连翘叶提取物对高脂血症小鼠的影响
【摘要】 目的 探讨连翘叶提取物(FSE)对高脂血症小鼠的影响。方法 饲喂高脂饲料建立小鼠的高脂血症模型，观察血脂、腹腔脂肪蓄积、肝脏胆固醇和脂质过氧化物的变化。结果 FSE可使高脂血症小鼠腹腔脂肪湿重减轻，脂肪细胞变小。并可降低血清中TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平。此外，FSE还可降低肝脏中TC、MDA含量，提高SOD活性。结论 FSE可改善高脂血症小鼠血脂紊乱现象，减少脂肪蓄积，对其肝脏也具有一定的保护作用。
关键词 高脂血症小鼠 连翘叶提取物 脂肪 血脂
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)11-1621-03
Effects of forsythia suspense leaves on hyperlipidemic mice
Yang Jianxiong，Hou Gaixia，Li Farong，et al.
, http://www.100md.com
College of Life Science，Shannxi Normal University，Xi’an，Shannxi 710062.
【Abstract】 Objective To study the effects of FSE(extracts of forsythia suspense leaves)on hyperlipidemic mice.Methods A animal model of hyperlipidemia was made in mice with high level lipid.Blood lipids，fat laying in abdomen，TC and lipid peroxide in liver were measured.Results FSE could reduce the fat’s weight laying in abˉdomen，the size of fat cells，the level of serum TC，TG，LDL-C and raise serum HDL-C level.Moreover，FSE also could reduce TC，MDA level and raise SOD activity in liver.Conclusion FSE could modulate blood lipids，and preˉvent fat laying in abdomen，and protect the liver of hyperlipidemic mice.
, 百拇医药
Key words hyperlipidemic mice extracts of forsythia suspense leaves fat blood lipids
连翘(Forsythia suspense)果实为常用中药材，主治温热、丹毒、斑疹、痈肿等症 [1] 。近年报道连翘叶中一些有效成分的含量高于其果实 [2] ，民间将连翘叶制成茶叶饮用已有数百年历史，并认为连翘叶茶有清热、通便、降血脂等作用，但有关连翘叶药理作用和保健价值的研究工作却少有报道。我们的前期工作发现连翘叶提取物(FSE)具有体外抗氧化作用 [3] ，在研究其体内抗氧化作用时(研究结果待发表)，发现FSE可以减少小鼠腹腔内贮存脂肪的重量。本项研究以高脂饲料制成小鼠的高脂血症模型以探讨FSE对小鼠体脂、血脂和脂质过氧化的影响。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 实验药物与试剂 连翘叶由陕西华林黄花茶有限公司提供。阳性对照药非诺贝特由广州威尔曼药业有限公司生产(批号020801)。测定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的试剂盒由北京中生生物工程高科技公司生产。其它试剂均为国产分析纯。
1.2 动物 ICR小鼠(陕医动证字08-004号)由陕西省中医药研究院实验动物中心提供，雌雄各半，体重(20±2)g。
1.3 实验方法
1.3.1 FSE的制备 连翘叶以1∶10(w∶w)比例加蒸馏水，文火煎煮3min，双层纱布过滤，滤渣再重复煎煮2次，合并3次滤液，浓缩干燥至浸膏，临用前配成合适的浓度。
