疏血通注射液治疗缺血性中风的实验研究
【摘要】 目的 制备大脑中动脉闭塞局灶脑缺血模型(MCAO)，观察疏血通的治疗作用，为临床应用提供试验依据。方法 采用自体血栓注入、闭塞大脑中动脉的方法制备MCAO模型，对照观察正常组、MCAO模型组、疏血通治疗组脑梗塞范围、脑含水量、神经功能评分、阻塞血管闭塞和再通情况、病理组织学改变等指标的变化。结果 疏血通治疗组以上各项指标均较MCAO对照组有显著性的改善。结论 疏血通对急性脑梗塞有明显的治疗作用。
关键词 疏血通注射液 脑缺血 药效学 鼠
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)13-1934-02
An experimental study on treatment of acute cerebral infarction
with shu xuetong injection
, http://www.100md.com
Zhang Xuan，Zhao Leishi，Hu Changlin
Departrment of Neurology，the Second Clinical College of Chongqing Medical University，Chongqing400010.
【Abstract】 Objective To study the treatment effect of shu xuetong injection on acute cerebral infarction.Methods With established the model of middle cerebral artery occlusion embolized by autologous blood clots，the changes of infarction volume，neurological function recovery，brain water content，local capillaries，as well as histopathological changes were observed in different groups.Results With the treatment of shu xuetong injection，all of the above changes wereimproved remarkably.Conclusion Shu xuetong injection has a fine effect on treatment of acute cerebral infarction.
, 百拇医药
Key words shu xuetiong injection cerebral ischemia pharmacodynamics rats
疏血通注射液是动物类中药复方制剂，由水蛭、地龙合理组方，经低温提取、膜分离等先进工艺精制而成，主要作用为抗凝、促纤溶、抗血栓、细胞保护等作用，主要用于心、脑缺血性疾病的防治。本文通过动物实验，对疏血通注射液治疗急性脑梗塞的作用进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 动物 SD大鼠，体重230～300g，雌雄不拘，由重庆医科大学实验动物中心提供。
1.2 药物和试剂 疏血通注射液系由牡丹江友博制药厂生产的原液，又经过重庆中药研究院制备浓缩10倍的浓缩液;红四氮唑(TTC)，上海生物工程公司提供。
1.3 仪器 TD2000图像系统(北京天地公司)，24号静脉留置针(型号REF383213，规格0.7mm×19mm)，4号硬脊膜外麻醉导管[型号F3×70，(0.7～1.0)×700]，分析天平(日本岛津)。
, 百拇医药
2 方法
2.1 分组 实验动物随机分假手术对照组、局灶脑缺血对照组、局灶脑缺血疏血通治疗组，每组30只。
2.2 局灶脑缺血模型制作 采用自体血栓大脑中动脉闭塞模型(MCAO):用3.5%水合氯醛1ml/kg腹腔麻醉大鼠后，取左侧颈部直切口，分离左颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)、颈外动脉(ECA);电凝ECA分支:甲状腺上动脉、枕动脉，结扎颈内动脉重要分支翼腭动脉。离断ECA(假手术组到此步为止)，从ECA插入24号静脉留置针，将针芯拔 出，取血0.25～0.5ml，4000r/min离心5min，按10∶1吸取血浆及少量红细胞10μl，加入凝血酶3～4U，制成直径为0.35mm的血栓，切成2mm大小，用麻醉导管吸取4～6个血栓，接到静脉留置针末端，快速将栓子推入ICA内。动物苏醒后按Bederson评分标准立即进行神经功能缺失评分，有体征者入选。
