降钙素基因相关肽阳性神经纤维在颞下颌关节区中的分布
【摘要】 目的 观察降钙素基因相关肽阳性神经纤维在人颞下颌关节区的分布。方法利用免疫组织化学技术，观察正常成人6人(12侧)颞下颌关节新鲜组织中，降钙素基因相关肽阳性神经纤维在关节的盘周附着组织和关节囊的内、外、前、后侧以及关节盘中央的分布，并比较各个区神经纤维密度的异同。结果 除关节盘中央外，关节囊及盘周组织均有丰富的降钙素基因相关肽阳性神经纤维，其中各个区密度分别是:前部盘周附着和关节囊(448.7±78.5)mm 2 、后部(426.7±55.9)mm 2 、内侧(205.2±39.9)mm 2 、外侧(295.0±36.6)mm 2 。结论 降钙素基因相关肽阳性神经纤维广泛分布于颞下颌关节软组织中，是感觉神经的一部分。
关键词 颞下颌关节 免疫组织化学 降钙素基因相关肽
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)02-0097-02
, 百拇医药
The distribution of calcitonin gene-related peptide-like
immunoreactive nerve fibres around the temporomandibular joint
Lin Hongbin，Li Ningyi，Jin Botao，et al.
Yan Tai107Hospital Shangdong264002.
【Abstract】 Objective To study the distribution of nerve fibre in the disc attachment and the medial portion，lateral portion，anterior portion，posterior portion of the joint capsule and the center of the disc.Methods Using imˉmunohistochemical method to observe the distribution of calcitonin gene-related peptide-like immunoreactive(CGRP-LI)nerve fibres in the disc attachment and the medial portion，lateral portion，anterior portion，posterior porˉtion of the joint capsule and the center of the disc of the fresh tissues from6adult male(12sides)temporomandibular joints.Results Calcitonin generelated peptide-like immunoreactive(CGRP-LI)nerve fibres were plentifully disˉtributed in the temporomandibular joint except the central disc band，mainly in the periphery of blood vessels，especialˉly arteries.Density:anterior disc attachment and capsule(448.7±78.5)mm 2 ，posterior portion(426.7±55.9)mm 2 ，medial portion(205.2±39.9)mm 2 ，lateral portion(295.0±36.6)mm 2 .Conclusion CGRP-LI nerve fibres were widely distributed in the temporomandibular joint and were a part of trigeminal sensory nerve.
, 百拇医药
Key words temporomandibular joint immunohistochemistr calcitonin gene-related peptide
颞下颌关节紊乱病是口腔颌面部常见的疾病之一，已经引起了国内外学者的高度重视，并进行了多方面的研究。随着研究的深入，神经因素在颞下颌关节紊乱病发生发展以及预后中的作用，引起了国内外学者越来越浓厚的兴趣，同时也取得了较大的进展。但目前有关神经方面的研究，大多数尚集中于动物实验。
本实验从研究正常人颞下颌关节的神经分布入手，选取正常成人6人(12侧)的关节盘、盘周附着组织和关节囊新鲜组织，经免疫组织化学染色后，观察神经纤维在这些区域的分布。根据神经纤维分布的特点，分析神经分布与颞下颌关节功能之间的相互关系，探讨神经因素在颞下颌关节紊乱病中的作用。1 材料与方法
