乳腺癌C-erbB-2、CD 44 V 6 、nm23表达与淋巴结转移及预后的关系
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中华医学研究杂志 2003年2月 第3卷 第2期
【摘要】 目的 探讨C-erbB-2、CD44V 6 和nm23在乳腺癌组织中表达与腋窝淋巴结转移及预后的关系。方法 采用免疫组化方法进行C-erbB-2、CD44V 6 和nm23的检测。结果 C-erbB-2、CD44V 6 阳性表达和nm23低表达均与乳腺癌腋淋巴结转移及预后密切相关，C-erbB-2、CD44V 6 同时阳性表达且nm23低表达者淋巴结转移率高，生存率低。结论 联合检测C-erbB-2、CD44V 6 和nm23能更准确地判断乳腺癌的淋巴结转移和预后状态。
关键词 乳腺癌 C-erbB-2 CD44V 6 nm23 预后
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)02-0111-02
Study on the relation between the expression of C-erbB-2，
, 百拇医药
CD44V 6and nm23with axillary lymph nodes metastasis and prognosis in breast cancer
Li Xiaoli，Guo Ziheng，Li Yulian
The Third Hosiptal of Harbin Medical University，Hei Longjiang150040.
【Abstract】 Objective To study the expression of C-erbB-2，CD44V 6 ，nm23with the axillary lymph nodes metastasis and prognosis in breast cancer.Methods Todetect the expression of C-erbB-2，CD44V 6 and nm23gene product by means of immunohistochemistry method.Results The positive expression of C-erbB-2，CD44V 6 and the low expression of nm23were correlated with the lymph nodemetastasis and prognosis in breast cancer.Patients with positive expression of C-erbB-2，CD44V 6and low expression of nm23had a high lymph node metastatic rate and a lower survival rate.Conclusion Combining detection of the expression C-erbB-2，CD44V 6 and nm23would be a reliable index to evaluate the matastasis，recurrence and prognosis of breast cancer.Key words breast neophasms C-erbB-2 CD44V 6 nm23 prognosis
, 百拇医药
肿瘤的转移和复发是肿瘤患者死亡的主要原因。目前，已有多种肿瘤标志物用于监测肿瘤的转移和预后，而C-erbB-2、CD44V 6 和nm23与乳腺癌关系密切 [1] 。我们采用免疫组化S-P法观察了60例乳腺癌组织中C-erbB-2、CD44V 6 和nm23的表达与腋淋巴结转移及预后的关系，分析如下。
1 材料与方法
1.1 临床资料 全组60例均为女性选自1995年1月～12月，我院收治的乳腺癌术后病人的存档蜡块且临床病理资料完整。年龄30～72岁，中位年龄48岁，腋淋巴结转移的41例，无转移的19例;生存>5年的35例，生存<5年的25例;其中浸润性导管癌8例，单纯癌41例，髓样癌8例，硬癌3例;TNM分期:Ⅰ期5例，Ⅱ期33例，Ⅲ期22例。
