慢肝病人外周血CD45RA、CD45RO阳性粒细胞和单核细胞亚群变化及临床意义
【文献标识码】 B 【文章编号】 1609-6614(2003)16-1526-03
CD45作为跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosˉphatase，PTP)是一种白细胞共同抗原，在各种白细胞中都常有表达，对白细胞发育成熟等都具重要意义。有报道急性感染性疾病时外周血中性粒细胞的CD45RA + 表达上调 [1] ，慢性病毒性感染等各种慢性炎症病变和恶性肿瘤时，机体免疫系统应处于持续激活而功能异常低下的免疫耗竭状态，故其外周血细胞尤淋巴细胞CD45RA + 下调而CD45RO + 上调 [2～4] ，而肝脏疾病外周血有关粒细胞(G)和单核细胞(M)CD45RA + 和CD45RO + 细胞亚群变化的情况尚未见系统报道。我们采用流式细胞分析仪，检测130例肝脏病人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中CD45RA + 和CD45RO + 细胞和单核细胞亚群变化，现报告如下并就其临床意义予以讨论。
, 百拇医药
1 资料和方法
1.1 一般资料 本院肝科门诊和住院130例，男104例，女26例，年龄23～78岁。其中急性肝炎31例，慢性乙型肝炎活动期37例，慢性乙型肝炎静止/缓解期34例，肝炎后肝硬化活动期17例，恶性肿瘤11例(原发性肝癌5例、胃肠 和乳房肿瘤肝转移6例)。对照组16例，男12例，女4例，年龄21～45岁;系来院门诊体检并排除心、肝、肾等重大疾患的正常健康人。
1.2 方法
(1)常规肝科检测项目:包括血常规、肝功能、免疫球蛋白、补体、血脂、透明质酸(HA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等;(2)血液外周血单个核细胞胞膜CDs的流式细胞仪检测:包括CD4(FITC)、CD8(FITC)、CD28(PE)、CD25(FITC)、CD45RA(FITC)、CD45RO(FITC)单染法测定，采用美国COULTER公司的流式细胞仪(EPICS-XL型)和专供荧光标记小鼠抗人CDs流式仪检测试剂(其中检测CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD45RA、CD45RO小鼠单抗克隆号分别是UCHT1、13B8.2、B9.11、B1.49.9、CD28.8、ALB11、UCH1)，由专人进行外周血单个核细胞胞膜CDs检测。
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1.3 统计学处理 数据采用微机全部输入SPSS数据库，计量资料齐性检验后进行方差分析和两两比较和相关性分析。
2 结果
2.1 外周血PBMC CD45RA + 、CD45RO + 粒细胞和单核细胞亚群变化 见表1。表1 外周血PBMC CD45RA + 、CD45RO + 粒细胞和单核细胞亚群变化 (略)
注:与Ⅰ组比较: ˇ P<0.05;与Ⅱ组比较: △ P<0.05;与Ⅲ组比较: ▲ P<0.05;与Ⅳ组比较: ☆ 0.06
2.2 外周血PBMC CD45RA + 、CD45RO + 粒细胞和单核细胞亚群变化相互间的相关分析见表2。表2 外周血PBMC CD45RA + 、CD45RO + 粒细胞和单核细胞亚群变化相互间的相关分析
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注:“相关显著性水平(2-tailed)”一栏中0.000表示P<0.001
2.3 肝病病人外周血单核细胞(M)胞膜CD45RA与其他指标的相关分析 肝病病人外周血单核细胞胞膜CD45RA与CD4 + /CD8 + 、CD4 + M、CD8 + M、总胆汁酸(BA)、总胆红素(SB)、直接胆红素(DB)正相关，而与红细胞(RBC)和血小板(PLT)负相关。
2.4 肝病病人外周血粒细胞(G)胞膜CD45RA与其他指标的相关分析 肝病病人外周血粒细胞胞膜CD45RA与CD4G、CD8 + M、CD8 + G、CD28 + M、CD28 + G、总蛋白(TP)、SB、DB正相关，而与RBC和循环免疫复合物(CIC)负相关。
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2.5 肝病病人外周血单核细胞胞膜CD45RO与其他指标的相关分析 肝病病人外周血单核细胞胞膜CD45RO与CD4 + G、CD8 + M、CD8 + G、CD28 + M、CD28 + G、CD45 + RO、CD25、CD25 + M、CD25 + G，γ球蛋白(γ-gobulin)、BA、SB、DB、免疫球蛋白G(IgG)、脂蛋白A(LIP(a))、透明质酸(HA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)正相关，而与α 2 球蛋白(α 2 -gobulin)、白蛋白(Albumin)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)负相关。