1.1 设备与试剂 (1)切片机，德国Leica公司产品。(2)兔抗人降钙素，北京中山生物技术有限公司产品。(3)克隆抗体(ZA-0025)。(4)S-P试剂盒(KIT9730)，福州迈新生物技术开发公司产品。(5)计算机图像分析系统，德国Leˉica公司产品。
, 百拇医药
1.2 标本选择 新鲜关节囊、盘周组织及关节盘，均为正常关节组织，共来自6人(12侧)。膝关节组织标本2例，作为空白对照;甲状腺髓样癌标本2例，作为阳性对照。
1.3 实验方法 (1)所有标本用10%福尔马林固定24h，常规石蜡包埋、连续切片，片厚5μm。(2)切片脱蜡至水，免疫组化S-P染色，HE复染。一抗染色前，用0.1%胰蛋白酶消化，37℃20min。观察染色满意，用蒸馏水冲洗，最后脱水，封片。(3)选用膝关节组织和甲状腺髓样癌组织分别作为空白及阳性对照，具体操作过程同上。但对照实验中，空白对照用0.01mol/L PBS代替一抗;阳性对照组滴加降钙素一抗。(4)镜下观察，拍片，进行计算机图像分析。
2 结果
在关节囊内、外、前、后壁及盘周附着等处均可见降钙素基因相关肽神经纤维阳性表达，主要分布在走行迂曲、方向不规则的纤维中，部分呈波浪状、棕黄色香肠状结构或呈不典型串珠状(见图1)。部分关节囊周围的血管壁中见阳性表达，表现为在动脉血管的肌层或外膜，呈放射状及环状结构(见图2)。滑膜组织中的纤维中见阳性表达。关节盘组织中未见阳性表达。阳性对照组中的甲状腺髓样癌组织中见阳性表达(见图3)。空白对照组中未见阳性表达现象(见图4)。为了检测颞下颌关节各个部位降钙素基因相关肽阳性纤维的密度，本研究将关节分为4个区:Ⅰ、前部盘周附着和关节囊;Ⅱ、后部盘周附着和关节囊;Ⅲ、内侧盘周附着和关节囊;Ⅳ、外侧盘周附着和关节囊。结果是:Ⅰ区:(448.7±78.5)mm 2 、Ⅱ区:(426.7±55.9)mm 2 、Ⅲ区:(205.2±39.9)mm 2 、Ⅳ区:(295.0±36.6)mm 2 ;即Ⅰ>Ⅱ>Ⅳ>Ⅲ。统计学分析表明:Ⅰ与Ⅲ、Ⅰ与Ⅳ、Ⅱ与Ⅲ和Ⅱ与Ⅳ之间差异存在显著性;而Ⅰ与Ⅱ、Ⅲ与Ⅳ之间差异无显著性。
, 百拇医药
3 讨论
有关颞下颌关节中降钙素基因相关肽阳性神经纤维的研究，国内尚不多见，而国外已经作了比较深入的研究，尽管目前大多数研究仍局限于动物实验。Kido MA等 [1] 观察到:降钙素基因相关肽阳性神经纤维在关节囊及盘周附着的前部密度最高，然后依次为后部、外部和内部。Ichikawa H等 [2] 指出降钙素基因相关肽阳性神经纤维主要分布于血管壁周围。刘向辉等 [3] 发现在鼠颞下颌关节各部位均有丰富的降钙素基因相关肽阳性神经纤维，主要沿小血管尤其是动脉周围分布，密度以前部盘周附着和关节囊中最高。而且所有文献均指出:在关节盘中央没有神经分布。本实验结果表明，在人的颞下颌关节中，除关节盘中央区外，盘周附着、关节囊及周围疏松结缔组织内均有丰富的降钙素基因相关肽阳性神经纤维分布，小动脉血管壁中及外膜也见有阳性神经纤维分布，密度以前部盘周附着和关节囊中最高，与上述研究结果基本一致。
颞下颌关节区的痛觉感受器为游离神经末梢，作为感觉神经肽的降钙素基因相关肽，大部分就存在于初级感觉神经元中，当痛觉感受器受到伤害性刺激时，不仅产生疼痛信号，而且将神经肽从其末梢逆行释放入局部组织中。研究表明，降钙素基因相关肽的主要功能是:①强烈的扩血管作用，增加TMJ局部血流量，促进炎症愈合;②作为生长因子，促进血管内皮细胞及成纤维细胞等的增生并控制增生的时间和分布;③是P物质分解的有效抑制剂，伴随P物质释放的降钙素基因相关肽直接或间接地帮助P物质而发挥作用;④作为感受神经的兴奋性递质，参与疼痛等感觉信息的传入。作为感觉神经肽的降钙素基因相关肽的分泌，可以受到以下一些因素的影响 [4，5] :①各种伤害性刺激如冷热、机械损伤、压力和精神紧张等都可以激活颞下颌关节内的相应感受器，引起外周感觉神经中神经肽的合成与分泌增加。②炎症介质如胶原酶、前列腺素E 2 、5-羟色胺、组胺、白介素-1及生长因子等，均有剂量依赖性的促神经肽分泌的作用。
, http://www.100md.com
因此可以推断，颞下颌关节区所受到的任何刺激:如过大开口、外伤或咬合紊乱等，都可能使降钙素基因相关肽的分泌增加。病理切片显示 [6] :发生颞下颌关节紊乱病时，关节囊内有炎细胞浸润。炎细胞释放的炎性介质，可以刺激神经末梢的感受器，使之在产生痛觉的同时，还释放神经肽如降钙素基因相关肽、P物质等，而它们又可以作为炎症介质直接参与炎症反应。所以感觉神经不仅仅具有感觉功能，而用参与了关节疾病的发生和发展，并且发挥着十分重要的作用。应该强调的是:P物质、降钙素基因相关肽等神经肽的分泌，还受到精神因素的影响，所以，神经因素在颞下颌关节紊乱病的发病中，是始动因素还是继发因素，仍然不能确定，还需继续研究。(本文图片见封三)
参考文献