1.3.2 动物分组及处理 ICR小鼠按体重随机分为正常对照组、模型对照组、FSE高剂量组、FSE中剂量组、FSE低剂量组和阳性药对照组。正常对照组喂普通饲料(由陕西省中医药研究院实验动物中心提供)，其余5组饲喂高脂饲料(由陕西省中医药研究院实验动物中心提供，配方为:基础饲料79%、胆固醇1%、蛋黄粉10%、猪油10%)。3周后各组动物均禁食12h后称重，由表1数据可见，与正常对照组的体重相比，数据差异显著。从普通饲料组和高脂饲料组各随机取雌雄动物各4只，眼眶采血测血清TC、TG，分离腹腔脂肪称重，正常对照组的血清TC、TG和腹腔脂肪重均低于其他各组，数据差异显著，说明小鼠的高脂血症模型已经形成 [4] 。随后按表1剂量对各组小鼠等体积灌胃给药，其中非诺贝特的剂量是由临床剂量按人体和实验动物体表面积比等效剂量计算确定的 [5] ，正常对照组、模型对照组灌胃等体积溶媒。各种药物均用0.3%羧甲基纤维素钠制成悬浮液。
, 百拇医药
给药3周后，各组动物眼眶采血，离心分离血清，随即引颈处死，分离腹腔脂肪和肝脏备用。
1.3.3 测定方法 体重和腹腔内脂肪用电子天平称量，计算脂肪系数采用文献 [6] 的方法。脂肪细胞的计数和直径测量方法为:取腹腔同一部位的脂肪一小块，用2.5%甲醛乙醇液固定，石蜡切片，HE染色，在400倍显微镜下计数全视野中脂肪细胞数，并用经标准物镜测微尺纠正的目镜测微器测脂肪细胞的最大径与最小径 [7] 。肝脏TC测定采用文献 [8] 的方法，SOD、MDA分别用邻苯三酚自氧化法 [9] 和TBA法 [10] 。血清TC、TG、HDL-C、LDL-C均用美国ACE全自动生化分析仪采用酶法测定。
1.4 统计学方法 各组实验数据以均值±标准差(ˉx±s)表示，组间比较采用t检验做显著性检验。
, http://www.100md.com 2 结果
2.1 FSE对高脂血症小鼠腹腔脂肪湿重和脂肪细胞大小的影响 见表2。
表1 动物分组及剂量略
表2 FSE对高脂血症小鼠脂肪湿重和脂肪细胞大小的影响(略)
如表2所示，模型对照组的脂肪湿重、脂肪系数和脂肪细胞直径均大于正常对照组，而脂肪数目小于正常对照组，数据差异有显著性意义，说明其腹腔内脂肪蓄积明显增多。FSE3个剂量的脂肪系数和脂肪细胞直径均小于模型对照 组，脂肪细胞数目多于模型对照组，数据差异有显著意义。提示FSE有减少脂肪蓄积的作用，中剂量组的作用略好于高、低剂量组。
2.2 FSE对高脂血症小鼠血脂的影响 见表3。
表3 FSE对高脂血症小鼠血脂的影响 (略)
, http://www.100md.com
由表3可以看出，模型对照组的TG、TC、LDL-C高于正常对照组，HDL-C低于正常对照组，数据差异极显著，说明已形成高血脂症模型。FSE中剂量组的TG、TC、LDL-C低于模型对照组，HDL-C高于模型对照组，说明其对血脂调节有良好的作用。FSE低剂量组对TG的降低作用有 统计学意义。FSE低剂量组和高剂量组对血脂的个别指标有一定的调节作用，但数据差别无统计学意义。
2.3 FSE对高脂血症小鼠肝脏SOD、MDA、TC的影响 见表4。
表4 FSE对高脂血症小鼠肝脏SOD、MDA、TC的影响(略)
由表4可以看出，模型对照组肝组织的SOD低于正常对照组，MDA高于正常对照组，数据差异有极显著意义，说明其脂质过氧化程度加剧。FSE三个剂量组的SOD均高于模型对照组，数据差异有极显著意义，FSE高、中、低剂量组的MDA低于模型对照组，说明FSE对脂质水平过高引起的脂质过氧化加剧有抑制作用。FSE三个剂量组的TC均低于模型对照组，数据差异有显著意义，提示FSE可以降低肝组织的TC水平。
, 百拇医药
3 讨论
已有充分的实验证据说明，体内脂肪的蓄积和血脂水平的过高可以引发动脉粥样硬化，导致心脑血管疾病。HDL-C可以促进TC的转化，减少心脑血管病的发病率，而LDL-C含量则与心脑血管病呈正相关 [11] 。故而，探索良好的调节血脂水平的途径，对于提高健康水平有重要意义。本文的结果说明，FSE对减少体脂蓄积，降低血清TC和TG均有良好的作用，这一方面的药用功能开发利用值得重视，其调血脂功能的机制和相关有效成分的确认需要做进一步的研究工作。
本项研究提示FSE可以抑制肝组织因脂质含量增高而引起的脂质过氧化作用，这与我们前期关于在体外和体内抗氧化作用所得的研究结果一致 [3] 。有研究认为，在动脉粥样硬化形成过程中，血浆中LDL-C受氧自由基和脂质过氧化作用而转化为氧化修饰的LDL-C，后者是引起细胞内脂质聚集和泡沫细胞形成的主要原因 [12] ，本研究显示FSE同时具有降低血脂与抗氧化作用。提示FSE对于预防由于LDL-C氧化而导致的动脉粥样硬化应该有较好的作 用，值得进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1 江苏新医学院.中药大辞典.上海:上海人民出版社，1977，2270.