2.3 给药方法 治疗组按0.8ml/kg疏血通注射液浓缩液，局灶脑缺血对照组予以等量生理盐水，均于造模后6h内经尾静脉注入。以后每天1次，连续5天。
, 百拇医药
2.4 神经功能缺损评分 进行两次神经功能缺损评分:于造模成功后第一天进行神经功能缺损评分，治疗、观察5天后再进行一次。按Bederson评分标准 [1] 评分:0级(0分)—无神经功能障碍;1级(1分)—提大鼠尾，见瘫痪侧前肢回收屈曲不能正常伸向地面;2级(2分)—除1级体征外，向瘫痪侧推时感阻力较对侧明显降低;3级(3分)———除以上体征外，大鼠爬行时向瘫痪侧旋转。
2.5 脑梗塞体积测定 于造模5天神经功能缺损评分后取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩下的部分立即冠状切成5片，置于2%的TTC溶液中染色，梗塞区为苍白色，正常为玫瑰紫红色 [2] 。用TD2000图像分析系统测出各层的梗塞面积，总面积之和乘以层厚即为体积(mm 3 ) [3] 。
2.6 脑含水量的测定 用干湿重法测脑组织含水率，治疗组和对照组在最后一次神经功能评分后断头取脑立即切成左右两半，迅速用电子天平称取病灶侧半球的重量，然后置于100℃烤箱内烤24h，用同一天平再次称重，以[(湿重-干重)/湿重×100%]即为相对含水量 [4] 。
, 百拇医药
2.7 墨汁灌注观察阻塞血管的闭塞和再通情况 采用墨汁灌注观察法，每组取5只大鼠麻醉后固定，暴露心脏，左心室插入7号输液针头，先用150ml生理盐水冲洗至血液变清再用30ml右旋糖酐和70ml的印度墨汁的混合液灌注，断头取脑用4%的多聚甲醛固定后，切为25μm的石蜡切片，光镜下观察血管再通情况。
2.8 组织病理学观察 每组取5只大鼠，常规HE染色，封 片，光镜下观察病灶区组织病理变化。
2.9 统计学处理 所得结果均以均数±标准差(ˉx±s)表示，应用SPSS10.0for windows统计学软件进行统计处理。
3 结果
3.1 疏血通对大鼠神经行为、脑梗塞体积和脑含水量的影响结果 见表1。
表1 疏血通对大鼠神经行为、脑梗塞体积和脑含水量的影响 (ˉx±s，n=10)
, 百拇医药
注:与局灶脑缺血组比较 Δ P>0.05;与局灶脑缺血组比较 ΔΔ P<0.05，与1d比较 ˇ P<0.01
由表1可见，第一天局灶脑缺血组和疏血通治疗组(用药前)神经功能缺失评分差异并无显著性。第五天经过疏血通的治疗，疏血通治疗组神经功能缺损评分明显降低，和局灶脑缺血组比较差异显著;且疏血通治疗组梗塞范围以及脑组织含水量亦明显低于局灶脑缺血组，有较显著的差异。表明疏血通对脑组织缺血有明显治疗作用。
3.2 墨汁灌注观察结果 可见假手术对照组大鼠大体标本无明显水肿，墨汁染色均匀，光镜下血管显影良好，血管大小基本一致;局灶脑缺血组大体标本可见缺血侧明显水肿、苍白，表面的血管局部没有显影，光镜下病灶较大，病灶附近血管显影较稀少;而疏血通治疗组，外观水肿较轻，墨汁染色基本均匀，个别有局部墨汁深染积聚，光镜下见病灶附近血管显影较局灶脑缺血组多、稠密，有较多的微血管出现，梗塞病灶较局灶脑缺血组明显减少。结果表明疏血通注射液可促进血栓溶解使血管再通，减少脑梗塞范围。
, 百拇医药
3.3 组织病理学变化 假手术大鼠皮层各层细胞排列整齐，神经元结构完整，基质无水肿，基底神经节区神经元结构正常，神经纤维无损坏，局灶脑缺血组大鼠病理改变为神经元结构模糊，胞体肿胀，胞核淡染，核固缩，尼氏小体减少或消失等变化;疏血通治疗组见大脑皮质锥体细胞和脑实质神经细胞结构清楚，核固缩、核溶解程度较局灶脑缺血对照组明显减轻，病变范围明显缩小。
4 讨论
急性缺血性脑血管病是一种常见病、多发病，死亡率及致残率均很高，早期积极有效的治疗至关重要。急性缺血性卒中的治疗主要通过两个途径:一是溶解血栓，恢复脑血液循环。二是神经保护治疗，阻止缺血及缺血后再灌注引起的脑组织一系列病理及生化反应，防止神经元死亡。