1 Kido MA，Kiyoshima T，Kondo T，et al.Distribution of substance P and calcitoningene-related peptide-like immunoreactive nerve fibers in the rat temporomandibular joint.J Dent Res，1993，72(2):592-598.
, 百拇医药
2 Ichikawa H，Wakisaka S，Matsuo S，et al.Peptidergic innervation of the temporomandibular disk in the rat.Experieentia，1989，15;45(3):303-304.
3 刘向辉，斯方杰，周树夏，等.降钙素基因相关肽阳性神经纤维在鼠颞下颌关节中的分布.中华口腔医学杂志，2000，35(1):41-43.
4 Martrin L，Dennis AC，John H.Science，1987，235(4786):393.
5 Fargreaves KM，Swift JQ，Roszkowski MT，et al.Oral Surg Oral Med Oˉral Pathol，1994，78(4):503.
6 马绪臣.颞下颌关节病的基础与临床，北京:人民卫生出版社，2000，28.
(收稿日期:2002-12-29)
作者单位:1264002山东烟台解放军第107中心医院口腔科
2266003青岛大学医学院附属医院口腔科
(编辑一 坤), 百拇医药(林红斌 李宁毅 金波涛 刘萍 郝凤)
关键词 颞下颌关节 免疫组织化学 降钙素基因相关肽
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)02-0097-02
, 百拇医药
The distribution of calcitonin gene-related peptide-like
immunoreactive nerve fibres around the temporomandibular joint
Lin Hongbin，Li Ningyi，Jin Botao，et al.
Yan Tai107Hospital Shangdong264002.
【Abstract】 Objective To study the distribution of nerve fibre in the disc attachment and the medial portion，lateral portion，anterior portion，posterior portion of the joint capsule and the center of the disc.Methods Using imˉmunohistochemical method to observe the distribution of calcitonin gene-related peptide-like immunoreactive(CGRP-LI)nerve fibres in the disc attachment and the medial portion，lateral portion，anterior portion，posterior porˉtion of the joint capsule and the center of the disc of the fresh tissues from6adult male(12sides)temporomandibular joints.Results Calcitonin generelated peptide-like immunoreactive(CGRP-LI)nerve fibres were plentifully disˉtributed in the temporomandibular joint except the central disc band，mainly in the periphery of blood vessels，especialˉly arteries.Density:anterior disc attachment and capsule(448.7±78.5)mm 2 ，posterior portion(426.7±55.9)mm 2 ，medial portion(205.2±39.9)mm 2 ，lateral portion(295.0±36.6)mm 2 .Conclusion CGRP-LI nerve fibres were widely distributed in the temporomandibular joint and were a part of trigeminal sensory nerve.