1.2 试验方法 采用免疫组化S-P法，用已知的阳性乳腺癌切片对照，以Tis-HCl代替一抗作为阴性对照，切片、染色等。
, 百拇医药
1.3 阳性结果判定 C-erbB-2阳性反应呈棕黄色，C-erbB-2阳性表达主要位于细胞浆中，其判定标准为:(1)无阳性细胞表达为(-);(2)阳性细胞数<25%或多数阳性细胞显色较弱为(+);(3)强阳性细胞数占25%～75%为();(4)强阳性细胞数>75%为()。CD44V 6 阳性反应呈棕黄色，阳性表达主要位于细胞膜上，当阳性细胞>10% 为阳性表达(+)，反之为阴性表达(-)。nm23基因蛋白(NDPR)表达主要位于细胞浆中，偶可见细胞核着色，细胞浆显示棕黄色颗粒，根据着色强度分为四级:(1)未着色(-)，(2)浅黄色(+)，(3)棕黄色()，(4)深棕色()。凡无着色或阳性细胞数≤30%均定位低表达，着色细胞数>30%者为高表达。
1.4 统计学方法 采用SAS6.12软件包统计分析数据结果。
2 结果
2.1 癌组织中C-erbB-2、CD44V 6 和nm23表达与腋淋巴结转移关系 经术后常规病理学检查确诊，60例乳腺癌中腋淋巴结转移组41例，其中C-erbB-2阳性表达26例(63.41%)，非腋淋巴结转移组19例，其中C-erbB-2阳性表达6例(31.58%)，两组中C-erbB-2阳性表达率差异有显著性(P<0.05)。在腋淋巴结转移阳性和阴性组中CD44V 6 阳性表达分别是18例(43.90%)和3例(15.79%)，经统计学处理差异有显著性(P<0.05)，并且在两组中nm23蛋白高表达的例数分别为21例(51.22%)和16例(84.21%)，经统计学处理，二者之间差异有显著性(P<0.05)，见表1。在C-erbB-2阳性组中，同时阳性表达CD44V 6 而nm23低表达的有16例，其中15例出现淋巴结转移，淋巴结转移率达93.75%，而在C-erbB-2阴性组中，同时阴性表达CD44V 6 而nm23高表达的有12例，其中4例出现淋巴结转移，淋巴结转移率33.33%，两者经统计学处理差异有显著性(P<0.05)。
, 百拇医药
2.2 癌组织中C-erbB-2、CD44V 6 和nm23与患者预后的关系 60例乳腺癌均于术后随访5年，生存期>5年的有35例，其中C-erbB-2阳性表达12例，阳性率34.28%，生存期<5年的C-erbB-2阳性表达20例，表达率80%，两组间差异有显著性(P<0.05)，生存期大于5年或小于5年的两组中CD44V 6 阳性表达分别为8例(22.86%)和13例(52%)，两组间差异有显著性(P<0.05);生存期>5年的患 者多为nm23高表达，表达26例，表达率74.29%，而生存期<5年多为nm23低表达，表达14例，表达率56%，生存期不同的两组nm23高低表达率差异均有显著性(P<0.05)，见表2。C-erbB-2和CD44V 6 阳性表达及nm23低表达的16例中，生存>5年者3例(18.75%)，而C-erbB-2和CD44V 6 阴性表达及nm23高表达的12例中，生存>5年者10例(83.33%)，经统计学处理5年生存率差异有显著性(P<0.05)。
表1 C-erbB-2、CD44V 6 和nm23与腋淋巴结转移的关系 例(略) 表2 C-erbB-2、CD44V 6 和nm23表达与患者预后的关系例(略) 注:ˇP<0.05
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3 讨论
癌基因C-erbB-2位于第17号染色体q21带上，是一种具有酪氨酸激酶活性的细胞癌基因，国外文献报道C-erbB-2在乳腺癌的表达阳性率15%～30% [2] 。通过不断的研究证实，C-erbB-2蛋白表达与患者的年龄，肿瘤体积之间无相关关系，但与组织学分级、淋巴结转移状况及ER和PR之间有相关关系，与患者的预后有相关关系。本组60例中C-erbB-2阳性表达32例，阳性率53.33%，明显高于国外文献报道，但与国内报道相近。C-erbB-2阳性表达组发生淋巴结转移的例数，生存<5年的例数明显高于无淋巴结转移组和生存>5年者，统计学处理差异有显著性。说明C-erbB-2除与淋巴结转移有关外，还与预后有密切关系，可做为一项独立的预后指标。