2.6 肝病病人外周血粒细胞胞膜CD45RO与其他指标的相关分析 肝病病人外周血粒细胞胞膜CD45RO与CD4 + M、CD4 + G、CD8 + M、CD8 + G、CD28 + M、CD28 + G，CD45 + RO、CD25、CD25 + M、CD25 + G、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、r-谷氨酰转肽酶(GGT)、TP、BA、SB、DB正相关，而与CD45RA + /CD45RO + 、α 2 球蛋白(α 2 -gobulin)、β球蛋白(β-gobulin)、白蛋白负相关。
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3 讨论
我们采用流式细胞仪检测肝病病人外周血CDs发现，活动性肝病病人如急性肝炎、活动性肝硬化、恶性肿瘤及活动性慢肝时外周血白细胞粒细胞CD45RA + 和CD45RO + 细胞亚群上调。单核细胞的CD45RA + 和CD45RO + 细胞亚群稍有差异，即CD45RA + 细胞亚群以活动性肝硬化尤伴有明显细胞感染的失代偿期时上升最为明显，其次是活动性慢肝、急性肝炎和静止期慢肝，而恶性肿瘤稍有下降之势，单核细胞CD45RO + 细胞亚群的变化在前4组中均上升，次序是活动性肝硬化>急性肝炎>活动性慢肝>静止期慢肝>恶性肿瘤。相关分析发现，肝脏病人外周血粒细胞和单核细CD45RO表达与肝内炎症损伤指标正相关，而与肝功能指标负相关，而且仅单核细胞CD45RO表达与透明质酸和肿瘤坏死因子正 相关。
与有关报道一致的是 [1] ，肝脏病人外周血粒细胞CD45RA + 细胞亚群在活动性病变中上升，与急性炎症活动及所致肝损伤密切相关，说明粒细胞CD45RA + 细胞亚群与急性炎症活动和急性肝损伤关系密切，可解释为急性炎症活动与肝损伤可促进机体动用造血功能及时促进粒细胞产生，又可解释为记忆型(CD45RO + )向效应记忆型(CD45RA + CD31 - )的转化 [5] 。外周血粒细胞CD45RO + 细胞亚群在肝脏病人有不同程度的上升，以急性肝炎最显著，而活动性肝硬化、恶性肿瘤次之，说明肝病病人有不同程度的粒细胞激活。
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除恶性肿瘤病人外，肝脏病人外周血单核细胞CD45RA + 细胞亚群均不同程度上升，其原因除肝内炎症所致的免疫应激而促进机体骨髓造血功能而免疫动员入血外，以活动性肝硬化尤伴有明显细菌感染的失代偿期时外周血单核细胞CD45RA + 细胞亚群上升最为明显，更说明其与细菌感染所致特异性刺激关系密切，而恶性肿瘤病人时外周血单核细胞CD45RA + 细胞亚群不显上升而稍有下降，则反映机体免疫细胞可动员的程度和可激活的能力(免疫激活潜能)较前4组肝病病人明显下降。这一点由恶性肿瘤病人时外周血单核细胞CD45RO + 细胞亚群上升不如前4组肝病病人明显即可得到证明。肝脏病人外周血单核细胞CD45RO + 细胞亚群不同程度上升，而在活动性肝硬化尤伴有明显细菌感染的失代偿期时外周血单核细胞CD45RA + 细胞亚群上升最为明显，急性肝炎次之，且发现仅单核细胞CD45RO与透明质酸和肿瘤坏死因子正相关，更进一步说明细菌内毒素致单核细胞激活而产生炎症介质和参与肝纤维化和门脉高压病理发生发展，而恶性肿瘤时外周血单核细胞CD45RO + 细胞亚群上升最不明显，表明肿瘤病人机体单核细胞免疫激活(成熟和记忆功能)障碍，可能与肿瘤发生发展密切相关，也是肿瘤病人免疫(肿瘤免疫)的一大特点。恶性肿瘤时外周血单核细胞CD45RA + 细胞亚群不显上升，又说明肿瘤病人机体单核细胞免疫激活障碍不是单核细胞成熟障碍所致，而是由于机体单核细胞可动员的能力(骨髓造血应激能力)低下所致。考虑CD45对于NK细胞的免疫活性有重大影响 [6] ，对于保持gamma delta T细胞的诱导有重大作用 [7] ，因此防治肿瘤的途径不仅包括直接促进功能未成熟的CD45RA + 单核细胞向功能已成熟/激活的CD45RO + 单核细胞转化的方法 [8～9] ，更包括通过促进机体骨髓单核细胞前体动员或记忆型CD45RO + 单核细胞向效应记忆型CD45RA + 、CD31 - 单核细胞的转化，从而提高机体单核细胞的免疫激活能力的手段 [10～12] 。
