两种方法鉴定致病性葡萄球菌结果比较
【文献标识码】 B 【文章编号】 1609-6614(2003)17-1622-02
为准确鉴别致病性葡萄球菌，对临床上分离的87株葡萄球菌，分别采用血浆凝固酶试验及耐热核酸酶试验加以鉴定，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 甲苯胺兰DNA平板 配方如下DNA0.3g，0.01mol氯化钙1ml，氯化钠10g，琼脂10g，0.1mol甲苯胺兰3ml，0.05mol Tris缓冲液(pH9.0)1000ml;高压灭菌，倾注平板。用直径3mm打孔器在琼脂上打孔，备用。
1.1.2 菌株 从临床感染患者分离的葡萄球菌87株。其中皮肤感染患者45株，败血症患者8株，肾盂肾炎及膀胱炎患者12株，咽部感染患者10株，耳道感染患者4株，齿龈感染患者8株。对照菌为金标准菌株，购自中国药品生物制品检定所。
1.1.3 兔血浆 家兔心脏采血，肝素抗凝，分离血浆待用。
1.2 方法
1.2.1 血浆凝固酶试验 分别采用玻片法和试管法，方法参见文献 [1] ，阳性为致病性葡萄球菌。
1.2.2 耐热核酸酶试验 将待检菌株接种肉汤培养基，37℃培养18h后，100℃水浴15min，冷却后用无菌毛细吸管吸取肉汤液加入平板孔内，置37℃4h，观察结果。致病性葡萄球菌阳性反应在小孔周围形成粉红色晕圈，阴性无此现象。
2 结果
两种方法鉴定致病性葡萄球菌结果见表1，经统计学处理差异有显著性(P<0.01)。
表1 两种方法对87株葡萄球菌鉴定结果比较 注:两种方法比较， △ P<0.01
3 讨论
葡萄球菌分为致病性葡萄球菌与非致病的表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌。很多细菌具有核酸酶，不同的内切酶不同的碱基序列，称作限制性核酸内切酶。金黄色葡萄球菌的核酸酶具有耐热性，经100℃水浴15min不被破坏。把 色素、溶血、血浆凝固酶、耐热核酸酶、甘露醇厌氧产酸等作为鉴别三种菌的依据，其中血浆凝固酶、耐热核酸酶是最重要的鉴定指标。血浆凝固酶试验虽为简单可靠的鉴别方法，但仍有致病性葡萄球菌遗漏，即血浆凝固酶阴性的致病性葡萄球菌。从本文的结果亦可看出，87株葡萄球菌血浆凝固酶试验阳性70株，而耐热核酸酶试验阳性82株，两者有明显差异。血浆凝固酶试验阳性者耐热核酸内切酶试验均阳性;而17株血浆凝固酶试验阴性菌耐热核酸酶试验阳性12株，只有5株阴性。因此，建议在致病性葡萄球菌的鉴定中，对血浆凝固酶试验阴性的葡萄球菌，再用耐热核酸酶试验进行补充检查，以防漏检。
参考文献
1 俞树荣.微生物学和微生物学检验，第2版.北京:人民卫生出版社，2002，146.
作者单位:1300162天津武警医学院附属医院五官科
2300162天津武警医学院免疫学教研室
(编辑黄 杰), http://www.100md.com(薄建华)
为准确鉴别致病性葡萄球菌，对临床上分离的87株葡萄球菌，分别采用血浆凝固酶试验及耐热核酸酶试验加以鉴定，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 甲苯胺兰DNA平板 配方如下DNA0.3g，0.01mol氯化钙1ml，氯化钠10g，琼脂10g，0.1mol甲苯胺兰3ml，0.05mol Tris缓冲液(pH9.0)1000ml;高压灭菌，倾注平板。用直径3mm打孔器在琼脂上打孔，备用。
1.1.2 菌株 从临床感染患者分离的葡萄球菌87株。其中皮肤感染患者45株，败血症患者8株，肾盂肾炎及膀胱炎患者12株，咽部感染患者10株，耳道感染患者4株，齿龈感染患者8株。对照菌为金标准菌株，购自中国药品生物制品检定所。
1.1.3 兔血浆 家兔心脏采血，肝素抗凝，分离血浆待用。
1.2 方法
1.2.1 血浆凝固酶试验 分别采用玻片法和试管法，方法参见文献 [1] ，阳性为致病性葡萄球菌。
1.2.2 耐热核酸酶试验 将待检菌株接种肉汤培养基，37℃培养18h后，100℃水浴15min，冷却后用无菌毛细吸管吸取肉汤液加入平板孔内，置37℃4h，观察结果。致病性葡萄球菌阳性反应在小孔周围形成粉红色晕圈，阴性无此现象。
2 结果
两种方法鉴定致病性葡萄球菌结果见表1，经统计学处理差异有显著性(P<0.01)。
表1 两种方法对87株葡萄球菌鉴定结果比较 注:两种方法比较， △ P<0.01
3 讨论
葡萄球菌分为致病性葡萄球菌与非致病的表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌。很多细菌具有核酸酶，不同的内切酶不同的碱基序列，称作限制性核酸内切酶。金黄色葡萄球菌的核酸酶具有耐热性，经100℃水浴15min不被破坏。把 色素、溶血、血浆凝固酶、耐热核酸酶、甘露醇厌氧产酸等作为鉴别三种菌的依据，其中血浆凝固酶、耐热核酸酶是最重要的鉴定指标。血浆凝固酶试验虽为简单可靠的鉴别方法，但仍有致病性葡萄球菌遗漏，即血浆凝固酶阴性的致病性葡萄球菌。从本文的结果亦可看出，87株葡萄球菌血浆凝固酶试验阳性70株，而耐热核酸酶试验阳性82株，两者有明显差异。血浆凝固酶试验阳性者耐热核酸内切酶试验均阳性;而17株血浆凝固酶试验阴性菌耐热核酸酶试验阳性12株，只有5株阴性。因此，建议在致病性葡萄球菌的鉴定中，对血浆凝固酶试验阴性的葡萄球菌，再用耐热核酸酶试验进行补充检查，以防漏检。
参考文献
1 俞树荣.微生物学和微生物学检验，第2版.北京:人民卫生出版社，2002，146.
作者单位:1300162天津武警医学院附属医院五官科
2300162天津武警医学院免疫学教研室
(编辑黄 杰), http://www.100md.com(薄建华)