CD44是一种整合膜糖蛋白，CD44V 6 是CD44的一种变异型，其表达有助于肿瘤细胞获得转移潜能，从而使肿瘤细胞离开原发灶而进入外周淋巴器官，进而侵入淋巴结并增殖形成转移癌。本实验观察CD44V 6 表达与腋淋巴结的转移呈正相关。CD44V 6 在有腋淋巴结转移组表达(43.90%)明显高于无转移组(15.79%)。由表2可见生存<5年的CD44V 6 阳性表达(52.0%)明显高于生存>5年的CD44V 6 的阳性表达(22.86%)，说明CD44V 6 的表达是影响预后的一个独立的重要因素。
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nm23基因已被认为是肿瘤转移抑制基因，对于nm23在转移中的表达情况，国内外报道较多 [1～3] ，认为nm23表达程度与淋巴结受累情况有非常显著相关意义，nm23高表达区域淋巴结转移发生率明显低于低表达者(P<0.05);这表明nm23在乳腺癌淋巴结转移过程中发挥着负性调节作 用。本实验中淋巴结阳性组中nm23的高表达率(51.22%)明显低于淋巴结阴性组(84.21%)，差异有显著性，说明nm23的表达程度与腋淋巴结转移呈负相关，与文献报道一致，本组5年生存率比较，nm23低表达者生存率低，nm23高表达者生存率高，说明nm23也可以做为乳腺癌的一个预后指标。
另外，在恶性肿瘤发生的癌基因研究中，许多学者提出了基因协同作用假说，认为在恶性肿瘤的发生发展和转移阶段，至少有两个或两个以上的不同的异常激活的基因各自发挥了不同的作用。虽然C-erbB-2、CD44V 6 和nm23均被认为可做为独立的预后指标。但本实验分析了C-erbB-2和CD44V 6 阳性表达同时nm23低表达组，淋巴结转移率(93.75%)明显高于C-erbB-2和CD44V 6 阴性表达同时nm23高表达组(33.33%)，且5年生存率(18.75%)明显低于该组(83.33%)，均有统计学意义，因此，联合检测此三种基因的表达，综合分析，能够更准确地判定乳腺癌的转移和预后状态，为治疗方案的合理选择提供可靠依据。
, 百拇医药
参考文献
1 Haynes BF，Telen MJ，Hale MP，et al.SM CD 44 .A molecule involved in leucocyte adherence and T-cell activation.Immunol today，1989，10:423.
2 Aznavoorian S，Murphy AN，Stetle-Stevenson WG，et al.Molecular asˉpects of tumor cell invasion and metastasis.Cancer，1993，71(4):1368-1341.
3 丁洪基，李爱英，李新功，等.乳腺肿瘤中C-erbB-2和nm23蛋白的表达及临床意义.肿瘤防治研究，2000，27(6):444-446.
(收稿日期:2002-08-30)
作者单位:150040哈尔滨医科大学第三临床医学院内科
(编辑于少伟), 百拇医药(李晓莉)
关键词 乳腺癌 C-erbB-2 CD44V 6 nm23 预后
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)02-0111-02
Study on the relation between the expression of C-erbB-2，
, 百拇医药
CD44V 6and nm23with axillary lymph nodes metastasis and prognosis in breast cancer
Li Xiaoli，Guo Ziheng，Li Yulian
The Third Hosiptal of Harbin Medical University，Hei Longjiang150040.
