigens.The results indicated there was maximal inhibitory rate(46.2%)two hours before challenging with antigens.Conclusion The research implied that catechu extract had the inhibitory effect on PCA.
, 百拇医药
Key words catechu extract allergic reaction passive cutaneous anaphylaxis IgE antibody
过敏反应即Ⅰ型超敏反应是由特异性IgE抗体介导产生的一种以机体生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。IgE抗体在过敏反应性疾病中起关键作用，近年来对如何抑制IgE抗体的问题一直颇受关注 [1] 。本研究通过观察儿茶提取物对大鼠同种被动皮肤过敏反应(passive cutaneous anaˉphylaxis，PCA)的抑制率和体内IgE抗体水平的变化，研究其抗过敏反应的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 Wistar雄性健康大鼠，本校动物中心提供。
, 百拇医药
1.1.2 主要试剂 儿茶提取物为本室用自建方法从中药儿茶中提取的药物有效成分。卵白蛋白(OVA)为美国Sigˉma公司产品。百日咳死菌苗购自北京生物制品研究所。抗大鼠IgE(mAb)抗体、生物素标记的抗大鼠IgE抗体、亲和素-HRP均为美国Pharmingen公司产品。
1.2 方法
1.2.1 抗血清的制备 取Wistar雄性健康大鼠8只，100～150g，于每只大鼠四肢足趾皮下注射OVA100μg及百日咳死菌苗10 10 个(溶于0.5ml N.S)。7天后追加免疫，于每只大鼠两大腿肌肉内注射OVA，每侧50μg/0.25ml N.S。14天后心脏采血，分离血清，置冰箱备用。
1.2.2 大鼠PCA模型 [2，3] 取Wistar雄性健康大鼠，150～200g，在乙醚麻醉下剪去背部毛，将1∶2稀释的上述血清皮内注射于鼠背部，每只注射两点，每点0.1ml。24h后进行抗原攻击，即尾静脉注射卵白蛋白1mg(溶于0.5%伊文思蓝溶液1ml中)。20min后处死动物，翻开背部皮肤，剪下蓝斑皮肤，每点以5ml丙酮生理盐水(3∶7V/V)浸泡48h，离心取上清液，测490nm光密度值，计算PCA抑制百分率。
, http://www.100md.com
PCA抑制百分率=(对照组蓝斑光密度-用药组蓝斑光密度)/对照组蓝斑光密度 ×100%
1.2.3 儿茶提取物抑制大鼠PCA的实验观察 取Wistar雄性健康大鼠24只，随机分为4个组(A、B、C组为药物实验组。儿茶提取物浓度分别为50、25、10mg/ml，D组为PCA阳性对照组)。大鼠PCA模型制作方法同前。于抗原攻击前2h口服给予儿茶提取物，24h后进行抗原攻击，计算PCA抑制百分率。观察儿茶提取物的最佳作用剂量。另取Wistar雄性健康大鼠24只，随机分为4个组(A、B、C组为药物实验组，D组为PCA阳性对照组)，A、B、C组分别在抗原攻击前0.5h、2h、4h口服给予儿茶提取物，剂量为25mg/ml，同法计算PCA抑制率。观察儿茶提取
物不同给予时间对PCA抑制率的影响。
1.2.4 血清IgE抗体的检测 [2，4] 大鼠分组同上。乙醚麻醉大鼠，心脏取少量血，分离血清，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IgE抗体。96孔聚苯乙烯酶标板用5μg/ml的抗IgE(mAb)抗体包被，0.1ml/孔，放4℃冰箱过夜。用含0.5%明胶的PBS封闭2h，0.2ml/孔。加入待检血清0.1ml/孔，之后加入生物素标记的抗IgE抗体，0.1ml/孔，37℃孵育2h。然后加入亲和素-HRP，0.1ml/孔，之后加入0.5%OPD，0.1ml/孔，加入终止液后用酶标仪测OD 490 值。
, 百拇医药
2 结果
2.1 不同剂量儿茶提取物对大鼠PCA的影响 结果显示，儿茶提取物50mg/ml和25mg/ml两个剂量组的PCA抑制率分别是41.45%和45.52%，随着浓度的降低作用效果减弱，说明儿茶提取物在一定剂量范围内对过敏反应有一定的抑制作用(图1)。
2.2 不同剂量儿茶提取物对PCA大鼠血清IgE水平的影响 如图2结果所示，PCA模型大鼠给予儿茶提取物后，血清中IgE抗体水平呈下降趋势，其中25mg/ml剂量组的IgE抗体水平最低，此结果提示适当剂量的儿茶提取物可一定程度的抑制血清中的IgE抗体的产生。
2.3 不同时间给予儿茶提取物对大鼠PCA抑制作用的影响 在PCA诱发前0.5h、2h、4h分别给予25mg/ml的儿茶提取物，结果表明在抗原攻击前2h给予儿茶提取物后，色素渗出率最小，PCA抑制率最大，为46.2%(图3)。
, 百拇医药
图1 儿茶提取物的PCA抑制效果略
图2 儿茶提取物对PCA大鼠血中IgE抗体水平的影响略
图3 不同时间给予儿茶提取物PCA抑制率的变化略
3 讨论
过敏反应主要由特异性IgE抗体介导产生，可发生于局部或全身，反应发生快，消退也快，通常可使机体出现功能紊乱性疾病。临床上常用脱敏治疗控制过敏反应，但需要明确变应原方能进行。由于自然界变应原种类繁多，有时不易明确每一病例的变应原，从而妨碍治疗方案的制定。本研究结果显示儿茶提取物对大鼠PCA反应有一定的抑制作用，也可使IgE抗体水平下降，说明本儿茶提取物对过敏反应有一定的治疗作用，且不必预先明确变应原。其抗过敏反应的机制有待于进一步研究。