疏血通注射液主要成分是水蛭、地龙，其主要有效成分为水蛭中的水蛭素类和地龙中的蚓激酶样作用物质，其抗 脑缺血的主要作用机制为:(1)抗凝:直接和机体凝血酶结合，抑制凝血酶活性，迅速发挥抗凝作用;(2)促进血栓溶解:直接溶解纤维蛋白及凝血因子Ⅰ，刺激血管内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活物(tPA)激活纤维蛋白溶酶，促进纤维蛋白降解;(3)抗血小板聚集;(4)细胞保护作用:提供细胞代谢必需的多种氨基酸及微量元素，清除自由基，多靶点作用，减轻缺血再灌注脑损伤 [5] 。由此可见疏血通注射液一方面可通过其促纤溶、抗凝作用，溶解血栓使血管再通而恢复血液灌注，并防止血栓再次形成，阻止疾病的进展和复发。另一方面可通过其神经保护作用减轻脑组织损伤。
, 百拇医药
本试验通过大鼠自体血栓大脑中动脉闭塞模型，发现疏血通注射液能显著减少MCAO大鼠脑梗塞范围，使脑部含水量下降，行为障碍得到大大改善，脑循环墨汁灌注及组织病理学观察显示疏血通对改善脑灌注、减轻组织损伤、保护缺血脑组织有明显作用。总的实验结果表明疏血通注射液对急性脑血栓形成有明显治疗作用，为临床治疗缺血性脑血管病提供了实验依据。其确切治疗机制尚待进一步阐明。
参考文献
1 Bederson JB，Pitts LH，Nishimura Me，et al.Rat middle cerebral artery occlusion:evaluation of the model and development of neurologic examiˉnation.Stroke，1986，17:472-476.
2 Chehrazi BB，Seibert JA，Kissel P，et al.Evaluation of recombinant tisˉsue plasminogen activator in embolic stroke.Neurosurgery，1989，24:355-360.
, http://www.100md.com
3 常丽英，张苏明，张新江，等.尿激酶溶栓治疗大鼠急性脑梗塞的实验研究.中国临床神经科学，2002，10(3):225.
4 陈立华，曹美鸿，秦天森，等.Nimodipine对冷冻性脑水肿的脑保护作用.临床神经科学，1991，1:6-9.
5 刘云海，方淑贤.疏血通注射液.医药导报，2002，21(6):378.
作者单位:1630010重庆医科大学附属第二医院神经内科
2黑龙江省牡丹江友搏药业有限责任公司
(编辑李 阳), 百拇医药(张璇)
关键词 疏血通注射液 脑缺血 药效学 鼠
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)13-1934-02
An experimental study on treatment of acute cerebral infarction
with shu xuetong injection
, http://www.100md.com
Zhang Xuan，Zhao Leishi，Hu Changlin
Departrment of Neurology，the Second Clinical College of Chongqing Medical University，Chongqing400010.
【Abstract】 Objective To study the treatment effect of shu xuetong injection on acute cerebral infarction.Methods With established the model of middle cerebral artery occlusion embolized by autologous blood clots，the changes of infarction volume，neurological function recovery，brain water content，local capillaries，as well as histopathological changes were observed in different groups.Results With the treatment of shu xuetong injection，all of the above changes wereimproved remarkably.Conclusion Shu xuetong injection has a fine effect on treatment of acute cerebral infarction.