, 百拇医药
参考文献
1 Patterson-WP，姚仁南.急性感染患者体内中性粒细胞的CD45RA表达增高.国外医学·输血及血液学分册，1994，17(4):240.
2 刘祖国，陈家祺，李绍珍，等.单疱病毒性角膜炎患者外周血免疫表型的差异.中山医科大学学报，1997，18(4):275-278.
3 邓安梅，仲人前，李莉，等.SLE病人T淋巴细胞包亚群及体液免疫功能分析.中国实验诊断学，1997，1(5):31-32.
4 韩钊，徐文桢，刘鸣，等.重症肌无力患者周围血中CD4 + T淋巴细胞亚群的研究.中国神经免疫学和神经病学杂志，1999，6(2):82-86.
5 Thiel A，Schmitz J，Miltenyi S，et al.CD45RA-expressing meory/effector Th cells committed to production of interferon-gama lack expression of CD31.Immunol Lett，1997，57(1-3):189-192.
, 百拇医药
6 沈锋，吴孟超，陈汉，等.CD45分子在NK细胞激活中的作用及其分子机制研究.中国肿瘤生物治疗杂志，1996，3(1):6-10.
7 Fujise S，Kishihara K，Lee KY，et al.Normal macrophage functions，but impaired induction of gamma deltaT cells，at the site of bacterial infection in CD45exon6-deficient mice.Eur J Immunol，1997，27(10):2549-2556.
8 曹祥山，邹正辉，虞斐，等.脐血造血细胞移植救治放射损伤小鼠的实验研究.苏州医学院学报，1997，17(5):809-810.
9 董宝伟，张晶，梁萍，等.经皮微波凝固治疗肝癌对患者局部免疫状态的影响.中华医学杂志，2000，80(10):745-748.
, http://www.100md.com
10 Fritsch G，Buchinger P，Printz D，et al.Rapid discrimination of early CD34+myeloid progenitors using CD45-RA analysis Blood，1993，1:81(9):2301-2309.
11 Lu L，Woo J，Rao AS，et al.Propagation of dendritic cell progenitors fromnormal mouse liver using granulocyte/macrophage colony-stimulating factor and their maturational development in the presence of type-1collagen.J Exp Med，1994，1，179(6):1823-1834.
12 夏长青，王逸兰，陆道培.GM-CSF诱导外周血单核细胞的分化及其对混合淋巴细胞反应的影响.上海免疫学杂志，1999，19(4):222-225.
作者单位:1 200021上海中医药大学附属曙光医院
2浙江省平阳县中医院
(编辑浮 萍), 百拇医药(金)
CD45作为跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosˉphatase，PTP)是一种白细胞共同抗原，在各种白细胞中都常有表达，对白细胞发育成熟等都具重要意义。有报道急性感染性疾病时外周血中性粒细胞的CD45RA + 表达上调 [1] ，慢性病毒性感染等各种慢性炎症病变和恶性肿瘤时，机体免疫系统应处于持续激活而功能异常低下的免疫耗竭状态，故其外周血细胞尤淋巴细胞CD45RA + 下调而CD45RO + 上调 [2～4] ，而肝脏疾病外周血有关粒细胞(G)和单核细胞(M)CD45RA + 和CD45RO + 细胞亚群变化的情况尚未见系统报道。我们采用流式细胞分析仪，检测130例肝脏病人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中CD45RA + 和CD45RO + 细胞和单核细胞亚群变化，现报告如下并就其临床意义予以讨论。
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1 资料和方法
1.1 一般资料 本院肝科门诊和住院130例，男104例，女26例，年龄23～78岁。其中急性肝炎31例，慢性乙型肝炎活动期37例，慢性乙型肝炎静止/缓解期34例，肝炎后肝硬化活动期17例，恶性肿瘤11例(原发性肝癌5例、胃肠 和乳房肿瘤肝转移6例)。对照组16例，男12例，女4例，年龄21～45岁;系来院门诊体检并排除心、肝、肾等重大疾患的正常健康人。
1.2 方法