2 崔燕岩，冯少勇，赵光，等.连翘有效成分的HPLC法测定.药学学报，1992，27(8):603-608.
3 杨建雄，朱淑云，李发荣.连翘叶茶的体外抗氧化活性.食品科学，2002，23(12):120-123.
4 金宗濂，文镜，唐粉芳，等.功能食品评价原理与方法.北京:北京大学出版社，1995，86-96.
5 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社，1996，1103-1104.
6 孙长颢，刘志芳，李虎山.几丁聚糖对肥胖大鼠体重的影响及其与体内瘦素、血脂水平的关系.中国公共卫生，201，17(10):887-889.
, 百拇医药
7 陈愉，曲晓义，张国平，等.金多靶对单纯性肥胖大鼠的减肥效果及机制探讨.中国中西医结合杂志，2000，20(9):685-688.
8 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.第三版.北京:人民卫生出版社，2002，1191-1192.
9 黄桂芬.复方五子衍宗丸的抗自由基和免疫增强作用.中成药，1990，12(6):27.
10 钱伯初.蜂花粉对小鼠体内脂质过氧化物的影响.营养学报，1989，11(4):355.
11 Jequire E.Energy metabolism in obese patients before and after weight loss，and in patients who have relapsed.Int J Obes，1990，14(suppl.1):59.
12 Sternberg D.Modified Forms of low-density-lipoprotein and Atherosclerosis.J Intern Med，1993，233:227-232.
作者单位:710062陕西师范大学生命科学学院
(编辑 小川), 百拇医药
关键词 高脂血症小鼠 连翘叶提取物 脂肪 血脂
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)11-1621-03
Effects of forsythia suspense leaves on hyperlipidemic mice
Yang Jianxiong，Hou Gaixia，Li Farong，et al.
, http://www.100md.com
College of Life Science，Shannxi Normal University，Xi’an，Shannxi 710062.
【Abstract】 Objective To study the effects of FSE(extracts of forsythia suspense leaves)on hyperlipidemic mice.Methods A animal model of hyperlipidemia was made in mice with high level lipid.Blood lipids，fat laying in abdomen，TC and lipid peroxide in liver were measured.Results FSE could reduce the fat’s weight laying in abˉdomen，the size of fat cells，the level of serum TC，TG，LDL-C and raise serum HDL-C level.Moreover，FSE also could reduce TC，MDA level and raise SOD activity in liver.Conclusion FSE could modulate blood lipids，and preˉvent fat laying in abdomen，and protect the liver of hyperlipidemic mice.
