黄藤素和制剂中混有盐酸小檗碱的鉴别及高效液相色谱法测定盐酸巴马汀含量
【摘要】 目的 建立黄藤素和制剂中混有盐酸小檗碱的鉴别及高效液相色谱法测定黄藤素含量。方法 鉴别采用薄层色谱法，含量用高效液相色谱法，使用YWZ-C 18 柱;乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾-0.05mol/L庚烷磺酸钠(1:1)含0.2%三乙胺=40:60为流动相;流速2ml/min，检测波长344nm。结果 盐酸巴马汀浓度在11.5～57.6μg/ml范围内线性关系良好(r=0.99992)，平均回收率100.3%(RSD=%)。结论 本法快速、简便、准确。
关键词 黄藤素 鉴别 高效液相色谱法
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-077X(2004)01-0059-03
黄藤素为防己科植物黄藤(Fibraurea rerre.)的茎中提取的生物碱(即棕榈碱，又叫巴马汀)，主产于我国云南省红河州南部的河口、屏边等县及越南、缅甸周边国家，与盐酸小檗碱同为抗菌消炎药，两者化学结构、功效基本相似，前者主要用于妇科疾病，后者主要用于消化道疾病。近年来，由于资源紧缺，价格上涨，不法商人在黄藤素的提取过程中加入盐酸小檗碱及其它类似成分，药厂在收购到此类粗粉或精粉后，由于技术原因，无法正确检验，使生产出的黄藤素制剂流入市场，现行版药品标准(《中国药典》1977年版一部)的含量测定为重量法，专属性不强。监于此种情况，笔者经反复实验、研究，找到鉴别黄藤素片中混有盐酸小檗碱的方法，并用高效液相色谱法测定了黄藤素含量，该方法可将盐酸巴马汀峰与盐酸小檗碱峰完全分离，且简单易行，结果可靠，现将实验结果报到如下。
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1 仪器与试药
美国PE公司的高效液相色谱仪(250二元泵，LC290检测器)，大连依利特的Echrom98色谱工作站，盐酸巴马汀对 照品(中国生物制品检定所，批号:732-9002)、盐酸小檗碱(中国生物制品检定所，含量测定用，批号:713-9906)，硅胶G板(青岛海洋化工厂)。样品Ⅰ:黄藤素精粉，样品Ⅱ:黄藤素片，样品Ⅲ:黄藤素注射液以上样品均产于本省，为我所送检及抽检样品。乙腈、庚烷磺酸钠为色谱纯;其它试剂均为分析纯。
2 鉴别
分别取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀对照品适量，加甲醇配制成浓度约为2mg/ml的溶液，作为对照溶液。另取样品适量，加甲醇制成浓度约为2mg/ml的溶液，过滤，取滤液作为样品溶液。分别吸取对照溶液、样品溶液各2～5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)为展开剂，展开，晾干，置日光下观察，结果见图1。
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3 含量测定
3.1 色谱条件 色谱柱为大连依利特YWZ-C 18 柱(10μm，4.6mm×250mm);流动相为乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾-0.05mol/L庚烷磺酸钠(1:1)含0.2%三乙胺=40:60;流速2ml/min，检测波长344nm，进样量20μl。在上述色谱条件下，盐酸巴马汀与内标的色谱图见图2。图1
薄层色谱图
(1)黄藤素;(2)黄藤素(混有盐酸小檗碱);(3)黄藤素片;(4)黄藤素片(混有盐酸小檗碱);(5)盐酸巴马汀+盐酸小檗碱对照组;(6)黄藤素注射液;(7)盐酸巴马汀对照组;(8)盐酸小檗碱对照品
图2 甲醇(Ⅰ)、盐酸巴马汀+盐酸小檗碱(Ⅱ)、供试品的色谱图A.盐酸巴马汀峰 B.内标(盐酸小檗碱峰)
, http://www.100md.com 3.2 试验方法与结果
3.2.1 线性关系试验 对照溶液的配制:取盐酸巴马汀对照品约10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量，充分振摇使溶解，加甲醇至刻度。内标溶液的配制:取盐酸小檗碱对照品约10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量，充分振摇使溶解，加甲醇至刻度。
精密量取对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ml，分别 置25ml量瓶中，各精密加入内标溶液5ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20μl，记录峰面积，以盐酸巴马汀峰与内标峰比值为X轴对盐酸巴马汀浓度Y轴(μg/ml)进行回归分析，得回归方程:Y=2.1983+55.8269X r=0.99992理论板数以盐酸巴马汀峰计为11628，两者的分离度为2.48，符合药典液相色谱仪项下有关规定，盐酸巴马汀浓度在11.5～57.6μg/ml范围内线性关系良好。