(1)常规肝科检测项目:包括血常规、肝功能、免疫球蛋白、补体、血脂、透明质酸(HA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等;(2)血液外周血单个核细胞胞膜CDs的流式细胞仪检测:包括CD4(FITC)、CD8(FITC)、CD28(PE)、CD25(FITC)、CD45RA(FITC)、CD45RO(FITC)单染法测定，采用美国COULTER公司的流式细胞仪(EPICS-XL型)和专供荧光标记小鼠抗人CDs流式仪检测试剂(其中检测CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD45RA、CD45RO小鼠单抗克隆号分别是UCHT1、13B8.2、B9.11、B1.49.9、CD28.8、ALB11、UCH1)，由专人进行外周血单个核细胞胞膜CDs检测。
, 百拇医药
1.3 统计学处理 数据采用微机全部输入SPSS数据库，计量资料齐性检验后进行方差分析和两两比较和相关性分析。
2 结果
2.1 外周血PBMC CD45RA + 、CD45RO + 粒细胞和单核细胞亚群变化 见表1。表1 外周血PBMC CD45RA + 、CD45RO + 粒细胞和单核细胞亚群变化 (略)
注:与Ⅰ组比较: ˇ P<0.05;与Ⅱ组比较: △ P<0.05;与Ⅲ组比较: ▲ P<0.05;与Ⅳ组比较: ☆ 0.06
2.2 外周血PBMC CD45RA + 、CD45RO + 粒细胞和单核细胞亚群变化相互间的相关分析见表2。表2 外周血PBMC CD45RA + 、CD45RO + 粒细胞和单核细胞亚群变化相互间的相关分析
, 百拇医药
注:“相关显著性水平(2-tailed)”一栏中0.000表示P<0.001
2.3 肝病病人外周血单核细胞(M)胞膜CD45RA与其他指标的相关分析 肝病病人外周血单核细胞胞膜CD45RA与CD4 + /CD8 + 、CD4 + M、CD8 + M、总胆汁酸(BA)、总胆红素(SB)、直接胆红素(DB)正相关，而与红细胞(RBC)和血小板(PLT)负相关。
2.4 肝病病人外周血粒细胞(G)胞膜CD45RA与其他指标的相关分析 肝病病人外周血粒细胞胞膜CD45RA与CD4G、CD8 + M、CD8 + G、CD28 + M、CD28 + G、总蛋白(TP)、SB、DB正相关，而与RBC和循环免疫复合物(CIC)负相关。
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2.5 肝病病人外周血单核细胞胞膜CD45RO与其他指标的相关分析 肝病病人外周血单核细胞胞膜CD45RO与CD4 + G、CD8 + M、CD8 + G、CD28 + M、CD28 + G、CD45 + RO、CD25、CD25 + M、CD25 + G，γ球蛋白(γ-gobulin)、BA、SB、DB、免疫球蛋白G(IgG)、脂蛋白A(LIP(a))、透明质酸(HA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)正相关，而与α 2 球蛋白(α 2 -gobulin)、白蛋白(Albumin)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)负相关。
2.6 肝病病人外周血粒细胞胞膜CD45RO与其他指标的相关分析 肝病病人外周血粒细胞胞膜CD45RO与CD4 + M、CD4 + G、CD8 + M、CD8 + G、CD28 + M、CD28 + G，CD45 + RO、CD25、CD25 + M、CD25 + G、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、r-谷氨酰转肽酶(GGT)、TP、BA、SB、DB正相关，而与CD45RA + /CD45RO + 、α 2 球蛋白(α 2 -gobulin)、β球蛋白(β-gobulin)、白蛋白负相关。
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3 讨论
我们采用流式细胞仪检测肝病病人外周血CDs发现，活动性肝病病人如急性肝炎、活动性肝硬化、恶性肿瘤及活动性慢肝时外周血白细胞粒细胞CD45RA + 和CD45RO + 细胞亚群上调。单核细胞的CD45RA + 和CD45RO + 细胞亚群稍有差异，即CD45RA + 细胞亚群以活动性肝硬化尤伴有明显细胞感染的失代偿期时上升最为明显，其次是活动性慢肝、急性肝炎和静止期慢肝，而恶性肿瘤稍有下降之势，单核细胞CD45RO + 细胞亚群的变化在前4组中均上升，次序是活动性肝硬化>急性肝炎>活动性慢肝>静止期慢肝>恶性肿瘤。相关分析发现，肝脏病人外周血粒细胞和单核细CD45RO表达与肝内炎症损伤指标正相关，而与肝功能指标负相关，而且仅单核细胞CD45RO表达与透明质酸和肿瘤坏死因子正 相关。