, 百拇医药
Key words hyperlipidemic mice extracts of forsythia suspense leaves fat blood lipids
连翘(Forsythia suspense)果实为常用中药材，主治温热、丹毒、斑疹、痈肿等症 [1] 。近年报道连翘叶中一些有效成分的含量高于其果实 [2] ，民间将连翘叶制成茶叶饮用已有数百年历史，并认为连翘叶茶有清热、通便、降血脂等作用，但有关连翘叶药理作用和保健价值的研究工作却少有报道。我们的前期工作发现连翘叶提取物(FSE)具有体外抗氧化作用 [3] ，在研究其体内抗氧化作用时(研究结果待发表)，发现FSE可以减少小鼠腹腔内贮存脂肪的重量。本项研究以高脂饲料制成小鼠的高脂血症模型以探讨FSE对小鼠体脂、血脂和脂质过氧化的影响。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 实验药物与试剂 连翘叶由陕西华林黄花茶有限公司提供。阳性对照药非诺贝特由广州威尔曼药业有限公司生产(批号020801)。测定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的试剂盒由北京中生生物工程高科技公司生产。其它试剂均为国产分析纯。
1.2 动物 ICR小鼠(陕医动证字08-004号)由陕西省中医药研究院实验动物中心提供，雌雄各半，体重(20±2)g。
1.3 实验方法
1.3.1 FSE的制备 连翘叶以1∶10(w∶w)比例加蒸馏水，文火煎煮3min，双层纱布过滤，滤渣再重复煎煮2次，合并3次滤液，浓缩干燥至浸膏，临用前配成合适的浓度。
1.3.2 动物分组及处理 ICR小鼠按体重随机分为正常对照组、模型对照组、FSE高剂量组、FSE中剂量组、FSE低剂量组和阳性药对照组。正常对照组喂普通饲料(由陕西省中医药研究院实验动物中心提供)，其余5组饲喂高脂饲料(由陕西省中医药研究院实验动物中心提供，配方为:基础饲料79%、胆固醇1%、蛋黄粉10%、猪油10%)。3周后各组动物均禁食12h后称重，由表1数据可见，与正常对照组的体重相比，数据差异显著。从普通饲料组和高脂饲料组各随机取雌雄动物各4只，眼眶采血测血清TC、TG，分离腹腔脂肪称重，正常对照组的血清TC、TG和腹腔脂肪重均低于其他各组，数据差异显著，说明小鼠的高脂血症模型已经形成 [4] 。随后按表1剂量对各组小鼠等体积灌胃给药，其中非诺贝特的剂量是由临床剂量按人体和实验动物体表面积比等效剂量计算确定的 [5] ，正常对照组、模型对照组灌胃等体积溶媒。各种药物均用0.3%羧甲基纤维素钠制成悬浮液。
, 百拇医药
给药3周后，各组动物眼眶采血，离心分离血清，随即引颈处死，分离腹腔脂肪和肝脏备用。
1.3.3 测定方法 体重和腹腔内脂肪用电子天平称量，计算脂肪系数采用文献 [6] 的方法。脂肪细胞的计数和直径测量方法为:取腹腔同一部位的脂肪一小块，用2.5%甲醛乙醇液固定，石蜡切片，HE染色，在400倍显微镜下计数全视野中脂肪细胞数，并用经标准物镜测微尺纠正的目镜测微器测脂肪细胞的最大径与最小径 [7] 。肝脏TC测定采用文献 [8] 的方法，SOD、MDA分别用邻苯三酚自氧化法 [9] 和TBA法 [10] 。血清TC、TG、HDL-C、LDL-C均用美国ACE全自动生化分析仪采用酶法测定。
1.4 统计学方法 各组实验数据以均值±标准差(ˉx±s)表示，组间比较采用t检验做显著性检验。
, http://www.100md.com 2 结果
2.1 FSE对高脂血症小鼠腹腔脂肪湿重和脂肪细胞大小的影响 见表2。
表1 动物分组及剂量略
表2 FSE对高脂血症小鼠脂肪湿重和脂肪细胞大小的影响(略)
如表2所示，模型对照组的脂肪湿重、脂肪系数和脂肪细胞直径均大于正常对照组，而脂肪数目小于正常对照组，数据差异有显著性意义，说明其腹腔内脂肪蓄积明显增多。FSE3个剂量的脂肪系数和脂肪细胞直径均小于模型对照 组，脂肪细胞数目多于模型对照组，数据差异有显著意义。提示FSE有减少脂肪蓄积的作用，中剂量组的作用略好于高、低剂量组。
2.2 FSE对高脂血症小鼠血脂的影响 见表3。