, 百拇医药
Key words shu xuetiong injection cerebral ischemia pharmacodynamics rats
疏血通注射液是动物类中药复方制剂，由水蛭、地龙合理组方，经低温提取、膜分离等先进工艺精制而成，主要作用为抗凝、促纤溶、抗血栓、细胞保护等作用，主要用于心、脑缺血性疾病的防治。本文通过动物实验，对疏血通注射液治疗急性脑梗塞的作用进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 动物 SD大鼠，体重230～300g，雌雄不拘，由重庆医科大学实验动物中心提供。
1.2 药物和试剂 疏血通注射液系由牡丹江友博制药厂生产的原液，又经过重庆中药研究院制备浓缩10倍的浓缩液;红四氮唑(TTC)，上海生物工程公司提供。
1.3 仪器 TD2000图像系统(北京天地公司)，24号静脉留置针(型号REF383213，规格0.7mm×19mm)，4号硬脊膜外麻醉导管[型号F3×70，(0.7～1.0)×700]，分析天平(日本岛津)。
, 百拇医药
2 方法
2.1 分组 实验动物随机分假手术对照组、局灶脑缺血对照组、局灶脑缺血疏血通治疗组，每组30只。
2.2 局灶脑缺血模型制作 采用自体血栓大脑中动脉闭塞模型(MCAO):用3.5%水合氯醛1ml/kg腹腔麻醉大鼠后，取左侧颈部直切口，分离左颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)、颈外动脉(ECA);电凝ECA分支:甲状腺上动脉、枕动脉，结扎颈内动脉重要分支翼腭动脉。离断ECA(假手术组到此步为止)，从ECA插入24号静脉留置针，将针芯拔 出，取血0.25～0.5ml，4000r/min离心5min，按10∶1吸取血浆及少量红细胞10μl，加入凝血酶3～4U，制成直径为0.35mm的血栓，切成2mm大小，用麻醉导管吸取4～6个血栓，接到静脉留置针末端，快速将栓子推入ICA内。动物苏醒后按Bederson评分标准立即进行神经功能缺失评分，有体征者入选。
2.3 给药方法 治疗组按0.8ml/kg疏血通注射液浓缩液，局灶脑缺血对照组予以等量生理盐水，均于造模后6h内经尾静脉注入。以后每天1次，连续5天。
, 百拇医药
2.4 神经功能缺损评分 进行两次神经功能缺损评分:于造模成功后第一天进行神经功能缺损评分，治疗、观察5天后再进行一次。按Bederson评分标准 [1] 评分:0级(0分)—无神经功能障碍;1级(1分)—提大鼠尾，见瘫痪侧前肢回收屈曲不能正常伸向地面;2级(2分)—除1级体征外，向瘫痪侧推时感阻力较对侧明显降低;3级(3分)———除以上体征外，大鼠爬行时向瘫痪侧旋转。
2.5 脑梗塞体积测定 于造模5天神经功能缺损评分后取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩下的部分立即冠状切成5片，置于2%的TTC溶液中染色，梗塞区为苍白色，正常为玫瑰紫红色 [2] 。用TD2000图像分析系统测出各层的梗塞面积，总面积之和乘以层厚即为体积(mm 3 ) [3] 。
2.6 脑含水量的测定 用干湿重法测脑组织含水率，治疗组和对照组在最后一次神经功能评分后断头取脑立即切成左右两半，迅速用电子天平称取病灶侧半球的重量，然后置于100℃烤箱内烤24h，用同一天平再次称重，以[(湿重-干重)/湿重×100%]即为相对含水量 [4] 。
, 百拇医药
2.7 墨汁灌注观察阻塞血管的闭塞和再通情况 采用墨汁灌注观察法，每组取5只大鼠麻醉后固定，暴露心脏，左心室插入7号输液针头，先用150ml生理盐水冲洗至血液变清再用30ml右旋糖酐和70ml的印度墨汁的混合液灌注，断头取脑用4%的多聚甲醛固定后，切为25μm的石蜡切片，光镜下观察血管再通情况。
2.8 组织病理学观察 每组取5只大鼠，常规HE染色，封 片，光镜下观察病灶区组织病理变化。
2.9 统计学处理 所得结果均以均数±标准差(ˉx±s)表示，应用SPSS10.0for windows统计学软件进行统计处理。
3 结果
3.1 疏血通对大鼠神经行为、脑梗塞体积和脑含水量的影响结果 见表1。
表1 疏血通对大鼠神经行为、脑梗塞体积和脑含水量的影响 (ˉx±s，n=10)
, 百拇医药
注:与局灶脑缺血组比较 Δ P>0.05;与局灶脑缺血组比较 ΔΔ P<0.05，与1d比较 ˇ P<0.01