参考文献
, 百拇医药
1 Bozelka B E，Mccant M L，Salvaggio J E，et al.IgE isotype suppression in anti-e-treated mice.Immunology，1982，121:2083.
2 Astrid G S，Maarten J F，Huub F J，et al.IgE and mast cell responses on intestinal allergen exposure:A murine model to study the onset of food allergy.J Allergy Clin Immunol，1997，99:94-99.
3 沈关心，周汝麟.现代免疫学实验技术.武汉:湖北科学技术出版社，1998，77-78，338-339.
4 Sato M N，Carvalho A F，Silva A O，et al.Low dose of orally adminisˉtered
antigen down-regulates the T helper type2-response in a murine model of dust mite hypersensitivity.Immunology，1999，98:338-344.
作者单位:100054首都医科大学微生物学教研室
(编辑 秋实), 百拇医药(平国玲)
关键词 儿茶提取物 过敏反应 PCA IgE抗体
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)12-1791-02
Experimental study on the anti-allergic reaction of catechu extract
Ping Guoling，Zheng Qun，Zhao Wenming
, 百拇医药
Department of Microbiology，Capital University of Medical Sciences，Beijing
100054.
【Abstract】 Objective To investigate the inhibitory effect of catechu extract on the typeⅠhypersensitivity reaction.Methods We studied by passive cutaneous anaphyaxis(PCA)of Wistar rats.Results It showed the inˉhibitory rates of 25mg/ml and50mg/ml of catechu extract on PCA are41.45%and45.52%respectively.There
was decreased IgE level in serum of rat with PCA primed by25mg/ml of catechu extract.In the meantime，The inhibition of catechu extract on PCA at different periods had been investigated before the rats are challenged with antigens.The results indicated there was maximal inhibitory rate(46.2%)two hours before challenging with antigens.Conclusion The research implied that catechu extract had the inhibitory effect on PCA.
, 百拇医药
Key words catechu extract allergic reaction passive cutaneous anaphylaxis IgE antibody
过敏反应即Ⅰ型超敏反应是由特异性IgE抗体介导产生的一种以机体生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。IgE抗体在过敏反应性疾病中起关键作用，近年来对如何抑制IgE抗体的问题一直颇受关注 [1] 。本研究通过观察儿茶提取物对大鼠同种被动皮肤过敏反应(passive cutaneous anaˉphylaxis，PCA)的抑制率和体内IgE抗体水平的变化，研究其抗过敏反应的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 Wistar雄性健康大鼠，本校动物中心提供。
, 百拇医药
1.1.2 主要试剂 儿茶提取物为本室用自建方法从中药儿茶中提取的药物有效成分。卵白蛋白(OVA)为美国Sigˉma公司产品。百日咳死菌苗购自北京生物制品研究所。抗大鼠IgE(mAb)抗体、生物素标记的抗大鼠IgE抗体、亲和素-HRP均为美国Pharmingen公司产品。
1.2 方法
1.2.1 抗血清的制备 取Wistar雄性健康大鼠8只，100～150g，于每只大鼠四肢足趾皮下注射OVA100μg及百日咳死菌苗10 10 个(溶于0.5ml N.S)。7天后追加免疫，于每只大鼠两大腿肌肉内注射OVA，每侧50μg/0.25ml N.S。14天后心脏采血，分离血清，置冰箱备用。