, 百拇医药
Key words temporomandibular joint immunohistochemistr calcitonin gene-related peptide
颞下颌关节紊乱病是口腔颌面部常见的疾病之一，已经引起了国内外学者的高度重视，并进行了多方面的研究。随着研究的深入，神经因素在颞下颌关节紊乱病发生发展以及预后中的作用，引起了国内外学者越来越浓厚的兴趣，同时也取得了较大的进展。但目前有关神经方面的研究，大多数尚集中于动物实验。
本实验从研究正常人颞下颌关节的神经分布入手，选取正常成人6人(12侧)的关节盘、盘周附着组织和关节囊新鲜组织，经免疫组织化学染色后，观察神经纤维在这些区域的分布。根据神经纤维分布的特点，分析神经分布与颞下颌关节功能之间的相互关系，探讨神经因素在颞下颌关节紊乱病中的作用。1 材料与方法
1.1 设备与试剂 (1)切片机，德国Leica公司产品。(2)兔抗人降钙素，北京中山生物技术有限公司产品。(3)克隆抗体(ZA-0025)。(4)S-P试剂盒(KIT9730)，福州迈新生物技术开发公司产品。(5)计算机图像分析系统，德国Leˉica公司产品。
, 百拇医药
1.2 标本选择 新鲜关节囊、盘周组织及关节盘，均为正常关节组织，共来自6人(12侧)。膝关节组织标本2例，作为空白对照;甲状腺髓样癌标本2例，作为阳性对照。
1.3 实验方法 (1)所有标本用10%福尔马林固定24h，常规石蜡包埋、连续切片，片厚5μm。(2)切片脱蜡至水，免疫组化S-P染色，HE复染。一抗染色前，用0.1%胰蛋白酶消化，37℃20min。观察染色满意，用蒸馏水冲洗，最后脱水，封片。(3)选用膝关节组织和甲状腺髓样癌组织分别作为空白及阳性对照，具体操作过程同上。但对照实验中，空白对照用0.01mol/L PBS代替一抗;阳性对照组滴加降钙素一抗。(4)镜下观察，拍片，进行计算机图像分析。
2 结果
在关节囊内、外、前、后壁及盘周附着等处均可见降钙素基因相关肽神经纤维阳性表达，主要分布在走行迂曲、方向不规则的纤维中，部分呈波浪状、棕黄色香肠状结构或呈不典型串珠状(见图1)。部分关节囊周围的血管壁中见阳性表达，表现为在动脉血管的肌层或外膜，呈放射状及环状结构(见图2)。滑膜组织中的纤维中见阳性表达。关节盘组织中未见阳性表达。阳性对照组中的甲状腺髓样癌组织中见阳性表达(见图3)。空白对照组中未见阳性表达现象(见图4)。为了检测颞下颌关节各个部位降钙素基因相关肽阳性纤维的密度，本研究将关节分为4个区:Ⅰ、前部盘周附着和关节囊;Ⅱ、后部盘周附着和关节囊;Ⅲ、内侧盘周附着和关节囊;Ⅳ、外侧盘周附着和关节囊。结果是:Ⅰ区:(448.7±78.5)mm 2 、Ⅱ区:(426.7±55.9)mm 2 、Ⅲ区:(205.2±39.9)mm 2 、Ⅳ区:(295.0±36.6)mm 2 ;即Ⅰ>Ⅱ>Ⅳ>Ⅲ。统计学分析表明:Ⅰ与Ⅲ、Ⅰ与Ⅳ、Ⅱ与Ⅲ和Ⅱ与Ⅳ之间差异存在显著性;而Ⅰ与Ⅱ、Ⅲ与Ⅳ之间差异无显著性。
, 百拇医药
3 讨论
有关颞下颌关节中降钙素基因相关肽阳性神经纤维的研究，国内尚不多见，而国外已经作了比较深入的研究，尽管目前大多数研究仍局限于动物实验。Kido MA等 [1] 观察到:降钙素基因相关肽阳性神经纤维在关节囊及盘周附着的前部密度最高，然后依次为后部、外部和内部。Ichikawa H等 [2] 指出降钙素基因相关肽阳性神经纤维主要分布于血管壁周围。刘向辉等 [3] 发现在鼠颞下颌关节各部位均有丰富的降钙素基因相关肽阳性神经纤维，主要沿小血管尤其是动脉周围分布，密度以前部盘周附着和关节囊中最高。而且所有文献均指出:在关节盘中央没有神经分布。本实验结果表明，在人的颞下颌关节中，除关节盘中央区外，盘周附着、关节囊及周围疏松结缔组织内均有丰富的降钙素基因相关肽阳性神经纤维分布，小动脉血管壁中及外膜也见有阳性神经纤维分布，密度以前部盘周附着和关节囊中最高，与上述研究结果基本一致。