与有关报道一致的是 [1] ，肝脏病人外周血粒细胞CD45RA + 细胞亚群在活动性病变中上升，与急性炎症活动及所致肝损伤密切相关，说明粒细胞CD45RA + 细胞亚群与急性炎症活动和急性肝损伤关系密切，可解释为急性炎症活动与肝损伤可促进机体动用造血功能及时促进粒细胞产生，又可解释为记忆型(CD45RO + )向效应记忆型(CD45RA + CD31 - )的转化 [5] 。外周血粒细胞CD45RO + 细胞亚群在肝脏病人有不同程度的上升，以急性肝炎最显著，而活动性肝硬化、恶性肿瘤次之，说明肝病病人有不同程度的粒细胞激活。
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除恶性肿瘤病人外，肝脏病人外周血单核细胞CD45RA + 细胞亚群均不同程度上升，其原因除肝内炎症所致的免疫应激而促进机体骨髓造血功能而免疫动员入血外，以活动性肝硬化尤伴有明显细菌感染的失代偿期时外周血单核细胞CD45RA + 细胞亚群上升最为明显，更说明其与细菌感染所致特异性刺激关系密切，而恶性肿瘤病人时外周血单核细胞CD45RA + 细胞亚群不显上升而稍有下降，则反映机体免疫细胞可动员的程度和可激活的能力(免疫激活潜能)较前4组肝病病人明显下降。这一点由恶性肿瘤病人时外周血单核细胞CD45RO + 细胞亚群上升不如前4组肝病病人明显即可得到证明。肝脏病人外周血单核细胞CD45RO + 细胞亚群不同程度上升，而在活动性肝硬化尤伴有明显细菌感染的失代偿期时外周血单核细胞CD45RA + 细胞亚群上升最为明显，急性肝炎次之，且发现仅单核细胞CD45RO与透明质酸和肿瘤坏死因子正相关，更进一步说明细菌内毒素致单核细胞激活而产生炎症介质和参与肝纤维化和门脉高压病理发生发展，而恶性肿瘤时外周血单核细胞CD45RO + 细胞亚群上升最不明显，表明肿瘤病人机体单核细胞免疫激活(成熟和记忆功能)障碍，可能与肿瘤发生发展密切相关，也是肿瘤病人免疫(肿瘤免疫)的一大特点。恶性肿瘤时外周血单核细胞CD45RA + 细胞亚群不显上升，又说明肿瘤病人机体单核细胞免疫激活障碍不是单核细胞成熟障碍所致，而是由于机体单核细胞可动员的能力(骨髓造血应激能力)低下所致。考虑CD45对于NK细胞的免疫活性有重大影响 [6] ，对于保持gamma delta T细胞的诱导有重大作用 [7] ，因此防治肿瘤的途径不仅包括直接促进功能未成熟的CD45RA + 单核细胞向功能已成熟/激活的CD45RO + 单核细胞转化的方法 [8～9] ，更包括通过促进机体骨髓单核细胞前体动员或记忆型CD45RO + 单核细胞向效应记忆型CD45RA + 、CD31 - 单核细胞的转化，从而提高机体单核细胞的免疫激活能力的手段 [10～12] 。
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1 Patterson-WP，姚仁南.急性感染患者体内中性粒细胞的CD45RA表达增高.国外医学·输血及血液学分册，1994，17(4):240.
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7 Fujise S，Kishihara K，Lee KY，et al.Normal macrophage functions，but impaired induction of gamma deltaT cells，at the site of bacterial infection in CD45exon6-deficient mice.Eur J Immunol，1997，27(10):2549-2556.
8 曹祥山，邹正辉，虞斐，等.脐血造血细胞移植救治放射损伤小鼠的实验研究.苏州医学院学报，1997，17(5):809-810.
9 董宝伟，张晶，梁萍，等.经皮微波凝固治疗肝癌对患者局部免疫状态的影响.中华医学杂志，2000，80(10):745-748.
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10 Fritsch G，Buchinger P，Printz D，et al.Rapid discrimination of early CD34+myeloid progenitors using CD45-RA analysis Blood，1993，1:81(9):2301-2309.
11 Lu L，Woo J，Rao AS，et al.Propagation of dendritic cell progenitors fromnormal mouse liver using granulocyte/macrophage colony-stimulating factor and their maturational development in the presence of type-1collagen.J Exp Med，1994，1，179(6):1823-1834.
12 夏长青，王逸兰，陆道培.GM-CSF诱导外周血单核细胞的分化及其对混合淋巴细胞反应的影响.上海免疫学杂志，1999，19(4):222-225.
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