3.2.2 精密度试验 精密量取对照溶液5ml，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀，重复进样5次，对照溶液与内标溶液峰面积比的RSD=0.57%(n=5)。
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3.2.3 重复性试验 取批号为20010705的注射液5份，按样品测定方法连续测定，测得平均含量为101.4%，RSD=1.2%(n=5)。
3.2.4 稳定性试验 取3.2.2项下的溶液在室温自然光照条件下放置2、4、8、24h后测定峰面积，分别计算盐酸巴马汀峰与内标峰面积比值，RSD=0.81%，结果表明24h内溶液稳定性好。
3.2.5 回收率试验 精密量取含量已知的样品溶液2ml各3份，分别置25ml量瓶中，各精密加入对照溶液1、3、5ml，再加入内标溶液各5ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样，每一溶液进样2次，记录峰面积，结果见表1。表1 加样回收试验结果
3.2.6 样品测定 精密称取样品适量(约相当于黄藤素10mg;片剂应同时测定平均片重)，置50ml量瓶中，加甲醇适量，置康氏振荡仪上强力振摇30min，使充分溶解，加甲醇稀释至刻度，过滤，精密量取续滤液5ml，内标溶液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀后进样，记录峰面积，结果见表2。 表2 样品的测量结果
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4 讨论
4.1 测定波长的选择 分别用甲醇配制浓度为10μg/ml的溶液，在波长400～200nm的波长范围内扫描，盐酸巴马汀溶液的最大吸收波长为344、275、224nm;盐酸小檗碱溶液的最大吸收波长为344、262、226nm，故检测波长定为344nm。
4.2 该法简单，快速，专属性强，可有效控制黄藤素及制剂中盐酸巴马汀的含量。
4.3 在试验中，曾采用沸水作溶剂，由于片剂中的辅料会影响盐酸巴马汀的溶解度，结果重现性较差，经反复比较，采用甲醇作溶剂较理想。
(收稿日期:2003-08-06)
作者单位:661100云南省红河州药品检验所
(编辑黄 杰), 百拇医药(谷俊峰)
关键词 黄藤素 鉴别 高效液相色谱法
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-077X(2004)01-0059-03
黄藤素为防己科植物黄藤(Fibraurea rerre.)的茎中提取的生物碱(即棕榈碱，又叫巴马汀)，主产于我国云南省红河州南部的河口、屏边等县及越南、缅甸周边国家，与盐酸小檗碱同为抗菌消炎药，两者化学结构、功效基本相似，前者主要用于妇科疾病，后者主要用于消化道疾病。近年来，由于资源紧缺，价格上涨，不法商人在黄藤素的提取过程中加入盐酸小檗碱及其它类似成分，药厂在收购到此类粗粉或精粉后，由于技术原因，无法正确检验，使生产出的黄藤素制剂流入市场，现行版药品标准(《中国药典》1977年版一部)的含量测定为重量法，专属性不强。监于此种情况，笔者经反复实验、研究，找到鉴别黄藤素片中混有盐酸小檗碱的方法，并用高效液相色谱法测定了黄藤素含量，该方法可将盐酸巴马汀峰与盐酸小檗碱峰完全分离，且简单易行，结果可靠，现将实验结果报到如下。
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1 仪器与试药
美国PE公司的高效液相色谱仪(250二元泵，LC290检测器)，大连依利特的Echrom98色谱工作站，盐酸巴马汀对 照品(中国生物制品检定所，批号:732-9002)、盐酸小檗碱(中国生物制品检定所，含量测定用，批号:713-9906)，硅胶G板(青岛海洋化工厂)。样品Ⅰ:黄藤素精粉，样品Ⅱ:黄藤素片，样品Ⅲ:黄藤素注射液以上样品均产于本省，为我所送检及抽检样品。乙腈、庚烷磺酸钠为色谱纯;其它试剂均为分析纯。
2 鉴别
分别取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀对照品适量，加甲醇配制成浓度约为2mg/ml的溶液，作为对照溶液。另取样品适量，加甲醇制成浓度约为2mg/ml的溶液，过滤，取滤液作为样品溶液。分别吸取对照溶液、样品溶液各2～5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)为展开剂，展开，晾干，置日光下观察，结果见图1。