颞下颌关节区的痛觉感受器为游离神经末梢，作为感觉神经肽的降钙素基因相关肽，大部分就存在于初级感觉神经元中，当痛觉感受器受到伤害性刺激时，不仅产生疼痛信号，而且将神经肽从其末梢逆行释放入局部组织中。研究表明，降钙素基因相关肽的主要功能是:①强烈的扩血管作用，增加TMJ局部血流量，促进炎症愈合;②作为生长因子，促进血管内皮细胞及成纤维细胞等的增生并控制增生的时间和分布;③是P物质分解的有效抑制剂，伴随P物质释放的降钙素基因相关肽直接或间接地帮助P物质而发挥作用;④作为感受神经的兴奋性递质，参与疼痛等感觉信息的传入。作为感觉神经肽的降钙素基因相关肽的分泌，可以受到以下一些因素的影响 [4，5] :①各种伤害性刺激如冷热、机械损伤、压力和精神紧张等都可以激活颞下颌关节内的相应感受器，引起外周感觉神经中神经肽的合成与分泌增加。②炎症介质如胶原酶、前列腺素E 2 、5-羟色胺、组胺、白介素-1及生长因子等，均有剂量依赖性的促神经肽分泌的作用。
, http://www.100md.com
因此可以推断，颞下颌关节区所受到的任何刺激:如过大开口、外伤或咬合紊乱等，都可能使降钙素基因相关肽的分泌增加。病理切片显示 [6] :发生颞下颌关节紊乱病时，关节囊内有炎细胞浸润。炎细胞释放的炎性介质，可以刺激神经末梢的感受器，使之在产生痛觉的同时，还释放神经肽如降钙素基因相关肽、P物质等，而它们又可以作为炎症介质直接参与炎症反应。所以感觉神经不仅仅具有感觉功能，而用参与了关节疾病的发生和发展，并且发挥着十分重要的作用。应该强调的是:P物质、降钙素基因相关肽等神经肽的分泌，还受到精神因素的影响，所以，神经因素在颞下颌关节紊乱病的发病中，是始动因素还是继发因素，仍然不能确定，还需继续研究。(本文图片见封三)
参考文献
1 Kido MA，Kiyoshima T，Kondo T，et al.Distribution of substance P and calcitoningene-related peptide-like immunoreactive nerve fibers in the rat temporomandibular joint.J Dent Res，1993，72(2):592-598.
, 百拇医药
2 Ichikawa H，Wakisaka S，Matsuo S，et al.Peptidergic innervation of the temporomandibular disk in the rat.Experieentia，1989，15;45(3):303-304.
3 刘向辉，斯方杰，周树夏，等.降钙素基因相关肽阳性神经纤维在鼠颞下颌关节中的分布.中华口腔医学杂志，2000，35(1):41-43.
4 Martrin L，Dennis AC，John H.Science，1987，235(4786):393.
5 Fargreaves KM，Swift JQ，Roszkowski MT，et al.Oral Surg Oral Med Oˉral Pathol，1994，78(4):503.
6 马绪臣.颞下颌关节病的基础与临床，北京:人民卫生出版社，2000，28.
(收稿日期:2002-12-29)
作者单位:1264002山东烟台解放军第107中心医院口腔科
2266003青岛大学医学院附属医院口腔科
(编辑一 坤), 百拇医药(林红斌 李宁毅 金波涛 刘萍 郝凤)