1.2.2 大鼠PCA模型 [2，3] 取Wistar雄性健康大鼠，150～200g，在乙醚麻醉下剪去背部毛，将1∶2稀释的上述血清皮内注射于鼠背部，每只注射两点，每点0.1ml。24h后进行抗原攻击，即尾静脉注射卵白蛋白1mg(溶于0.5%伊文思蓝溶液1ml中)。20min后处死动物，翻开背部皮肤，剪下蓝斑皮肤，每点以5ml丙酮生理盐水(3∶7V/V)浸泡48h，离心取上清液，测490nm光密度值，计算PCA抑制百分率。
, http://www.100md.com
PCA抑制百分率=(对照组蓝斑光密度-用药组蓝斑光密度)/对照组蓝斑光密度 ×100%
1.2.3 儿茶提取物抑制大鼠PCA的实验观察 取Wistar雄性健康大鼠24只，随机分为4个组(A、B、C组为药物实验组。儿茶提取物浓度分别为50、25、10mg/ml，D组为PCA阳性对照组)。大鼠PCA模型制作方法同前。于抗原攻击前2h口服给予儿茶提取物，24h后进行抗原攻击，计算PCA抑制百分率。观察儿茶提取物的最佳作用剂量。另取Wistar雄性健康大鼠24只，随机分为4个组(A、B、C组为药物实验组，D组为PCA阳性对照组)，A、B、C组分别在抗原攻击前0.5h、2h、4h口服给予儿茶提取物，剂量为25mg/ml，同法计算PCA抑制率。观察儿茶提取
物不同给予时间对PCA抑制率的影响。
1.2.4 血清IgE抗体的检测 [2，4] 大鼠分组同上。乙醚麻醉大鼠，心脏取少量血，分离血清，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IgE抗体。96孔聚苯乙烯酶标板用5μg/ml的抗IgE(mAb)抗体包被，0.1ml/孔，放4℃冰箱过夜。用含0.5%明胶的PBS封闭2h，0.2ml/孔。加入待检血清0.1ml/孔，之后加入生物素标记的抗IgE抗体，0.1ml/孔，37℃孵育2h。然后加入亲和素-HRP，0.1ml/孔，之后加入0.5%OPD，0.1ml/孔，加入终止液后用酶标仪测OD 490 值。
, 百拇医药
2 结果
2.1 不同剂量儿茶提取物对大鼠PCA的影响 结果显示，儿茶提取物50mg/ml和25mg/ml两个剂量组的PCA抑制率分别是41.45%和45.52%，随着浓度的降低作用效果减弱，说明儿茶提取物在一定剂量范围内对过敏反应有一定的抑制作用(图1)。
2.2 不同剂量儿茶提取物对PCA大鼠血清IgE水平的影响 如图2结果所示，PCA模型大鼠给予儿茶提取物后，血清中IgE抗体水平呈下降趋势，其中25mg/ml剂量组的IgE抗体水平最低，此结果提示适当剂量的儿茶提取物可一定程度的抑制血清中的IgE抗体的产生。
2.3 不同时间给予儿茶提取物对大鼠PCA抑制作用的影响 在PCA诱发前0.5h、2h、4h分别给予25mg/ml的儿茶提取物，结果表明在抗原攻击前2h给予儿茶提取物后，色素渗出率最小，PCA抑制率最大，为46.2%(图3)。
, 百拇医药
图1 儿茶提取物的PCA抑制效果略
图2 儿茶提取物对PCA大鼠血中IgE抗体水平的影响略
图3 不同时间给予儿茶提取物PCA抑制率的变化略
3 讨论
过敏反应主要由特异性IgE抗体介导产生，可发生于局部或全身，反应发生快，消退也快，通常可使机体出现功能紊乱性疾病。临床上常用脱敏治疗控制过敏反应，但需要明确变应原方能进行。由于自然界变应原种类繁多，有时不易明确每一病例的变应原，从而妨碍治疗方案的制定。本研究结果显示儿茶提取物对大鼠PCA反应有一定的抑制作用，也可使IgE抗体水平下降，说明本儿茶提取物对过敏反应有一定的治疗作用，且不必预先明确变应原。其抗过敏反应的机制有待于进一步研究。
参考文献
, 百拇医药
1 Bozelka B E，Mccant M L，Salvaggio J E，et al.IgE isotype suppression in anti-e-treated mice.Immunology，1982，121:2083.
2 Astrid G S，Maarten J F，Huub F J，et al.IgE and mast cell responses on intestinal allergen exposure:A murine model to study the onset of food allergy.J Allergy Clin Immunol，1997，99:94-99.
3 沈关心，周汝麟.现代免疫学实验技术.武汉:湖北科学技术出版社，1998，77-78，338-339.
4 Sato M N，Carvalho A F，Silva A O，et al.Low dose of orally adminisˉtered
antigen down-regulates the T helper type2-response in a murine model of dust mite hypersensitivity.Immunology，1999，98:338-344.
作者单位:100054首都医科大学微生物学教研室
(编辑 秋实), 百拇医药(平国玲)
参见：首页 > 中医药 > 中药专业 > 中草药汇编 > 中药大典 > 其它类 > 儿茶