【Abstract】 Objective To study the expression of C-erbB-2，CD44V 6 ，nm23with the axillary lymph nodes metastasis and prognosis in breast cancer.Methods Todetect the expression of C-erbB-2，CD44V 6 and nm23gene product by means of immunohistochemistry method.Results The positive expression of C-erbB-2，CD44V 6 and the low expression of nm23were correlated with the lymph nodemetastasis and prognosis in breast cancer.Patients with positive expression of C-erbB-2，CD44V 6and low expression of nm23had a high lymph node metastatic rate and a lower survival rate.Conclusion Combining detection of the expression C-erbB-2，CD44V 6 and nm23would be a reliable index to evaluate the matastasis，recurrence and prognosis of breast cancer.Key words breast neophasms C-erbB-2 CD44V 6 nm23 prognosis
, 百拇医药
肿瘤的转移和复发是肿瘤患者死亡的主要原因。目前，已有多种肿瘤标志物用于监测肿瘤的转移和预后，而C-erbB-2、CD44V 6 和nm23与乳腺癌关系密切 [1] 。我们采用免疫组化S-P法观察了60例乳腺癌组织中C-erbB-2、CD44V 6 和nm23的表达与腋淋巴结转移及预后的关系，分析如下。
1 材料与方法
1.1 临床资料 全组60例均为女性选自1995年1月～12月，我院收治的乳腺癌术后病人的存档蜡块且临床病理资料完整。年龄30～72岁，中位年龄48岁，腋淋巴结转移的41例，无转移的19例;生存>5年的35例，生存<5年的25例;其中浸润性导管癌8例，单纯癌41例，髓样癌8例，硬癌3例;TNM分期:Ⅰ期5例，Ⅱ期33例，Ⅲ期22例。
1.2 试验方法 采用免疫组化S-P法，用已知的阳性乳腺癌切片对照，以Tis-HCl代替一抗作为阴性对照，切片、染色等。
, 百拇医药
1.3 阳性结果判定 C-erbB-2阳性反应呈棕黄色，C-erbB-2阳性表达主要位于细胞浆中，其判定标准为:(1)无阳性细胞表达为(-);(2)阳性细胞数<25%或多数阳性细胞显色较弱为(+);(3)强阳性细胞数占25%～75%为();(4)强阳性细胞数>75%为()。CD44V 6 阳性反应呈棕黄色，阳性表达主要位于细胞膜上，当阳性细胞>10% 为阳性表达(+)，反之为阴性表达(-)。nm23基因蛋白(NDPR)表达主要位于细胞浆中，偶可见细胞核着色，细胞浆显示棕黄色颗粒，根据着色强度分为四级:(1)未着色(-)，(2)浅黄色(+)，(3)棕黄色()，(4)深棕色()。凡无着色或阳性细胞数≤30%均定位低表达，着色细胞数>30%者为高表达。
1.4 统计学方法 采用SAS6.12软件包统计分析数据结果。
2 结果
2.1 癌组织中C-erbB-2、CD44V 6 和nm23表达与腋淋巴结转移关系 经术后常规病理学检查确诊，60例乳腺癌中腋淋巴结转移组41例，其中C-erbB-2阳性表达26例(63.41%)，非腋淋巴结转移组19例，其中C-erbB-2阳性表达6例(31.58%)，两组中C-erbB-2阳性表达率差异有显著性(P<0.05)。在腋淋巴结转移阳性和阴性组中CD44V 6 阳性表达分别是18例(43.90%)和3例(15.79%)，经统计学处理差异有显著性(P<0.05)，并且在两组中nm23蛋白高表达的例数分别为21例(51.22%)和16例(84.21%)，经统计学处理，二者之间差异有显著性(P<0.05)，见表1。在C-erbB-2阳性组中，同时阳性表达CD44V 6 而nm23低表达的有16例，其中15例出现淋巴结转移，淋巴结转移率达93.75%，而在C-erbB-2阴性组中，同时阴性表达CD44V 6 而nm23高表达的有12例，其中4例出现淋巴结转移，淋巴结转移率33.33%，两者经统计学处理差异有显著性(P<0.05)。