表3 FSE对高脂血症小鼠血脂的影响 (略)
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由表3可以看出，模型对照组的TG、TC、LDL-C高于正常对照组，HDL-C低于正常对照组，数据差异极显著，说明已形成高血脂症模型。FSE中剂量组的TG、TC、LDL-C低于模型对照组，HDL-C高于模型对照组，说明其对血脂调节有良好的作用。FSE低剂量组对TG的降低作用有 统计学意义。FSE低剂量组和高剂量组对血脂的个别指标有一定的调节作用，但数据差别无统计学意义。
2.3 FSE对高脂血症小鼠肝脏SOD、MDA、TC的影响 见表4。
表4 FSE对高脂血症小鼠肝脏SOD、MDA、TC的影响(略)
由表4可以看出，模型对照组肝组织的SOD低于正常对照组，MDA高于正常对照组，数据差异有极显著意义，说明其脂质过氧化程度加剧。FSE三个剂量组的SOD均高于模型对照组，数据差异有极显著意义，FSE高、中、低剂量组的MDA低于模型对照组，说明FSE对脂质水平过高引起的脂质过氧化加剧有抑制作用。FSE三个剂量组的TC均低于模型对照组，数据差异有显著意义，提示FSE可以降低肝组织的TC水平。
, 百拇医药
3 讨论
已有充分的实验证据说明，体内脂肪的蓄积和血脂水平的过高可以引发动脉粥样硬化，导致心脑血管疾病。HDL-C可以促进TC的转化，减少心脑血管病的发病率，而LDL-C含量则与心脑血管病呈正相关 [11] 。故而，探索良好的调节血脂水平的途径，对于提高健康水平有重要意义。本文的结果说明，FSE对减少体脂蓄积，降低血清TC和TG均有良好的作用，这一方面的药用功能开发利用值得重视，其调血脂功能的机制和相关有效成分的确认需要做进一步的研究工作。
本项研究提示FSE可以抑制肝组织因脂质含量增高而引起的脂质过氧化作用，这与我们前期关于在体外和体内抗氧化作用所得的研究结果一致 [3] 。有研究认为，在动脉粥样硬化形成过程中，血浆中LDL-C受氧自由基和脂质过氧化作用而转化为氧化修饰的LDL-C，后者是引起细胞内脂质聚集和泡沫细胞形成的主要原因 [12] ，本研究显示FSE同时具有降低血脂与抗氧化作用。提示FSE对于预防由于LDL-C氧化而导致的动脉粥样硬化应该有较好的作 用，值得进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1 江苏新医学院.中药大辞典.上海:上海人民出版社，1977，2270.
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5 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社，1996，1103-1104.
6 孙长颢，刘志芳，李虎山.几丁聚糖对肥胖大鼠体重的影响及其与体内瘦素、血脂水平的关系.中国公共卫生，201，17(10):887-889.
, 百拇医药
7 陈愉，曲晓义，张国平，等.金多靶对单纯性肥胖大鼠的减肥效果及机制探讨.中国中西医结合杂志，2000，20(9):685-688.
8 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.第三版.北京:人民卫生出版社，2002，1191-1192.
9 黄桂芬.复方五子衍宗丸的抗自由基和免疫增强作用.中成药，1990，12(6):27.
10 钱伯初.蜂花粉对小鼠体内脂质过氧化物的影响.营养学报，1989，11(4):355.
11 Jequire E.Energy metabolism in obese patients before and after weight loss，and in patients who have relapsed.Int J Obes，1990，14(suppl.1):59.
12 Sternberg D.Modified Forms of low-density-lipoprotein and Atherosclerosis.J Intern Med，1993，233:227-232.
作者单位:710062陕西师范大学生命科学学院
(编辑 小川), 百拇医药