由表1可见，第一天局灶脑缺血组和疏血通治疗组(用药前)神经功能缺失评分差异并无显著性。第五天经过疏血通的治疗，疏血通治疗组神经功能缺损评分明显降低，和局灶脑缺血组比较差异显著;且疏血通治疗组梗塞范围以及脑组织含水量亦明显低于局灶脑缺血组，有较显著的差异。表明疏血通对脑组织缺血有明显治疗作用。
3.2 墨汁灌注观察结果 可见假手术对照组大鼠大体标本无明显水肿，墨汁染色均匀，光镜下血管显影良好，血管大小基本一致;局灶脑缺血组大体标本可见缺血侧明显水肿、苍白，表面的血管局部没有显影，光镜下病灶较大，病灶附近血管显影较稀少;而疏血通治疗组，外观水肿较轻，墨汁染色基本均匀，个别有局部墨汁深染积聚，光镜下见病灶附近血管显影较局灶脑缺血组多、稠密，有较多的微血管出现，梗塞病灶较局灶脑缺血组明显减少。结果表明疏血通注射液可促进血栓溶解使血管再通，减少脑梗塞范围。
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3.3 组织病理学变化 假手术大鼠皮层各层细胞排列整齐，神经元结构完整，基质无水肿，基底神经节区神经元结构正常，神经纤维无损坏，局灶脑缺血组大鼠病理改变为神经元结构模糊，胞体肿胀，胞核淡染，核固缩，尼氏小体减少或消失等变化;疏血通治疗组见大脑皮质锥体细胞和脑实质神经细胞结构清楚，核固缩、核溶解程度较局灶脑缺血对照组明显减轻，病变范围明显缩小。
4 讨论
急性缺血性脑血管病是一种常见病、多发病，死亡率及致残率均很高，早期积极有效的治疗至关重要。急性缺血性卒中的治疗主要通过两个途径:一是溶解血栓，恢复脑血液循环。二是神经保护治疗，阻止缺血及缺血后再灌注引起的脑组织一系列病理及生化反应，防止神经元死亡。
疏血通注射液主要成分是水蛭、地龙，其主要有效成分为水蛭中的水蛭素类和地龙中的蚓激酶样作用物质，其抗 脑缺血的主要作用机制为:(1)抗凝:直接和机体凝血酶结合，抑制凝血酶活性，迅速发挥抗凝作用;(2)促进血栓溶解:直接溶解纤维蛋白及凝血因子Ⅰ，刺激血管内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活物(tPA)激活纤维蛋白溶酶，促进纤维蛋白降解;(3)抗血小板聚集;(4)细胞保护作用:提供细胞代谢必需的多种氨基酸及微量元素，清除自由基，多靶点作用，减轻缺血再灌注脑损伤 [5] 。由此可见疏血通注射液一方面可通过其促纤溶、抗凝作用，溶解血栓使血管再通而恢复血液灌注，并防止血栓再次形成，阻止疾病的进展和复发。另一方面可通过其神经保护作用减轻脑组织损伤。
, 百拇医药
本试验通过大鼠自体血栓大脑中动脉闭塞模型，发现疏血通注射液能显著减少MCAO大鼠脑梗塞范围，使脑部含水量下降，行为障碍得到大大改善，脑循环墨汁灌注及组织病理学观察显示疏血通对改善脑灌注、减轻组织损伤、保护缺血脑组织有明显作用。总的实验结果表明疏血通注射液对急性脑血栓形成有明显治疗作用，为临床治疗缺血性脑血管病提供了实验依据。其确切治疗机制尚待进一步阐明。
参考文献
1 Bederson JB，Pitts LH，Nishimura Me，et al.Rat middle cerebral artery occlusion:evaluation of the model and development of neurologic examiˉnation.Stroke，1986，17:472-476.
2 Chehrazi BB，Seibert JA，Kissel P，et al.Evaluation of recombinant tisˉsue plasminogen activator in embolic stroke.Neurosurgery，1989，24:355-360.
, http://www.100md.com
3 常丽英，张苏明，张新江，等.尿激酶溶栓治疗大鼠急性脑梗塞的实验研究.中国临床神经科学，2002，10(3):225.
4 陈立华，曹美鸿，秦天森，等.Nimodipine对冷冻性脑水肿的脑保护作用.临床神经科学，1991，1:6-9.
5 刘云海，方淑贤.疏血通注射液.医药导报，2002，21(6):378.
作者单位:1630010重庆医科大学附属第二医院神经内科
2黑龙江省牡丹江友搏药业有限责任公司
(编辑李 阳), 百拇医药(张璇)