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3 含量测定
3.1 色谱条件 色谱柱为大连依利特YWZ-C 18 柱(10μm，4.6mm×250mm);流动相为乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾-0.05mol/L庚烷磺酸钠(1:1)含0.2%三乙胺=40:60;流速2ml/min，检测波长344nm，进样量20μl。在上述色谱条件下，盐酸巴马汀与内标的色谱图见图2。图1
薄层色谱图
(1)黄藤素;(2)黄藤素(混有盐酸小檗碱);(3)黄藤素片;(4)黄藤素片(混有盐酸小檗碱);(5)盐酸巴马汀+盐酸小檗碱对照组;(6)黄藤素注射液;(7)盐酸巴马汀对照组;(8)盐酸小檗碱对照品
图2 甲醇(Ⅰ)、盐酸巴马汀+盐酸小檗碱(Ⅱ)、供试品的色谱图A.盐酸巴马汀峰 B.内标(盐酸小檗碱峰)
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3.2.1 线性关系试验 对照溶液的配制:取盐酸巴马汀对照品约10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量，充分振摇使溶解，加甲醇至刻度。内标溶液的配制:取盐酸小檗碱对照品约10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量，充分振摇使溶解，加甲醇至刻度。
精密量取对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ml，分别 置25ml量瓶中，各精密加入内标溶液5ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20μl，记录峰面积，以盐酸巴马汀峰与内标峰比值为X轴对盐酸巴马汀浓度Y轴(μg/ml)进行回归分析，得回归方程:Y=2.1983+55.8269X r=0.99992理论板数以盐酸巴马汀峰计为11628，两者的分离度为2.48，符合药典液相色谱仪项下有关规定，盐酸巴马汀浓度在11.5～57.6μg/ml范围内线性关系良好。
3.2.2 精密度试验 精密量取对照溶液5ml，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀，重复进样5次，对照溶液与内标溶液峰面积比的RSD=0.57%(n=5)。
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3.2.3 重复性试验 取批号为20010705的注射液5份，按样品测定方法连续测定，测得平均含量为101.4%，RSD=1.2%(n=5)。
3.2.4 稳定性试验 取3.2.2项下的溶液在室温自然光照条件下放置2、4、8、24h后测定峰面积，分别计算盐酸巴马汀峰与内标峰面积比值，RSD=0.81%，结果表明24h内溶液稳定性好。
3.2.5 回收率试验 精密量取含量已知的样品溶液2ml各3份，分别置25ml量瓶中，各精密加入对照溶液1、3、5ml，再加入内标溶液各5ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样，每一溶液进样2次，记录峰面积，结果见表1。表1 加样回收试验结果
3.2.6 样品测定 精密称取样品适量(约相当于黄藤素10mg;片剂应同时测定平均片重)，置50ml量瓶中，加甲醇适量，置康氏振荡仪上强力振摇30min，使充分溶解，加甲醇稀释至刻度，过滤，精密量取续滤液5ml，内标溶液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀后进样，记录峰面积，结果见表2。 表2 样品的测量结果
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4 讨论
4.1 测定波长的选择 分别用甲醇配制浓度为10μg/ml的溶液，在波长400～200nm的波长范围内扫描，盐酸巴马汀溶液的最大吸收波长为344、275、224nm;盐酸小檗碱溶液的最大吸收波长为344、262、226nm，故检测波长定为344nm。
4.2 该法简单，快速，专属性强，可有效控制黄藤素及制剂中盐酸巴马汀的含量。
4.3 在试验中，曾采用沸水作溶剂，由于片剂中的辅料会影响盐酸巴马汀的溶解度，结果重现性较差，经反复比较，采用甲醇作溶剂较理想。
(收稿日期:2003-08-06)
作者单位:661100云南省红河州药品检验所
(编辑黄 杰), 百拇医药(谷俊峰)