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2.2 癌组织中C-erbB-2、CD44V 6 和nm23与患者预后的关系 60例乳腺癌均于术后随访5年，生存期>5年的有35例，其中C-erbB-2阳性表达12例，阳性率34.28%，生存期<5年的C-erbB-2阳性表达20例，表达率80%，两组间差异有显著性(P<0.05)，生存期大于5年或小于5年的两组中CD44V 6 阳性表达分别为8例(22.86%)和13例(52%)，两组间差异有显著性(P<0.05);生存期>5年的患 者多为nm23高表达，表达26例，表达率74.29%，而生存期<5年多为nm23低表达，表达14例，表达率56%，生存期不同的两组nm23高低表达率差异均有显著性(P<0.05)，见表2。C-erbB-2和CD44V 6 阳性表达及nm23低表达的16例中，生存>5年者3例(18.75%)，而C-erbB-2和CD44V 6 阴性表达及nm23高表达的12例中，生存>5年者10例(83.33%)，经统计学处理5年生存率差异有显著性(P<0.05)。
表1 C-erbB-2、CD44V 6 和nm23与腋淋巴结转移的关系 例(略) 表2 C-erbB-2、CD44V 6 和nm23表达与患者预后的关系例(略) 注:ˇP<0.05
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3 讨论
癌基因C-erbB-2位于第17号染色体q21带上，是一种具有酪氨酸激酶活性的细胞癌基因，国外文献报道C-erbB-2在乳腺癌的表达阳性率15%～30% [2] 。通过不断的研究证实，C-erbB-2蛋白表达与患者的年龄，肿瘤体积之间无相关关系，但与组织学分级、淋巴结转移状况及ER和PR之间有相关关系，与患者的预后有相关关系。本组60例中C-erbB-2阳性表达32例，阳性率53.33%，明显高于国外文献报道，但与国内报道相近。C-erbB-2阳性表达组发生淋巴结转移的例数，生存<5年的例数明显高于无淋巴结转移组和生存>5年者，统计学处理差异有显著性。说明C-erbB-2除与淋巴结转移有关外，还与预后有密切关系，可做为一项独立的预后指标。
CD44是一种整合膜糖蛋白，CD44V 6 是CD44的一种变异型，其表达有助于肿瘤细胞获得转移潜能，从而使肿瘤细胞离开原发灶而进入外周淋巴器官，进而侵入淋巴结并增殖形成转移癌。本实验观察CD44V 6 表达与腋淋巴结的转移呈正相关。CD44V 6 在有腋淋巴结转移组表达(43.90%)明显高于无转移组(15.79%)。由表2可见生存<5年的CD44V 6 阳性表达(52.0%)明显高于生存>5年的CD44V 6 的阳性表达(22.86%)，说明CD44V 6 的表达是影响预后的一个独立的重要因素。
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nm23基因已被认为是肿瘤转移抑制基因，对于nm23在转移中的表达情况，国内外报道较多 [1～3] ，认为nm23表达程度与淋巴结受累情况有非常显著相关意义，nm23高表达区域淋巴结转移发生率明显低于低表达者(P<0.05);这表明nm23在乳腺癌淋巴结转移过程中发挥着负性调节作 用。本实验中淋巴结阳性组中nm23的高表达率(51.22%)明显低于淋巴结阴性组(84.21%)，差异有显著性，说明nm23的表达程度与腋淋巴结转移呈负相关，与文献报道一致，本组5年生存率比较，nm23低表达者生存率低，nm23高表达者生存率高，说明nm23也可以做为乳腺癌的一个预后指标。
另外，在恶性肿瘤发生的癌基因研究中，许多学者提出了基因协同作用假说，认为在恶性肿瘤的发生发展和转移阶段，至少有两个或两个以上的不同的异常激活的基因各自发挥了不同的作用。虽然C-erbB-2、CD44V 6 和nm23均被认为可做为独立的预后指标。但本实验分析了C-erbB-2和CD44V 6 阳性表达同时nm23低表达组，淋巴结转移率(93.75%)明显高于C-erbB-2和CD44V 6 阴性表达同时nm23高表达组(33.33%)，且5年生存率(18.75%)明显低于该组(83.33%)，均有统计学意义，因此，联合检测此三种基因的表达，综合分析，能够更准确地判定乳腺癌的转移和预后状态，为治疗方案的合理选择提供可靠依据。
, 百拇医药
参考文献
1 Haynes BF，Telen MJ，Hale MP，et al.SM CD 44 .A molecule involved in leucocyte adherence and T-cell activation.Immunol today，1989，10:423.
2 Aznavoorian S，Murphy AN，Stetle-Stevenson WG，et al.Molecular asˉpects of tumor cell invasion and metastasis.Cancer，1993，71(4):1368-1341.
3 丁洪基，李爱英，李新功，等.乳腺肿瘤中C-erbB-2和nm23蛋白的表达及临床意义.肿瘤防治研究，2000，27(6):444-446.
(收稿日期:2002-08-30)
作者单位:150040哈尔滨医科大学第三临床医学院内科
(编辑于少伟), 百拇医药(李晓莉)